結(jié)核病是全球范圍內(nèi)危害最為嚴重的慢性傳染病之一,在眾多結(jié)核治療藥物中,異煙肼作為一線藥物廣泛使用,導致耐異煙肼結(jié)核發(fā)生率高,危害面廣。本論文著重建立異煙肼耐藥突變檢測體系,并評價其應用,為最終建立起適合臨床應用的異煙肼耐藥突變檢測、指導其正確使用提供合適手段。論文內(nèi)容包括：耐藥結(jié)核病的流行和診治現(xiàn)狀評述（第一章）、實時PCR探針熔解曲線法檢測異煙肼耐藥突變體系的建立和分析性能評價（第二章）、上述體系的多中心臨床評價（第三章）、應用上述技術(shù)進行的異煙肼耐藥突變流行病學調(diào)查（第四章）以及針對最常見katG S315T突變所建立的一種稀有突變定量體系（第五章）,分述如下：第一章緒論首先概述了結(jié)核病的流行現(xiàn)狀、臨床診斷和治療方案,描述了結(jié)核菌的生物學背景,針對性地闡述了異煙肼的作用原理和結(jié)核異煙肼耐藥機制,總結(jié)了結(jié)核耐藥檢測尤其是耐異煙肼檢測的現(xiàn)狀及最新進展,并介紹了本實驗室新近建立的探針熔解曲線分析（PMA）技術(shù)檢測突變的原理,最后提出了本論文的目的、內(nèi)容及意義。第二章異煙肼耐藥突變PMA檢測體系的建立和性能評價已有研究證實的異煙肼耐藥突變相關(guān)區(qū)域包括katG315密碼子、inhA啟動子區(qū)、... 

【文章來源】：廈門大學福建省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    第一節(jié) 結(jié)核病概況
        1.1 結(jié)核病流行現(xiàn)狀
        1.2 結(jié)核菌的分類、形態(tài)與結(jié)構(gòu)
        1.3 結(jié)核病的常規(guī)臨床診斷和治療
    第二節(jié) 異煙肼耐藥概述
        2.1 異煙肼藥物作用機制
        2.2 異煙肼耐藥機制
    第三節(jié) 結(jié)核耐藥突變檢測現(xiàn)狀
        3.1 結(jié)核耐藥傳統(tǒng)和分子檢測平臺
        3.2 結(jié)核耐藥突變分子檢測試劑盒
        3.3 結(jié)核異煙肼耐藥突變分子檢測的意義
    第四節(jié) 熔解曲線分析技術(shù)
        4.1 PMA適用機型
        4.2 PMA在結(jié)核耐藥突變檢測上的應用
        4.3 改良分子信標
        4.4 PMA動力學
    第五節(jié) 本論文的研究目的、內(nèi)容和意義
    參考文獻
第二章 異煙肼耐藥突變PMA檢測體系的建立和性能評價
    第一節(jié) 引言
    第二節(jié) 材料和方法
        2.1 實時PCR擴增的引物及探針的設計
        2.2 菌株和質(zhì)粒來源
        2.3 核酸提取
        2.4 PCR儀器
        2.5 PCR擴增和熔解程序
        2.6 結(jié)果統(tǒng)計
        2.7 測序分析
    第三節(jié) 結(jié)果與分析
        3.1 人工靶序列熔解曲線
        3.2 標本DNA提取方法比較
        3.3 PMA體系的分析靈敏度評價
        3.4 PMA體系的特異性評價
        3.5 PMA體系的NTM特異性評價
        3.6 PMA體系不均一耐藥突變檢測能力評價
        3.7 PMA體系重復性評價
        3.8 PMA體系適用機型評價
    第四節(jié) 討論
    參考文獻
第三章 PMA體系的多中心驗證
    第一節(jié) 引言
    第二節(jié) 材料和方法
        2.1 參考菌株
        2.2 結(jié)核臨床菌株
        2.3 核酸提取
        2.4 PCR儀器
        2.5 PCR擴增和熔解程序
        2.6 統(tǒng)計分析
        2.7 測序分析
    第三節(jié) 結(jié)果與分析
        3.1 PMA體系檢測通量
        3.2 PMA體系判定標準
        3.3 PMA體系檢測結(jié)果與藥敏比較
        3.4 PMA體系檢測結(jié)果與測序結(jié)果比較
        3.5 臨床異煙肼不均一耐藥突變株
    第四節(jié) 討論
    參考文獻
第四章 廈門和漳州兩地異煙肼耐藥的流行病學分析
    第一節(jié) 前言
    第二節(jié) 材料與方法
        2.1 結(jié)核分枝桿菌標準株H37Rv
        2.2 菌株來源
        2.3 核酸提取
        2.4 主要試劑、儀器與PCR擴增和熔解程序
        2.5 判讀標準
        2.6 測序分析
    第三節(jié) 結(jié)果
        3.1 臨床標本檢測流程
        3.2 臨床標本檢測
    第四節(jié) 討論
    參考文獻
第五章 實時PAP定量檢測結(jié)核異煙肼耐藥突變
    第一節(jié) 引言
    第二節(jié) 材料和方法
        2.1 質(zhì)粒和痰標本的來源及提取方法
        2.2 引物設計和合成制備
        2.3 實時PAP反應體系、擴增程序和儀器
        2.4 DNA測序分析
        2.5 統(tǒng)計分析
    第三節(jié) 結(jié)果與分析
        3.1 PAP引物制備驗證
        3.2 實時PAP體系分析靈敏度評價
        3.3 實時PAP體系分析特異性評價
        3.4 實時PAP體系分析選擇性評價
        3.5 實時PAP檢測閾值定義
        3.6 臨床標本檢測
    第四節(jié) 討論
    參考文獻
附表 46株分枝桿菌中文名和拉丁文名索引
英文縮寫索引
博士期間發(fā)表交流論文
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]置換探針實時PCR檢測微生物耐藥突變[D]. 溫慧欣.廈門大學 2006



本文編號：3564504