本文關(guān)鍵詞：ERK抑制劑PD98059對泡狀棘球蚴原頭節(jié)生長的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:本研究以體外培養(yǎng)的泡狀棘球蚴原頭節(jié)為研究對象,將不同濃度的ERK抑制劑PD98059體外作用于泡狀棘球蚴原頭節(jié),探討ERK抑制劑PD98059體外對泡狀棘球蚴原頭節(jié)的作用。方法:麻醉已接種泡狀棘球蚴原頭節(jié)混懸液4-6個月的長爪沙鼠,斷頸處死,在無菌條件下解剖,取出完整的泡狀棘球蚴組織團(tuán)塊,用PBS清洗組織塊3-5遍,研磨過濾,收集過濾液于無菌離心管中,靜置5分鐘,棄上清后用PBS洗滌原頭節(jié)多次至澄清,用生理鹽水制成泡狀棘球蚴原頭節(jié)混懸液經(jīng)腹腔注射接種于倉鼠以制備種鼠,培養(yǎng)4個月后在無菌條件下解剖,取組織塊經(jīng)勻漿器研磨,濾篩過濾收集原頭節(jié),用含10%胎牛血清及雙抗(100U/m L青霉素,鏈霉素100U/m L)的DMEM培養(yǎng)基進(jìn)行體外培養(yǎng),10d后,將不同濃度PD98059(0,6.25、12.5、25、50μmol/L)分別加入泡狀棘球蚴原頭節(jié)中進(jìn)行體外培養(yǎng)。每組加入泡狀棘球蚴原頭節(jié)約2000個。不同濃度PD98059作用不同時間,通過伊紅染色,在光鏡下觀察原頭節(jié)的活力,計數(shù)并計算原頭節(jié)存活率,實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次,繪制原頭節(jié)活力曲線;透射電子顯微鏡下觀察原頭節(jié)超微結(jié)構(gòu)改變;用Western blot檢測原頭節(jié)p-ERK蛋白表達(dá)水平;用Caspase-3活性檢測試劑盒檢測原頭節(jié)內(nèi)caspase-3酶活性;TUNEL檢測試劑盒檢測PD98059作用后原頭節(jié)體內(nèi)的凋亡狀況。結(jié)果:在整個實(shí)驗(yàn)過程中,DMSO對照組泡狀棘球蚴原頭節(jié)的活力變化不大,在第14天其活力為85±0.124%,而將不同濃度PD98059作用于泡狀棘球蚴原頭節(jié)6d后,通過伊紅染色方法測得6.25μmol/L、12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L組泡狀棘球蚴原頭節(jié)的活力分別為53.93±0.082%、51.69±0.297%、38.18±0.254%、28.21±0.241%;連續(xù)觀察,在第14d,6.25μmol/L、12.5μmol/L、25μmol/L PD98059組泡狀棘球蚴原頭節(jié)的活力分別僅為25.48±0.271%、20.1±0.092%、12.17±0.197%,50μmol/LPD98059組殺傷作用最為明顯,泡狀棘球蚴原頭節(jié)的活力為0.53±0.012%。由此證實(shí)隨著PD98059作用時間的延長和濃度的增加,PD98059對原頭節(jié)的生長抑制作用越明顯,具有時間依賴性和劑量依賴性。透射電子顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn),DMSO組泡狀棘球蚴原頭節(jié)合胞體帶結(jié)構(gòu)相對較致密,其內(nèi)囊泡排列較規(guī)則,合胞體帶向外長有微毛,排列整齊,微毛外側(cè)有較厚的糖衣,原頭節(jié)內(nèi)含有多種不同類型的細(xì)胞,實(shí)質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞核大而明顯,核仁居于中央,核內(nèi)異染色質(zhì)較少;而不同濃度PD98059作用后泡狀棘球蚴原頭節(jié)體被合胞體帶變薄,囊泡擴(kuò)張,出現(xiàn)空泡結(jié)構(gòu),微毛缺損甚至消失;一部分實(shí)質(zhì)細(xì)胞基質(zhì)濃縮,核仁消失,核異染色質(zhì)增多,細(xì)胞減少,且出現(xiàn)許多空泡及脂滴。Western bolt檢測顯示,6.25μmol/L、12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L PD98059作用于泡狀棘球蚴原頭節(jié)1d和3d后,均可降低泡狀棘球蚴原頭節(jié)p-ERK蛋白表達(dá)水平。Caspase-3活性檢測發(fā)現(xiàn),與DMSO對照組相比,不同濃度PD98059作用于泡狀棘球蚴原頭節(jié)1d和2d后均可增加原頭節(jié)的caspase-3酶活性。TUNEL試劑盒檢測發(fā)現(xiàn),25μmol/L、50μmol/L PD98059作用于泡狀棘球蚴原頭節(jié)24h后可促使泡狀棘球蚴原頭節(jié)發(fā)生凋亡。結(jié)論:ERK抑制劑PD98059在體外可明顯抑制泡狀棘球蚴原頭節(jié)的生長,有望成為一種新型的抗包蟲藥物。
【關(guān)鍵詞】：ERK抑制劑 泡狀棘球蚴原頭節(jié) 體外實(shí)驗(yàn)
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R532.32
【目錄】：

• 摘要6-7
• Abstract7-8
• 英文縮略語表8-9
• 前言9-13
• 材料與方法13-25
• 1 材料13-18
• 1.1 泡狀棘球蚴原頭節(jié)的采集13
• 1.2 主要試劑13-14
• 1.3 主要儀器設(shè)備14
• 1.4 主要溶液配制14-18
• 2 方法18-25
• 2.1 泡狀棘球蚴原頭節(jié)的獲得及體外培養(yǎng)18
• 2.2 ERK抑制劑PD98059體外作用于原頭節(jié)18
• 2.3 倒置顯微鏡觀察PD98059體外對泡狀棘球蚴原頭節(jié)形態(tài)和活力的影響18-19
• 2.4 透射電子顯微鏡觀察PD98059作用后原頭節(jié)內(nèi)部結(jié)構(gòu)的變化19
• 2.5 Western blot檢測PD98059作用后原頭節(jié)內(nèi)p-ERK蛋白表達(dá)水平19-21
• 2.6 Caspase-3 活性檢測試劑盒檢測藥物作用后原頭節(jié)體內(nèi)caspase-3 酶活性21-23
• 2.7 TUNEL檢測試劑盒檢測PD98059作用后原頭節(jié)體內(nèi)的凋亡狀況23-24
• 2.8 統(tǒng)計學(xué)分析24-25
• 結(jié)果25-32
• 1 PD98059體外作用后的泡球蚴原頭節(jié)的形態(tài)變化25-26
• 2 PD98059對泡狀棘球蚴原頭節(jié)生長的影響26
• 3 PD98059對泡狀棘球蚴原頭節(jié)內(nèi)部超微結(jié)構(gòu)的影響26-28
• 4 PD98059對泡狀棘球蚴原頭節(jié)p-ERK蛋白表達(dá)水平的影響28-29
• 5 PD98059對體外泡狀棘球蚴原頭節(jié)內(nèi)caspase-3 酶活性的影響29-30
• 6 TUNEL檢測PD98059作用后體外泡狀棘球蚴原頭節(jié)的凋亡狀況30-32
• 討論32-36
• 結(jié)論36-37
• 參考文獻(xiàn)37-41
• 文獻(xiàn)綜述41-47
• 參考文獻(xiàn)44-47
• 致謝47-48
• 作者簡介48-49
• 導(dǎo)師評閱表49

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

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  本文關(guān)鍵詞：ERK抑制劑PD98059對泡狀棘球蚴原頭節(jié)生長的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：351277