發(fā)布時間：2017-05-06 04:00

  本文關(guān)鍵詞：補體系統(tǒng)在朊病毒感染動物腦組織中變化規(guī)律的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：朊病毒病(Prion diseases, PrDs),也稱為可傳播性海綿狀腦病(transmissible spongiform encephalopathies, TSEs),是一類侵襲人類及多種哺乳動物的慢性(潛伏期長)、致死(致死率為100%)性神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。其中人類朊病毒病包括庫魯病(Kuru)、克-雅氏病(Creutzfeldt-Jakob disease, CJD)、吉斯特曼-施特勞斯綜合征(Gerstmann-Straussler-Scheinker syndrome,GSS)、致死性家族性失眠癥(Fatal familial insomnia, FFI);動物的朊病毒病包括羊瘙癢病(Scrapie)、牛海綿狀腦病(Bovine spongiform encephalopathy, BSE)、鹿的慢性消耗性疾病(Chronic wasting disease, CWD)等。其感染因子為朊病毒(Prion),所有類型的朊病毒病腦組織中都具有相似的神經(jīng)病理學(xué)改變,包括海綿狀空泡樣變性、淀粉樣斑塊沉積、神經(jīng)元丟失及星形膠質(zhì)細(xì)胞增生等。補體系統(tǒng)(The complement system)由30多種可溶性或膜結(jié)合活性成分組成,是宿主防御病原體感染的第一道防線。補體級聯(lián)反應(yīng)(The complement cascade)以一個錯綜復(fù)雜的免疫監(jiān)測系統(tǒng)形式發(fā)揮作用,主要參與調(diào)理入侵的病原體,招募炎癥細(xì)胞,裂解感染的細(xì)胞以及清除免疫復(fù)合物和凋亡細(xì)胞,從而將固有免疫與獲得性免疫聯(lián)系起來。作為固有免疫不可或缺的一部分,已有研究表明補體系統(tǒng)在PrDs的致病過程中可能發(fā)揮了極為重要的作用。然而,目前補體蛋白在朊病毒感染過程中的表達與活化情況仍有待進一步去闡釋。本研究選取不同方法對多種Scrapie感染的嚙齒動物腦組織中的補體活化狀態(tài),C3和膜攻擊復(fù)合物(membrane attack complex, MAC)的表達、分布及定位情況進行了比較分析。我們的數(shù)據(jù)表明：不同Scrapie株顱內(nèi)感染終末期的倉鼠和C57BL/6小鼠腦組織中總補體活性(CH50, U/ml)明顯高于對照組,通過對263K感染倉鼠不同時間點的檢測發(fā)現(xiàn)Clq的表達量隨潛伏期的延長而明顯增加,且呈時間依賴關(guān)系,提示了PrDs進展過程中經(jīng)典補體途徑持續(xù)而進行性的活化。在263K感染的倉鼠和139A感染的C57BL/6小鼠終末期腦組織中,通過共聚焦顯微鏡檢測可以觀察到C3明顯活化及其與多種CNS細(xì)胞存在不同形式的共定位。對263K感染的倉鼠和139A感染的小鼠各時間點腦組織進行MAC特異性免疫組織化學(xué)動態(tài)分析發(fā)現(xiàn)MAC沉積具有明顯的時間相關(guān)性,這可能提示了朊病毒感染過程中補體級聯(lián)反應(yīng)末端補體成分(terminal complement component, TCC)的持續(xù)性活化。此外,通過組織免疫熒光分析(immunofluorescent assays, IFAs)發(fā)現(xiàn)263K感染的倉鼠和139A感染的小鼠終末期腦組織切片中MAC特異性信號似乎與形態(tài)異常的神經(jīng)元而不是增殖的星形膠質(zhì)細(xì)胞或活化的小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞存在共定位現(xiàn)象。綜上,這些結(jié)果提示補體系統(tǒng)的活化及后續(xù)補體成分在神經(jīng)元的定位可能是朊病毒感染過程中的一個特征性標(biāo)志,這一特征可能最終導(dǎo)致了神經(jīng)退行性病變的發(fā)生。
【關(guān)鍵詞】：朊病毒病 補體 CH50 C1q C3 膜攻擊復(fù)合物 神經(jīng)元
【學(xué)位授予單位】：中國疾病預(yù)防控制中心
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R512.3
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 引言9-15
• 實驗材料15-19
• 1. 主要試劑和耗材15-16
• 2. 分子量標(biāo)準(zhǔn)及試劑盒16
• 3. 朊病毒毒株及其細(xì)胞株16
• 4. 主要儀器及設(shè)備16-17
• 5. 常用緩沖液及溶液的制備17-19
• 實驗方法19-25
• 1. 朊病毒感染動物腦組織樣本的收集19
• 2. 朊病毒感染動物腦組織勻漿的制備19
• 3. 蛋白濃度的測定19-20
• 4. 總補體活性的檢測20
• 5. 蛋白表達的免疫印跡(Western blots)檢測20-21
• 6. 免疫組織化學(xué)(Immunohistochemistry,IHC)檢測21-23
• 7. 免疫熒光分析(Immunofluorescence assays,IFAs)23-24
• 8. 統(tǒng)計學(xué)分析24-25
• 實驗結(jié)果25-38
• 1. 總補體活性(CH50,U/ml)在羊瘙癢因子Scrapie感染的嚙齒動物腦組織中的變化情況25-26
• 2. Scrapie感染的嚙齒類動物腦組織中C1q的表達情況26-28
• 3. 補體成分3在Scrapie感染的嚙齒類動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的表達與定位情況28-30
• 4. MAC在Scrapie感染的動物模型腦組織中的表達與分布情況30-33
• 5. Scrapie感染的動物腦組織中MAC與CNS中各類型細(xì)胞的定位情況33-38
• 討論38-41
• 小結(jié)41-42
• 參考文獻42-45
• 綜述45-54
• 參考文獻51-54
• 縮略詞對照表54-56
• 個人簡歷56-58
• 致謝58-60
• 附錄60

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