本文關(guān)鍵詞：三種蟲媒病毒一步法熒光定量RT-PCR檢測技術(shù)的建立，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：蟲媒病毒(Arbovirus)是一類以吸血昆蟲為傳播媒介的病毒,通過吸血昆蟲叮咬人、家畜及野生動(dòng)物而傳播疾病,具有自然疫源性。該類病毒能引起烈性的人獸共患病,導(dǎo)致大量人畜患病或死亡,造成巨大經(jīng)濟(jì)損失的同時(shí)也嚴(yán)重威脅公共衛(wèi)生安全。病原生態(tài)學(xué)及流行病學(xué)研究數(shù)據(jù)顯示,我國目前存在為數(shù)眾多的蟲媒病毒,為有效開展蟲媒病毒病的偵檢,進(jìn)而在我國防控該類疫病的發(fā)生和流行,建立早期的快速、敏感、特異的實(shí)驗(yàn)室檢測方法至關(guān)重要。與人類疾病關(guān)系密切的蟲媒病毒主要集中于披膜病毒科、黃病毒科、布尼亞病毒科和呼腸孤病毒科的某些成員。本研究通過對(duì)披膜病毒科的委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒(Venezuelan equine encephalitis virus,VEEV)nsp1基因、黃病毒科的蜱傳腦炎病毒(Tick-borne encephalitis virus,TBEV)NS1基因、布尼亞病毒科的新疆出血熱病毒(Xinjiang hemorrhagic fever Virus,XHFV)S基因序列進(jìn)行保守性分析,各設(shè)計(jì)出一套能分別檢測這三種病毒所有亞型的特異性PCR引物和Taqman探針。以體外轉(zhuǎn)錄制備的RNA為模板,通過反應(yīng)體系和條件優(yōu)化,分別建立了檢測這三種蟲媒病毒的一步法熒光定量RT-PCR方法,三種方法的擴(kuò)增效率分別為:VEEV 98.1%、TBEV 98.4%、XHFV100%。對(duì)體外轉(zhuǎn)錄的RNA模板檢測表明:VEEV熒光定量RT-PCR方法的檢測靈敏度達(dá)到3.27×102拷貝/μl,TBEV檢測靈敏度達(dá)到5.82×102拷貝/μl,XHFV檢測靈敏度達(dá)到9.80×102拷貝/μl。與針對(duì)上述病毒的普通PCR方法相比,本研究中三種方法的檢測靈敏度高于已報(bào)道的現(xiàn)有方法或與之相當(dāng)。特異性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,三種方法均具有良好的特異性,與引起相似癥狀或與目標(biāo)病毒同源性較高的同屬病毒不產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增。本研究建立的上述檢測方法為相關(guān)疫病的流行病學(xué)調(diào)查、監(jiān)測和快速診斷提供了有效的技術(shù)手段。
【關(guān)鍵詞】：委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒 蜱傳腦炎病毒 新疆出血熱病毒 一步法熒光定量RT-PCR 檢測
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R535;S852.65
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abatract4-6
• 英文縮寫詞表6-8
• 前言8-10
• 第一篇 文獻(xiàn)綜述10-20
• 第一章 三種蟲媒病毒及其實(shí)驗(yàn)室檢測方法10-16
• 1.1 三種蟲媒病毒概述10-14
• 1.2 三種蟲媒病毒常用實(shí)驗(yàn)室檢測方法14-16
• 第二章 熒光定量RT-PCR的研究進(jìn)展16-20
• 2.1 熒光定量PCR的基本原理16-17
• 2.2 熒光定量PCR的種類17-19
• 2.3 熒光定量PCR的特點(diǎn)19-20
• 第二篇 研究內(nèi)容20-70
• 第一章 委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒一步法熒光定量RT-PCR方法的建立20-41
• 1.1 材料和方法20-29
• 1.2 結(jié)果29-39
• 1.3 討論39-40
• 1.4 小結(jié)40-41
• 第二章 蜱傳腦炎病毒一步法熒光定量RT-PCR方法的建立41-55
• 2.1 材料和方法41-44
• 2.2 結(jié)果44-53
• 2.3 討論53-54
• 2.4 小結(jié)54-55
• 第三章 新疆出血熱病毒一步法熒光定量RT-PCR方法的建立55-70
• 3.1 材料和方法55-58
• 3.2 結(jié)果58-68
• 3.3 討論68-69
• 3.4 小結(jié)69-70
• 結(jié)論70-71
• 參考文獻(xiàn)71-78
• 作者簡介78-79
• 致謝79

【共引文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：三種蟲媒病毒一步法熒光定量RT-PCR檢測技術(shù)的建立，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：347176