發(fā)布時(shí)間：2021-10-11 06:58

　　目的：1、采用分子生物學(xué)方法,利用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）和脫氧核糖核酸（DNA）測序,取曾經(jīng)接種過水痘疫苗并又患水痘者的皮膚破損處水皰液,通過分離、鑒定后獲得的水痘-帶狀皰疹病毒（VZV）分離株,并對VZV ORF62基因進(jìn)行研究分析,由此區(qū)分感染是由V-Oka疫苗株還是野毒株引起的,同時(shí)了解造成突破性水痘的原因。2、應(yīng)用FAMA（膜抗原熒光抗體法）對臨床收集的健康人群接種水痘疫苗前（0d）血清及接種水痘疫苗后（42d）雙份血清進(jìn)行分析,研究人群VZV抗體幾何平均滴度在疫苗接種前后的差異,同時(shí)驗(yàn)證接種疫苗的有效性及安全性,為水痘疫苗免疫防控提供科學(xué)依據(jù)。方法：1、采集臨床診斷為水痘患者的皮膚皰疹液共7例,將其接種到人胚胎成纖維細(xì)胞（MRC-5）,經(jīng)過病毒分離、鑒定后,擴(kuò)增病毒,提取VZV臨床分離株和V-Oka疫苗株的基因組DNA。通過PCR擴(kuò)增VZV開放讀碼框（ORF）62部分基因片段,并利用基因測序的方法對PCR產(chǎn)物進(jìn)行測序分析,結(jié)果與V-Oka疫苗株和野毒株基因序列做對比,從而確定臨床分離株是V-Oka疫苗株還是野毒株。2、招募1-12歲健康兒童共530名,采用隨機(jī)、對照、雙盲方法... 

【文章來源】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)吉林省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
前言
第一篇 文獻(xiàn)綜述
    1.1 水痘及水痘流行病學(xué)概述
    1.2 水痘-帶狀皰疹病毒基因結(jié)構(gòu)及不同毒株的鑒別方法
    1.3 水痘疫苗的歷史及未來發(fā)展趨勢
    1.4 突破性水痘發(fā)生的原因及目前國外采取的預(yù)防方法
    1.5 檢測水痘抗體的方法及研究進(jìn)展
    1.6 本實(shí)驗(yàn)研究的目的與意義
第二篇 研究內(nèi)容
    第一章 水痘疫苗接種后突破性水痘患者的水痘-帶狀皰疹病毒臨床分離株分析
        1.1 材料和方法
            1.1.1 毒株
            1.1.2 細(xì)胞
            1.1.3 載體
            1.1.4 臨床標(biāo)本
            1.1.5 免疫抗體
            1.1.6 實(shí)驗(yàn)試劑
            1.1.7 試劑盒
            1.1.8 主要儀器設(shè)備
            1.1.9 溶液配制
            1.1.10 VZV病毒臨床標(biāo)本的采集
            1.1.11 病毒分離
            1.1.12 病毒鑒定
            1.1.13 引物的設(shè)計(jì)
            1.1.14 病毒DNA提取
            1.1.15 聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增病毒基因片段
            1.1.16 瓊脂糖凝膠產(chǎn)物回收試劑盒純化PCR產(chǎn)物
            1.1.17 感受態(tài)細(xì)胞的制備
            1.1.18 質(zhì)粒和DNA片段的連接
            1.1.19 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化
            1.1.20 重組質(zhì)粒的篩選、鑒定與提取
            1.1.21 重組質(zhì)粒的電泳檢測、酶切及PCR鑒定
            1.1.22 測序鑒定
        1.2 結(jié)果
            1.2.1 病毒分離結(jié)果
            1.2.2 間接免疫熒光染色后結(jié)果
            1.2.3 PCR擴(kuò)增ORF62部分基因片段電泳圖
            1.2.4 目的基因的回收
            1.2.5 重組質(zhì)粒電泳檢測圖
            1.2.6 重組質(zhì)粒酶切電泳圖
            1.2.7 重組質(zhì)粒PCR后電泳檢測結(jié)果
            1.2.8 測序結(jié)果分析
        1.3 討論
        1.4 小結(jié)
    第二章 水痘疫苗接種前后免疫應(yīng)答情況及安全性分析
        2.1 材料與方法
            2.1.1 病毒
            2.1.2 血清
            2.1.3 細(xì)胞
            2.1.4 實(shí)驗(yàn)試劑
            2.1.5 溶液的配制
            2.1.6 抗體
            2.1.7 實(shí)驗(yàn)儀器
            2.1.8 實(shí)驗(yàn)步驟
            2.1.9 免疫應(yīng)答結(jié)果判定
            2.1.10 抗體水平檢測及療效評定標(biāo)準(zhǔn)
            2.1.11 不良反應(yīng)觀察內(nèi)容
            2.1.12 局部不良反應(yīng)
            2.1.13 全身不良反應(yīng)
            2.1.14 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
        2.2 結(jié)果
            2.2.1 FAMA法觀察結(jié)果與陰陽性鑒定結(jié)果
            2.2.2 受試者性別情況分析
            2.2.3 受試者年齡情況分析
            2.2.4 受試者不同年齡組免前抗體滴度統(tǒng)計(jì)
            2.2.5 受試者免前易感者和非易感者情況分析
            2.2.6 易感人群接種不同疫苗后免疫前后抗體情況對比
            2.2.7 非易感人群接種不同疫苗后免疫前后抗體情況對比
            2.2.8 局部不良反應(yīng)癥狀發(fā)生情況
            2.2.9 全身不良反應(yīng)癥狀發(fā)生情況
        2.3 討論
        2.4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
英文縮略詞表
作者簡歷
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]水痘突發(fā)公共衛(wèi)生事件及其突破病例流行病學(xué)特征分析[J]. 盧莉,索羅丹,富繼業(yè),吳勁,蔡軍芳,崔長弘,李彥麗,白宏偉,唐田,馬蕊.  疾病監(jiān)測. 2010(02)
[2]水痘疫苗使用現(xiàn)狀及研究進(jìn)展[J]. 王鈺寧,井申榮.  中國生物制品學(xué)雜志. 2008(07)
[3]長生科技凍干水痘減毒活疫苗的安全性及免疫原性研究[J]. 陸小軍,周偉忠,顧凱風(fēng),朱鳳才.  東南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2008(03)
[4]兩種水痘減毒活疫苗免疫持久性的對比研究[J]. 陳思玉,趙久霞.  遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2008(02)
[5]建立膜抗原熒光抗體試驗(yàn)評價(jià)北京株凍干水痘疫苗免疫效果[J]. 謝云,李秀玲,劉立新,何薇薇,張中洋,張晨,宋衍燕,陳海平,周鐵群.  微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展. 2005(02)
[6]國產(chǎn)凍干水痘減毒活疫苗免疫原性研究與應(yīng)用[J]. 王志軍,錢穎,張彥,王樹巧,謝廣中.  微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展. 2000(04)

碩士論文
[1]水痘—帶狀皰疹病毒臨床分離株基因特征分析[D]. 甘霖.安徽醫(yī)科大學(xué) 2010
[2]水痘疫苗免疫效果檢測方法的初步建立[D]. 宋穎麗.昆明理工大學(xué) 2009
[3]水痘—帶狀皰疹病毒疫苗株在Vero細(xì)胞中傳代適應(yīng)及ELISA檢測血清IgG研究[D]. 龐宇.天津大學(xué) 2006



本文編號：3430017