本文關(guān)鍵詞：利用COⅠ和Cyt b分析青南地區(qū)棘球絳蟲分離株基因型及其蛋白質(zhì)表達Western-blot初步分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 1.運用棘球絳蟲線粒體細胞色素C氧化酶亞單位Ⅰ(COⅠ)基因及線粒體細胞色素B(Cyt B)基因?qū)η嗪Ｊ≈虚g宿主體內(nèi)棘球絳蟲行基因多態(tài)性分析,確定青海省棘球絳蟲基因型。2.初步分析棘球蚴與泡球蚴的蛋白表達差異,為包蟲病診斷抗原、候選疫苗抗原、藥物作用靶分子抗原的分離、鑒定提供理論依據(jù)。方法 1.利用適合的DNA分析軟件對40條不同中間宿主體內(nèi)的棘球絳蟲(14條人體分離株、21條羊肝分離株、5條羊肺分離株)COⅠ基因及43條人體分離株Cyt B基因行同源性、堿基組成性分析并計算序列間的遺傳距離,繪制細粒棘球絳蟲的單倍型網(wǎng)絡(luò)圖,構(gòu)建NJ樹與Bayesian樹。2.以分離的不同人體細粒棘球蚴的囊壁、囊液、原頭節(jié)及泡球蚴粗提取蛋白為抗原,采用SDS-PAGE方法分析細粒棘球蚴不同人體分離株的蛋白表達,用已確診包蟲病患者血清作為一抗,采用Western-blot方法分析兩型棘球絳蟲的特異性蛋白。結(jié)果 1.基于COⅠ基因及Cyt B基因成功構(gòu)建棘球絳蟲單倍型網(wǎng)絡(luò)圖及系統(tǒng)發(fā)育樹。2.在816個COⅠ基因核苷酸位點中,241個可變位點,149個簡約信息位點。A、T、C、G堿基頻率分別為0.163、0.491、0.103、0.242。所有序列平均遺傳距離為0.068,豬帶絳蟲和CH3之間遺傳距離最大0.204。3.人體分離株Cyt B基因的541個核苷酸序列,211個可變位點,127個簡約信息位點。堿基頻率:A=0.191,C=0.101,G=0.24,T=0.468。所有序列平均遺傳距離為0.054,豬帶絳蟲和CH14、ZH22之間遺傳距離為0.311。4.不同人體細粒棘球蚴原頭節(jié)蛋白條帶豐富,囊壁和囊液蛋白無明顯差異,117KD、49KD、34KD附近均出現(xiàn)較亮的特異性條帶。5.泡球蚴蛋白在72KD、55KD、26KD附近出現(xiàn)濃集條帶,Western-blot分析結(jié)果示:55KD和26KD附近出現(xiàn)特異性條帶。結(jié)論 1.基于COⅠ基因及Cyt B基因分析不同中間宿主體內(nèi)的棘球絳蟲分離株,共鑒定兩種蟲體,分別為細粒棘球絳蟲與多房棘球絳蟲。2.細粒棘球絳蟲均為G1基因型,用于分析的單倍體型在NJ樹與Bayesian樹中呈現(xiàn)梳齒狀,存在種內(nèi)突變。3.CH14為青藏高原的優(yōu)勢單倍型。4.細粒棘球蚴蛋白在不同人體之間表達差異不大,但同一蟲體之間囊壁、原頭節(jié)、囊液蛋白表達差異大。5.泡球蚴蛋白在不同地區(qū)、不同人體之間表達不同。
【關(guān)鍵詞】：COⅠ基因 Cyt B 基因 包蟲病
【學(xué)位授予單位】：青海大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R532.32
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 主要符號對照表11-12
• 第1章 前言12-16
• 第2章 基于COⅠ基因?qū)η嗄系貐^(qū)棘球絳蟲的系統(tǒng)發(fā)育分析16-29
• 2.1 材料和方法16-19
• 2.1.1 材料16-17
• 2.1.1.1 樣本來源16
• 2.1.1.2 試驗儀器16-17
• 2.1.1.3 試劑17
• 2.1.1.4 試劑配制17
• 2.1.2 方法17-19
• 2.1.2.1 基因組DNA抽提和PCR擴增、測序17-18
• 2.1.2.2 COⅠ基因序列比對分析18-19
• 2.2 結(jié)果19-27
• 2.2.1 瓊脂糖凝膠電泳分析結(jié)果19-20
• 2.2.2 COⅠ基因序列檢測結(jié)果20-27
• 2.2.2.1 序列同源性的分析20
• 2.2.2.2 序列堿基組成及飽和性檢驗20-22
• 2.2.2.3 棘球絳蟲的單倍型分析22-24
• 2.2.2.4 發(fā)育樹的構(gòu)建24-27
• 2.3 討論27-28
• 2.4 小結(jié)28-29
• 第3章 基于Cyt B基因?qū)η嗪２貐^(qū)棘球絳蟲系統(tǒng)發(fā)育分析29-37
• 3.1 材料和方法29-31
• 3.1.1 材料29-30
• 3.1.1.1 樣本來源29
• 3.1.1.2 儀器29
• 3.1.1.3 試劑29-30
• 3.1.1.4 試劑配制30
• 3.1.2 方法30-31
• 3.1.2.1 基因組DNA抽提30
• 3.1.2.2 PCR擴增基因組DNA30
• 3.1.2.3 Cyt B基因序列比對分析30-31
• 3.2 結(jié)果31-35
• 3.2.1 Cyt B基因瓊脂糖凝膠電泳分析結(jié)果31
• 3.2.2 Cyt B基因序列檢測結(jié)果31-35
• 3.2.2.1 序列同源性的分析31
• 3.2.2.2 序列堿基組成及飽和性檢驗31-33
• 3.2.2.3 單倍型分析33-34
• 3.2.2.4 發(fā)育樹的構(gòu)建34-35
• 3.3 討論35-36
• 3.4 小結(jié)36-37
• 第4章 人體棘球蚴與泡球蚴蛋白表達差異初步分析37-47
• 4.1 材料與方法37-43
• 4.1.1 材料37-40
• 4.1.1.1 試驗標本37
• 4.1.1.2 主要儀器37-38
• 4.1.1.3 試驗試劑38
• 4.1.1.4 試劑配制38-40
• 4.1.2 試驗標本的分離40-43
• 4.1.2.1 棘球蚴分離方法40
• 4.1.2.2 蛋白的提取40-41
• 4.1.2.3 蛋白的定量41
• 4.1.2.4 SDS-PAGE凝膠電泳41-42
• 4.1.2.5 Western-blot分析42-43
• 4.2 結(jié)果43-44
• 4.2.1 不同人體細粒棘球蚴蛋白考馬斯亮藍染色和Western-blot分析43
• 4.2.2 不同地區(qū)泡球蚴蛋白考馬斯亮藍染色和Western-blot分析43-44
• 4.3 討論44-46
• 4.4 小結(jié)46-47
• 參考文獻47-52
• 全文總結(jié)52-53
• 今后的展望53-54
• 創(chuàng)新點總結(jié)54-55
• 致謝55-56
• 附錄56-65
• 綜述65-75
• 參考文獻70-75
• 個人簡歷75

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陶鈐;甘肅地區(qū)100條實驗家犬棘球絳蟲調(diào)查[J];西北國防醫(yī)學(xué)雜志;1986年04期

2 Thompson RCA;Lymbery AJ;陳偉;;棘球絳蟲:生物學(xué)和株的變異[J];國外醫(yī)學(xué)(寄生蟲病分冊);1991年06期

3 王維;人體感染少頭棘球絳蟲第2例病例報告[J];國外醫(yī)學(xué)(寄生蟲病分冊);1996年03期

4 郝桂英;;棘球絳蟲分子分類學(xué)研究進展[J];中國畜牧獸醫(yī);2012年05期

5 曾誠;;青海省青南高原棘球絳蟲新種-石渠棘球絳蟲的形態(tài)學(xué)觀察[J];現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué);2013年07期

6 薛弘燮,吳炳洪,諸惠英,丁兆勛;新疆犬、狐自然志染和實驗志染棘球絳蟲的觀(宀叉)[J];新疆醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1978年02期

7 蔣則孝;;亞庫梯亞中部棘球絳蟲疫源地血清流行病學(xué)研究[J];國外醫(yī)學(xué)(寄生蟲病分冊);1984年02期

8 孫長美;日本北海道棘球絳蟲疫情簡報[J];中國人獸共患病雜志;1987年01期

9 劉風(fēng)潔;;綜述——歐洲的棘球絳蟲蟲株[J];地方病譯叢;1989年03期

10 尤紀青;;次氯酸鈉作為一種棘球絳蟲的殺卵劑[J];國外醫(yī)學(xué)(寄生蟲病分冊);1989年01期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 朵紅;青海省東南部棘球蚴病流行病學(xué)及棘球絳蟲基因多態(tài)性研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 倪興維;犬棘球絳蟲糞LAMP檢測方法的建立和應(yīng)用[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2012年

2 張高天;棘球絳蟲的DNA條形碼可行性分析及高原鼠兔棘球絳蟲感染率初步研究[D];華東師范大學(xué);2012年

3 張瑞妮;構(gòu)建pTWIN1-EgAgB8/3原核表達系統(tǒng)和抗rEgAgB8/3多抗制備及其診斷價值評估[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2013年

4 馮凱;青海棘球絳蟲mtDNACOI和NDI基因多態(tài)性分析[D];青海大學(xué);2013年

5 毋德芳;利用COⅠ和Cyt b分析青南地區(qū)棘球絳蟲分離株基因型及其蛋白質(zhì)表達Western-blot初步分析[D];青海大學(xué);2015年

  本文關(guān)鍵詞：利用COⅠ和Cyt b分析青南地區(qū)棘球絳蟲分離株基因型及其蛋白質(zhì)表達Western-blot初步分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號：340715