本文關(guān)鍵詞：25（OH）D3對(duì)結(jié)核激活DCs成熟和功能的調(diào)節(jié)作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景結(jié)核病是世界上最致命的傳染病之一威脅人類健康安全。在全世界脊柱結(jié)核是僅次于艾滋病的致死性疾病,2014年世界衛(wèi)生組織報(bào)道:2013年約900萬人患結(jié)核病,其中約有150萬人因結(jié)核致死,全球每年至少花費(fèi)約80億美元來應(yīng)對(duì)結(jié)核病的流行,目前結(jié)核患者數(shù)出現(xiàn)耐藥、耐多種藥[1]甚至廣泛耐藥據(jù)統(tǒng)計(jì)在全球正在治療與新發(fā)的結(jié)核病例中估計(jì)MDR-TB約48萬人,其中約有9%的病例為XDR-TB,這使結(jié)核的個(gè)體化化療面臨嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。進(jìn)一步探討結(jié)核的免疫機(jī)制,為有效的治療結(jié)核提供理論依據(jù)。在西方國(guó)家早期治療結(jié)核策略上,將維生素D用于抗結(jié)核治療,在一些療養(yǎng)院中廣泛應(yīng)用,在當(dāng)時(shí)結(jié)核的治療取得了很好效果,但隨著抗結(jié)核藥物研發(fā)與臨床應(yīng)用,25(OH)D3很少被用來抗結(jié)核治療[2,3]。近年來結(jié)核耐藥被被診斷。許多患者在抗結(jié)核的藥物使用過程中出現(xiàn)結(jié)核耐藥[4,5],常規(guī)的抗結(jié)核藥物治療效果不明顯。25(OH)D3的在結(jié)核免疫中的作用作用機(jī)制,當(dāng)前已經(jīng)逐漸引起重視。雖然關(guān)于25(OH)D3與結(jié)核免疫的的相關(guān)文獻(xiàn)研究已經(jīng)很多,但在25(OH)D3對(duì)結(jié)核的免疫及在結(jié)核臨床治療中存在很多爭(zhēng)議,沒有公認(rèn)一致的結(jié)論。有些報(bào)道稱25(OH)D3不僅能提高臨床治療結(jié)核療效,還能改善結(jié)核患者的影像學(xué)表現(xiàn)[6]。然而,有些報(bào)道認(rèn)為25(OH)D3在臨床中對(duì)提高結(jié)核患者的臨床效果沒有發(fā)揮作用。因此,25(OH)D3在結(jié)核感染分子免疫與臨床抗結(jié)核治療的作用需要更深入的研究。25(OH)D3在結(jié)核桿菌感染的免疫過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用[9,10]。25(OH)D3影響結(jié)核固有免疫的機(jī)制已經(jīng)被明確研究[7,8]有關(guān)于25(OH)D3在結(jié)核獲得性免疫中具體機(jī)制的研究還沒有深入。結(jié)核感染后的獲得性免疫啟動(dòng)過程中,樹突狀細(xì)胞(Dendritic cells,DCs)作為機(jī)體重要的抗原提呈細(xì)胞發(fā)揮重要作用[9,10],樹突狀細(xì)胞在結(jié)核免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。雖然25(OH)D3在樹突狀細(xì)胞成熟中的作用已有廣泛報(bào)道[18],但結(jié)核桿菌感染時(shí),25(OH)D3對(duì)樹突狀細(xì)胞影響機(jī)制的研究還不夠深入。因此,本研究的主要目的為評(píng)估小鼠骨髓來源樹突狀細(xì)胞在25(OH)D3存在與不存在的情況下,25(OH)D3對(duì)結(jié)核桿菌刺激成熟的樹突狀細(xì)胞成熟和調(diào)節(jié)功能的差異研究。1、建立實(shí)驗(yàn)組、陽性對(duì)照組、陰性對(duì)照組:維生素d正常組、維生素d充足組和維生素d缺乏組,酶聯(lián)免疫復(fù)合技術(shù)方法檢測(cè)各組血清中25(oh)d3水平。2、小鼠骨髓細(xì)胞來源樹突狀細(xì)胞的培養(yǎng)及鑒定:掃描電鏡、光鏡觀察細(xì)胞形態(tài),細(xì)胞流式測(cè)量mhc-ii,cd11c,cd86,cd80的表達(dá)。3、檢測(cè)不同條件的三組小鼠骨髓源性樹突狀細(xì)胞表達(dá)mhc-ii、cd11c、cd86和cd80的差異。4、測(cè)量三組小鼠脾臟淋巴細(xì)胞混合反應(yīng)對(duì)t淋巴細(xì)胞增殖的影響,cd4+t、cd8+t細(xì)胞各自百分比、cd4+t/cd8+t細(xì)胞比值。結(jié)果1、25(oh)d3在正常組、vd-組和vd+組三組的數(shù)據(jù)比較中,正常組和vd+組無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在vd-組中25(oh)d3明顯少于正常組。2、通過小鼠骨髓細(xì)胞培養(yǎng)分化dc細(xì)胞鏡下能觀察到典型的樹枝狀突起,細(xì)胞流式檢測(cè)表面分子cd80、mhc-Ⅱ、cd86、cd11c的陽性率平均為84.69%、89.26%、58.94%、87.23%(fig.8);dcs細(xì)胞的陽性率高。3、cd11c的比例在對(duì)照組、25(oh)d3和25(oh)d3缺乏組分別83.99%±3.20%,81.13%±5.18%and84.46±2.60;共刺激分子的表達(dá)在對(duì)照組,25(oh)d3和25(oh)d3缺乏組分別是:87.62%±3.23%and84.99%±3.17%85.44±3.41;cd80:85.28%±7.39%and85.11%±8.02%、87.41±6.64;cd86:66.97%±8.29%and52.18%±8.52%、70.87±7.83;對(duì)照組中cd86的表達(dá)顯著高于25(oh)d3組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);cd11c、mhc-ii、cd80、cd86平均熒光強(qiáng)度在對(duì)照組、25(oh)d3組和缺乏組分別是:cd11c:445.19±129.82and444.21±109.28、439.23±127.64;mhc-ii:1102.16±371.02and681.62±292.71、1012.21±365.12,cd80:350.11±101.18and341.01±113.27、362.08±110.13;cd86:149.18±29.13and139.15±25.91、153.36±26.32,其中對(duì)照組的mhc-ii的平均熒光強(qiáng)度值顯著大于25(oh)d3組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(p0.05)4、缺乏組的樹突狀細(xì)胞明顯提高了t細(xì)胞的增殖水平,檢測(cè)cd4+tandcd8+t的分布,cd4+t在對(duì)照組、25(oh)d3和缺乏組分別是:27.11±0.50and25.31±0.32、33.88±0.52。cd8+t在對(duì)照組、25(oh)d3和缺乏組分別是:13.12±0.59and11.50±0.55、17.02±0.52;cd4+t/cd8+t的比值在25(oh)d3組高于對(duì)照組,缺乏組低于25(oh)d3組。方法結(jié)論1、利用雙因素控制小鼠紫外線光照及食物攝入維生素D成功建立維生素D缺乏動(dòng)物模型。2、結(jié)核桿菌感染時(shí),25(OH)D3降低了樹突狀細(xì)胞表面共刺激分子MHC-II和CD86的表達(dá),從而減弱了其抗原提呈能力,抑制了T細(xì)胞的增殖。
【關(guān)鍵詞】：獲得性免疫 樹突狀細(xì)胞 結(jié)核 維生素D
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R52
【目錄】：

• 縮略語表4-5
• 英文摘要5-8
• 中文摘要8-11
• 第一章 前言11-14
• 第二章 25 (OH) D3缺乏小鼠模型的建立14-23
• 2.1 材料與方法14-21
• 2.2 結(jié)果21
• 2.3 討論21-23
• 第三章 25(OH)D3對(duì)結(jié)核激活DCs成熟和功能的調(diào)節(jié)作用研究23-45
• 3.1 DCs的培養(yǎng)及鑒定23-34
• 3.1.1 小鼠骨髓來源DCs的培養(yǎng)方法23-34
• 3.1.1.1 材料與方法24-29
• 3.1.1.2 結(jié)果29-32
• 3.1.1.3 討論32-34
• 3.2 25(OH)D3對(duì)結(jié)核激活DCs成熟和功能的調(diào)節(jié)作用研究34-45
• 3.2.1 材料與方法34-39
• 3.2.2 結(jié)果39-44
• 3.2.3 討論44-45
• 全文結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-52
• 文獻(xiàn)綜述 結(jié)核病與維生素D52-61
• 參考文獻(xiàn)56-61
• 攻讀碩士期間發(fā)表論文61-62
• 致謝62

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：340552