本文關(guān)鍵詞：侵襲性念珠菌感染中抗原特異性體液免疫回憶應(yīng)答研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景有研究顯示,侵襲性念珠菌病(invasive candidiasis,IC)早期,病人體內(nèi)與侵襲性感染有關(guān)的優(yōu)勢抗原Ig G抗體水平升高,可能適用于IC的早期診斷。本研究組前期工作也發(fā)現(xiàn),80%以上的IC病人可檢出與侵襲性感染相關(guān)的幾種優(yōu)勢抗原(如烯醇化酶,等)Ig G抗體水平升高,其中50%以上的病人血清抗體升高甚至早于念珠菌血培養(yǎng)陽性結(jié)果。念珠菌是常見的條件致病菌,經(jīng)常在人體寄生或定植。人體免疫系統(tǒng)有很多機(jī)會(huì)受到各種念珠菌抗原的刺激而產(chǎn)生免疫應(yīng)答。因此推測,侵襲性念珠菌感染時(shí)優(yōu)勢抗原的Ig G抗體水平早期快速升高,可能是正常狀態(tài)下念珠菌定植引起的回憶性體液免疫應(yīng)答所致,但尚無實(shí)驗(yàn)證據(jù)。目的用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明經(jīng)歷念珠菌定植或寄生的動(dòng)物,在遭受侵襲性感染后,Ig G抗體水平早期快速升高,是由于特異性體液免疫記憶細(xì)胞短時(shí)大量增殖所致。并測定侵襲性念珠菌病病人血清三類抗體水平,對(duì)預(yù)測結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證。方法模擬自然情況下侵襲性念珠菌感染的情形,先建立小鼠口腔念珠菌定植模型,再經(jīng)腹腔注射念珠菌孢子造成侵襲性感染。檢測免疫正常和免疫抑制狀態(tài)的感染小鼠脾臟白念珠菌烯醇化酶(Enolase,Eno)特異性記憶B細(xì)胞(memory B cell,Bm)的數(shù)量以及外周血Ig G、Ig M和Ig A類抗體水平,并與未經(jīng)念珠菌定植的侵襲性感染小鼠的相應(yīng)指標(biāo)進(jìn)行比較。用ELISA方法檢測患者血清中Eno-Ig G、Ig M和Ig A抗體水平,并對(duì)三種類型抗體水平進(jìn)行比較。結(jié)果(1)成功建立了檢測Eno抗原特異性Bm的ELISPOT方法并對(duì)其進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果顯示,陽性對(duì)照孔和Eno特異抗原孔的最佳細(xì)胞數(shù)分別為10,000/孔和500,000/孔,生物素化Eno的最適使用濃度為2μg/m L。(2)經(jīng)歷念珠菌定植的小鼠,不論是否接受免疫抑制處理,遭受侵襲性感染第7天,脾臟Eno抗原特異性Bm頻數(shù)均顯著多于未經(jīng)歷念珠菌定植的小鼠和僅經(jīng)歷定植而未遭受侵襲性感染的小鼠(P0.01)。(3)受到侵襲性感染第7天,經(jīng)歷念珠菌定植小鼠血清Eno-Ig G抗體水平顯著升高。(4)Eno-Ig G抗體水平與抗原特異性Bm頻數(shù)呈正相關(guān)(r=0.737,P0.01)。(5)ELISA方法檢測IC患者血清三種類型抗體結(jié)果顯示,Eno-Ig G抗體陽性率顯著高于Eno-Ig A抗體和Eno-Ig M抗體陽性率,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=29.851;P0.01;χ2=21.744;P0.01)。結(jié)論1.經(jīng)歷念珠菌定植的動(dòng)物,在受到侵襲性感染后特異性記憶細(xì)胞短時(shí)大量增殖導(dǎo)致優(yōu)勢抗原Eno的Ig G抗體水平快速升高。2.僅有念珠菌定植而無侵襲性感染的小鼠,優(yōu)勢抗原Eno的Ig G抗體水平無明顯變化。3.IC病人侵襲性感染早期即可在血清中檢測到抗Eno抗體升高,以Ig G類抗體為主。4.優(yōu)勢抗原Eno-Ig G抗體測定,可用于侵襲性念珠菌病的早期血清學(xué)診斷。
【關(guān)鍵詞】：念珠菌感染 體液免疫 記憶B細(xì)胞 ELISPOT
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R446.6;R519.3
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• ABSTRACT8-15
• 第一章 緒論15-23
• 1.1 白念珠菌感染免疫應(yīng)答的研究進(jìn)展15-17
• 1.1.1 白念珠菌感染的固有免疫應(yīng)答15-16
• 1.1.2 白念珠菌感染的細(xì)胞免疫應(yīng)答16-17
• 1.1.3 白念珠菌感染的體液免疫應(yīng)答17
• 1.2 抗體用于侵襲性念珠菌病的血清學(xué)診斷17-18
• 1.3 白念珠菌烯醇化酶18-19
• 1.4 免疫回憶應(yīng)答及記憶B細(xì)胞19-20
• 1.5 檢測記憶B細(xì)胞的ELISPOT技術(shù)20-21
• 1.6 本論文研究的目的、意義、方法及實(shí)驗(yàn)方案的設(shè)計(jì)21-23
• 1.6.1 研究目的21
• 1.6.2 研究意義21-22
• 1.6.3 研究方法及技術(shù)22
• 1.6.4 研究方案及技術(shù)路線22-23
• 第二章 念珠菌Eno特異性記憶B細(xì)胞檢測方法的建立23-36
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料24-29
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與飼養(yǎng)24
• 2.1.2 質(zhì)粒與菌株24
• 2.1.3 主要試劑24-25
• 2.1.4 主要溶液配制25-28
• 2.1.5 主要儀器28-29
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法29-31
• 2.2.1 生物素化Eno抗原的制備29
• 2.2.2 BCA法定量蛋白濃度29-30
• 2.2.3 白念珠菌孢子懸液的制備30
• 2.2.4 小鼠口腔白念珠菌定植與腹腔感染30
• 2.2.5 小鼠脾淋巴細(xì)胞的收集和刺激30-31
• 2.2.6 Eno抗原特異性Bm的ELISPOT方法的建立31
• 2.2.7 Eno抗原特異性Bm的ELISPOT方法的優(yōu)化31
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-34
• 2.3.1 小鼠口腔白念珠菌定植結(jié)果32
• 2.3.2 Eno抗原特異性Bm的ELISPOT方法的優(yōu)化32-34
• 2.4 討論34-36
• 第三章 侵襲性念珠菌病小鼠Eno特異性體液免疫檢測36-49
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料36-38
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與飼養(yǎng)36
• 3.1.2 菌株36
• 3.1.3 主要試劑36-37
• 3.1.4 主要溶液配制37
• 3.1.5 主要儀器37-38
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法38-41
• 3.2.1 白念珠菌孢子懸液的制備38
• 3.2.2 念珠菌定植38
• 3.2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組38-39
• 3.2.4 免疫抑制39
• 3.2.5 白細(xì)胞計(jì)數(shù)39
• 3.2.6 念珠菌感染39
• 3.2.7 小鼠血清的采集39
• 3.2.8 Eno-IgG、IgM和IgA抗體的檢測39-40
• 3.2.9 脾淋巴細(xì)胞的收集和刺激40
• 3.2.10 Eno抗原特異性Bm的ELISPOT檢測40-41
• 3.2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析41
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果41-46
• 3.3.1 小鼠口腔白念珠菌定植結(jié)果41
• 3.3.2 免疫抑制組小鼠白細(xì)胞數(shù)變化41-42
• 3.3.3 念珠菌感染前后抗體水平變化42-44
• 3.3.4 ELISPOT檢測Eno抗原特異性Bm的結(jié)果44-45
• 3.3.5 Eno-IgG抗體水平與Eno抗原特異性Bm頻數(shù)的相關(guān)性分析45-46
• 3.4 討論46-49
• 第四章 侵襲性念珠菌病患者血清不同類型抗體的檢測49-57
• 4.1 實(shí)驗(yàn)材料49-50
• 4.1.1 主要試劑49
• 4.1.2 主要儀器49
• 4.1.3 血清標(biāo)本收集49
• 4.1.4 各種無菌部位標(biāo)本的病原體培養(yǎng)送檢49-50
• 4.1.5 研究對(duì)象納入標(biāo)準(zhǔn)50
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法50-51
• 4.2.1 ELISA測定50-51
• 4.2.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析51
• 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果51-55
• 4.3.1 Eno-IgG、IgA、IgM抗體測定結(jié)果52-53
• 4.3.2 不同類型抗體陽性率的比較53
• 4.3.3 不同類型抗體動(dòng)態(tài)變化53-55
• 4.4 討論55-57
• 第五章 主要結(jié)論57-58
• 參考文獻(xiàn)58-64
• 致謝64-65
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的文章與參加的學(xué)術(shù)會(huì)議65
• 一、攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的文章65
• 二、攻讀碩士學(xué)位期間參加的學(xué)術(shù)會(huì)議65

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  本文關(guān)鍵詞：侵襲性念珠菌感染中抗原特異性體液免疫回憶應(yīng)答研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：328471