本文關(guān)鍵詞：SIV感染血腦屏障的機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：艾滋病是由人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus, HIV)感染引起的獲得性免疫缺陷綜合征。HIV進(jìn)入人體后,除攻擊免疫系統(tǒng)外,還常常伴隨有嚴(yán)重的神經(jīng)侵襲性,常見星形細(xì)胞數(shù)目增加以及血管周圍巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)。臨床癥狀覆蓋了從急性腦病到AIDS癡呆綜合征(也稱HIV癡呆或HIV相關(guān)感知/運(yùn)動(dòng)綜合征)等多種異常。多年的動(dòng)物疾病模型研究也發(fā)現(xiàn),SIV感染猴也可以引起類似的嚴(yán)重的腦神經(jīng)癥狀。目前研究表明,HIV/SIV在感染早期即可穿透血腦屏障(BBB),侵入中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)。關(guān)于其感染機(jī)制,存在幾種不同的假說,其中比較公認(rèn)的是：(1)病毒直接侵入機(jī)制；(2)單核-巨噬細(xì)胞侵入假說;(3)T細(xì)胞誘導(dǎo)假說；(4)液相入胞假說等。簡(jiǎn)單來說,即病毒以游離病毒的形式或以感染病毒的細(xì)胞為載體,藉由上皮細(xì)胞或細(xì)胞間緊密連接處進(jìn)入并感染中樞神經(jīng)系統(tǒng)。由此可見,血腦屏障的主要組成部分——腦血管內(nèi)皮細(xì)胞是病毒進(jìn)入神經(jīng)系統(tǒng)的第一道屏障。那么,內(nèi)皮細(xì)胞在這個(gè)過程中是否對(duì)病毒的侵入起到了阻擋作用,對(duì)病毒的阻擋是否存在選擇性?本研究從以下三部分對(duì)HIV/SIV通過腦血管內(nèi)皮細(xì)胞的可能機(jī)制進(jìn)行了研究。第一部分：不同來源SIV單克隆毒株的分離與gp120序列比對(duì)。在SIV感染恒河猴中我們發(fā)現(xiàn),一些恒河猴出現(xiàn)了典型的AIDS相關(guān)腸病癥狀,而另一些則出現(xiàn)了顯著的中樞神經(jīng)病理學(xué)變化即AIDS腦病癥狀。這些臨床癥狀的差異是否與病毒序列的變異,尤其是在病毒與靶細(xì)胞的結(jié)合感染過程中起到關(guān)鍵的作用的Gp120蛋白變異相關(guān)。了解不同嗜性病毒準(zhǔn)種的包膜Gp120蛋白序列之間的差異特點(diǎn),將對(duì)SIV感染形成AIDS相關(guān)腸病和腦病的分子機(jī)制研究起到重大推進(jìn)作用。從不同來源——腸道癥狀感染猴來源和神經(jīng)癥狀感染猴來源——分離病毒單克隆毒株,比較這兩種來源病毒的序列差異,發(fā)現(xiàn)SIV病毒在體內(nèi)的變異進(jìn)化具有一定的趨向性,腸道癥狀感染猴與神經(jīng)癥狀感染猴來源的毒株其包膜蛋白Gp120的序列具有顯著差異。兩種來源毒株Gp120氨基酸序列差異集中在V1和V4區(qū),而V4區(qū)的糖基化位點(diǎn)增加可能與腸道癥狀的形成相關(guān)。神經(jīng)癥狀感染猴腦部分離毒株在保守區(qū)的糖基化位點(diǎn)變化值得注意,尤其是C1區(qū)的糖基化位點(diǎn)的缺失。V3區(qū)作為一個(gè)重點(diǎn)與毒株嗜性相關(guān)的區(qū)域,我們發(fā)現(xiàn)它并非是造成腸道癥狀和神經(jīng)癥狀差異的主要區(qū)域。第二部分：內(nèi)皮細(xì)胞(RF/6A)感染相關(guān)受體表達(dá)的鑒定。病毒感染的高峰期甚至平臺(tái)期,機(jī)體外周血內(nèi)都存在大量的游離病毒,這在相當(dāng)長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)為病毒感染進(jìn)入內(nèi)皮細(xì)胞提供了機(jī)會(huì)。很多研究都在腦部毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)了HIV/SIV病毒的存在,體外實(shí)驗(yàn)也多次證實(shí)了HIV病毒具備感染腦血管內(nèi)皮細(xì)胞的能力,SIV的變異株也可以直接感染BMECs。然而,BMECs并沒有與Gp120結(jié)合的CD4分子,在缺乏CD4受體的情況下,病毒是如何感染的呢?本研究發(fā)現(xiàn),RF/6A內(nèi)皮細(xì)胞在分子水平和蛋白水平均無CD4的表達(dá)。其他感染相關(guān)受體CCR5、CXCR4、GPR15 (BOB)、STR33 (BONZO)、CCR2、CXCR7、 CX3CR1等在mRNA水平和蛋白水平的檢測(cè)結(jié)果一致,均可檢測(cè)到。也就是說在RF/6A細(xì)胞表面完全不表達(dá)CD4受體,表達(dá)少量的CCR5、CXCR4、CCR2、CX3CR等受體,BOB和BONZO蛋白的表達(dá)相對(duì)較多。相比大多數(shù)受體只能通過CD4依賴的方式介導(dǎo)病毒感染,使用CCR5或CXCR4時(shí),以CD4非依賴方式感染內(nèi)皮細(xì)胞應(yīng)該是主要的病毒感染方式,這也和通常情況下內(nèi)皮細(xì)胞的感染狀況相符合。第三部分：不同來源毒株及不同感染方式對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的感染情況比較。有研究發(fā)現(xiàn),體內(nèi)巨噬細(xì)胞嗜性SIV毒株能通過傳代,選擇一種易于從血液進(jìn)入猴腦室的毒株,導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)生。本研究選用不同來源和不同嗜性的SIV和SHIV病毒直接感染內(nèi)皮細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)這些病毒均能感染內(nèi)皮細(xì)胞,但都處于較低水平,只能在分子水平檢測(cè)到而不能檢測(cè)到病毒蛋白的表達(dá)。由此也說明病毒對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的感染水平較低,且不同嗜性和來源的病毒之前并沒有顯著差異,在感染過程中不存在內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)這些毒株的選擇作用。最新研究還證實(shí),感染細(xì)胞和正常細(xì)胞間還可以通過形成病毒突觸結(jié)構(gòu)在細(xì)胞間大量高效轉(zhuǎn)移病毒,這種轉(zhuǎn)移導(dǎo)致的感染比游離病毒顆粒感染高100倍。構(gòu)成血腦屏障的血管內(nèi)皮內(nèi)皮細(xì)胞,不表達(dá)CD4分子,但高表達(dá)多種糖蛋白及蛋白聚糖,對(duì)淋巴細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞具有很強(qiáng)的粘附能力,是否有可能通過病毒突觸結(jié)構(gòu)進(jìn)行轉(zhuǎn)移病毒呢?本研究利用感染的CEMx174細(xì)胞和RF/6A細(xì)胞共培養(yǎng),發(fā)現(xiàn)可以有效促進(jìn)RF/6A細(xì)胞的感染,提高病毒的感染復(fù)制水平。但不同來源不同嗜性病毒對(duì)RF/6A細(xì)胞的感染之間依然沒有差異�？偟膩碚f,我們研究發(fā)現(xiàn)SIV進(jìn)入BBB的主要途徑應(yīng)該是以感染細(xì)胞為載體對(duì)腦內(nèi)皮細(xì)胞的感染。血液中大量感染細(xì)胞(單核巨噬細(xì)胞和T細(xì)胞)與腦內(nèi)皮細(xì)胞之間發(fā)生高效的病毒轉(zhuǎn)移,使病毒進(jìn)入腦實(shí)質(zhì)。而游離病毒的直接感染也是病毒進(jìn)入的途徑,但由于其感染效率較低,不是主要途徑。這種低水平感染現(xiàn)象可能與CD4受體的缺失有關(guān)。在缺少CD4時(shí),其他的感染輔助受體對(duì)病毒的吸附進(jìn)入介導(dǎo)效率較低。同時(shí),內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)不同來源不同嗜性的病毒感染并沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異。腦部分離毒株序列和嗜性的單一現(xiàn)象,還需要更進(jìn)一步的研究。
【關(guān)鍵詞】：艾滋病腦病 血腦屏障 內(nèi)皮細(xì)胞 CD4 RF/6A
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R512.91
【目錄】：

• 英文縮寫詞4-5
• 摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 前言10-12
• 第一部分 不同來源SIV單克隆毒株的分離與GP120序列比對(duì)12-30
• 第一節(jié) 引言12-13
• 第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料13-17
• 第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)方法17-23
• 第四節(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-28
• 第五節(jié) 討論28-30
• 第二部分 內(nèi)皮細(xì)胞(RF/6A)感染相關(guān)受體表達(dá)的鑒定30-49
• 第一節(jié) 引言30-31
• 第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料31-35
• 第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)方法35-43
• 第四節(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果43-47
• 第五節(jié) 討論47-49
• 第三部分 不同來源毒株及不同感染方式對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的感染情況比較49-72
• 第一節(jié) 引言49-50
• 第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料50-54
• 第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)方法54-60
• 第四節(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果60-70
• 第五節(jié) 討論70-72
• 第四部分 總結(jié)72-73
• 參考文獻(xiàn)73-78
• 致謝78-79
• 個(gè)人基本情況79-80
• 碩士期間論文發(fā)表情況80-81

【共引文獻(xiàn)】

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5 潘明沃;陳志強(qiáng);古熾明;王樹聲;向松濤;呂立國(guó);代睿欣;;前列腺癌浸潤(rùn)性樹突狀細(xì)胞CD1a CD83的表達(dá)及與臨床指標(biāo)的相關(guān)性分析[A];第七次中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合泌尿外科學(xué)術(shù)年會(huì)暨第二次廣東省中西醫(yī)結(jié)合泌尿外科學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2009年

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本文編號(hào)：325573