目的重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)（RPA）的傳統(tǒng)檢測方法因操作繁瑣等因素,不適于現(xiàn)場快速檢測。以乙型肝炎病毒（HBV）核酸檢測為例,建立了一種基于重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)（RPA）的HBV核酸等溫?cái)U(kuò)增檢測方法并設(shè)計(jì)了配套的RPA產(chǎn)物可視化檢測裝置。方法首先設(shè)計(jì)了可用手機(jī)拍照采集圖像并經(jīng)肉眼可視化判讀檢測結(jié)果的RPA產(chǎn)物檢測裝置;然后根據(jù)HBV基因保守序列設(shè)計(jì)RPA引物及探針,通過監(jiān)測RPA反應(yīng)的實(shí)時熒光曲線來比較各引物對的擴(kuò)增效率來篩選最佳引物對并優(yōu)化最適的反應(yīng)條件,采用人工合成的HBV靶標(biāo)質(zhì)�？疾炜梢暬瘷z測的靈敏度,并通過檢測人工合成的包含丙肝病毒、人免疫缺陷病毒、梅毒螺旋體、流感病毒、人乳頭瘤病毒核酸片段的質(zhì)粒來考察了方法的特異性;通過與實(shí)時熒光擴(kuò)增曲線進(jìn)行對比,驗(yàn)證了RPA產(chǎn)物可視化檢測裝置的可行性;最終對20份經(jīng)實(shí)時熒光PCR檢測過的血清DNA樣本進(jìn)行RPA可視化檢測來評價方法對臨床實(shí)際樣本檢測的適用性。結(jié)果采用RPA產(chǎn)物可視化檢測裝置實(shí)現(xiàn)了手機(jī)拍照肉眼觀察即可判定檢測結(jié)果的陰陽性信號,HBV核酸RPA擴(kuò)增可視化檢測方法可在39℃30 min內(nèi)實(shí)現(xiàn)對低至1-10拷貝HBV DNA靶標(biāo)的可視... 

【文章來源】：醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào). 2020,33(05)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

10例血清DNA樣本的RPA檢測結(jié)果

HBV-RPA擴(kuò)增方法靈敏度檢測結(jié)果

便攜式RPA產(chǎn)物可視化檢測裝置為一小體積暗盒(長、寬、高分別為112、90、100 mm),盒內(nèi)設(shè)置有兩個包含(470±20) nm濾光片的LED激發(fā)光源,暗盒頂部設(shè)計(jì)有一個帶有(520±10) nm濾光片的信號采集窗口,將RPA擴(kuò)增30 min后的反應(yīng)管放置在暗盒底部,用手機(jī)在信號采集窗口拍攝反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號即可實(shí)現(xiàn)對RPA檢測結(jié)果的肉眼可視化判讀,并可通過熒光灰度值(ImageJ軟件分析)對檢測結(jié)果進(jìn)行進(jìn)一步的分析。整個裝置由鋰電池充電寶供電,便于現(xiàn)場使用。見圖1。1.2.2 RPA擴(kuò)增體系的配制

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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