發(fā)布時(shí)間：2017-04-19 09:01

  本文關(guān)鍵詞：卷曲巴克斯霉原變種（Backusella circina var.circina）形態(tài)學(xué)觀察及致病性的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:巴克斯霉屬(Backusella)屬于真菌門(mén),接合菌亞門(mén),接合菌綱,毛霉目,廣泛分布于土壤、糞便及腐爛的動(dòng)植物尸體上。一般為條件致病菌,當(dāng)機(jī)體抵抗力下降時(shí)侵入,引起人體淺部或深部真菌病。卷曲巴克斯霉原變種是巴克斯霉屬其中的一個(gè)變種,目前國(guó)內(nèi)外尚無(wú)該菌引起人體感染的相關(guān)報(bào)道。本研究所用菌株是2009年從我院1例白血病患者的面部皮損中分離而來(lái),最終經(jīng)中國(guó)科學(xué)院微生物研究所的鄭儒永院士鑒定為卷曲巴克斯霉原變種(Backusella circina var.circina)(已測(cè)出基因序列)。本實(shí)驗(yàn)一方面通過(guò)對(duì)卷曲巴克斯霉原變種進(jìn)一步的形態(tài)學(xué)觀察,為實(shí)驗(yàn)室鑒定該菌提供依據(jù);另一方面通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其是否可以引起系統(tǒng)性感染,并觀察不同免疫狀態(tài)和接種途徑小鼠的一般狀況及死亡情況,同時(shí)通過(guò)對(duì)小鼠進(jìn)行解剖、組織真菌逆培養(yǎng)、組織病理學(xué)檢查等方法觀察各臟器的感染情況,進(jìn)一步了解此菌的致病力、臟器播散情況及組織病理學(xué)特點(diǎn),為臨床上診斷和治療卷曲巴克斯霉原變種感染提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。方法:1菌落形態(tài)學(xué)觀察1.1菌落大體形態(tài)學(xué)觀察:常溫下復(fù)蘇保存菌株,3天后轉(zhuǎn)種于沙堡氏瓊脂培養(yǎng)基(SDA)平皿上,分別于27℃和37℃的溫箱內(nèi)培養(yǎng),每天觀察并記錄菌落生長(zhǎng)情況。1.2小培養(yǎng)(方塊法):挑取菌落點(diǎn)種于SDA小培養(yǎng)基上,分別置于27℃和37℃的溫箱內(nèi),每天觀察菌絲生長(zhǎng)及孢子產(chǎn)生的情況。1.3光鏡觀察:每天挑取兩個(gè)溫度下的菌落置于載玻片上,滴加酚棉蘭溶液,加蓋蓋玻片,光鏡下觀察。2動(dòng)物致病性試驗(yàn)2.1卷曲巴克斯霉原變種系統(tǒng)性感染動(dòng)物模型的制作:常溫下復(fù)蘇保存菌株,轉(zhuǎn)種于SDA培養(yǎng)基上,置于27℃溫箱培養(yǎng)3天。挑取菌株加入無(wú)菌生理鹽水制成菌懸液,通過(guò)皮下、腹腔兩種途徑分別接種至免疫狀態(tài)不同的小鼠。2.2小鼠活動(dòng)情況及死亡率的觀察:觀察并記錄各組小鼠感染后的一般狀況以及4周內(nèi)的自然死亡日期和數(shù)量。2.3內(nèi)臟的大體形態(tài)觀察:隨機(jī)抽取不同感染階段的小鼠處死解剖,分離出心、肝、脾、肺、腎各臟器,并觀察有無(wú)腫大或萎縮、有無(wú)顏色變化等大體形態(tài)改變。2.4組織真菌逆培養(yǎng):將小鼠各臟器在無(wú)菌條件下研磨至勻漿狀,3點(diǎn)接種至SDA試管培養(yǎng)基斜面上,每個(gè)臟器移種2管,27℃下培養(yǎng)3天,觀察生長(zhǎng)菌落的大體形態(tài)及制成濕片后的光鏡下形態(tài)。2.5組織病理學(xué)檢查:將臟器用10!福爾馬林浸泡固定,依次經(jīng)過(guò)脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、展片,分別經(jīng)過(guò)HE染色和PAS染色,光鏡下觀察各臟器有無(wú)組織病理學(xué)改變。結(jié)果:1 SDA培養(yǎng)基上的菌落直徑:菌落在SDA培養(yǎng)基上27℃下較37℃生長(zhǎng)快,第1天、3天、7天直徑比較均有顯著性差異(P0.05)。2 SDA培養(yǎng)基上的菌落形態(tài):接種8h后開(kāi)始有菌落生長(zhǎng),形態(tài)大體為白色羊毛狀。27℃下菌落生長(zhǎng)速度快,氣生菌絲稀疏、蓬松,向上生長(zhǎng)趨勢(shì)較為明顯。37℃下菌落生長(zhǎng)較慢,且菌落邊緣不整齊。兩種溫度下培養(yǎng)基背面均呈白色,未見(jiàn)明顯顏色變化。3光鏡下形態(tài):可見(jiàn)大量粗大、透明、多核、無(wú)分隔的菌絲,直徑粗細(xì)不均勻,分枝比較明顯,部分有側(cè)生菌絲。菌絲頂端可見(jiàn)膨大的球形孢子囊,破裂后可釋放出大量具有熒光、壁薄、圓形或橢圓形的孢子,破裂的孢子囊偶見(jiàn)囊領(lǐng)狀結(jié)構(gòu)。4小鼠感染后一般狀況:不同免疫狀態(tài)皮下組小鼠活動(dòng)及進(jìn)食量無(wú)明顯改變,免疫抑制組較免疫正常組出現(xiàn)的接種部位局部損害嚴(yán)重,但均可自愈。腹腔接種組小鼠活動(dòng)量及進(jìn)食量減少,毛發(fā)倒逆無(wú)光,逐漸消瘦,有自然死亡情況,免疫抑制組的一般狀況更差。5小鼠感染后自然死亡情況:免疫抑制腹腔組接種后第2天小鼠出現(xiàn)死亡,第5天達(dá)到死亡高峰,1周死亡率為56.7%,2周死亡率達(dá)96.7%;免疫正常腹腔組接種后第2天開(kāi)始死亡,第9~10天達(dá)到死亡高峰,1周死亡率30%,2周死亡率80%,2周后無(wú)自然死亡。兩組生存天數(shù)差異有顯著性(P0.05),免疫正常腹腔組較免疫抑制腹腔組的生存天數(shù)長(zhǎng)。不同免疫狀態(tài)皮下組均無(wú)自然死亡。6各臟器的大體改變:腹腔組自然死亡小鼠心肺充血、水腫,肝脾普遍可見(jiàn)不同程度腫大,呈紫紅色,腎臟偶見(jiàn)呈紫紅色充血水腫,部分小鼠肝脾和肺表面可見(jiàn)針尖至粟粒大小白色化膿感染灶。皮下組各臟器未見(jiàn)明顯大體改變。7組織真菌逆培養(yǎng):皮下組中,免疫抑制小鼠皮膚組織生長(zhǎng)出與接種菌株形態(tài)相同的菌落,免疫正常小鼠皮膚組織未見(jiàn)菌落生長(zhǎng),不同免疫狀態(tài)小鼠的內(nèi)臟組織逆培養(yǎng)均為陰性。腹腔組部分臟器逆培養(yǎng)有菌落生長(zhǎng),其菌落大體及鏡下形態(tài)均與接種的菌株相同,免疫抑制和免疫正常兩組真菌逆培養(yǎng)陽(yáng)性率有顯著性差異(P0.05),免疫抑制小鼠脾臟、肺臟、肝臟陽(yáng)性率明顯高于心臟、腎臟(P0.005)。8組織病理學(xué)變化:不同免疫狀態(tài)皮下組小鼠的各內(nèi)臟均無(wú)明顯病理學(xué)變化。不同免疫狀態(tài)的腹腔注射組,HE染色可見(jiàn)血栓形成和鄰近組織變性、壞死,有大量炎細(xì)胞浸潤(rùn),少量巨噬細(xì)胞增生。兩種染色均可見(jiàn)壞死組織、血管內(nèi)有大量紫紅色的菌絲及孢子。結(jié)論:1卷曲巴克斯霉原變種只有一種菌落形態(tài),在最適合其生長(zhǎng)的SDA培養(yǎng)基上27℃下較37℃生長(zhǎng)良好。2通過(guò)腹腔注射途徑可以成功建立卷曲巴克斯霉原變種系統(tǒng)性感染小鼠模型;皮下注射接種不能導(dǎo)致小鼠系統(tǒng)性感染。3該菌屬于條件致病菌,機(jī)體免疫力低下時(shí)更易引起感染,且感染也更加嚴(yán)重。但較大菌量也可導(dǎo)致正常免疫小鼠系統(tǒng)性感染,說(shuō)明該菌致病力及侵襲性強(qiáng)。4卷曲巴克斯霉原變種引起的特征性組織病理學(xué)改變?yōu)闃O易侵犯血管導(dǎo)致血栓形成和組織壞死,伴有各種炎細(xì)胞浸潤(rùn)。5無(wú)論何種免疫狀態(tài),肝、脾、肺均為該菌最易感染的器官;而心、腎較不易感染。
【關(guān)鍵詞】：卷曲巴克斯霉原變種 形態(tài)學(xué) 動(dòng)物模型 免疫狀態(tài) 組織病理 致病性
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R756
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文縮寫(xiě)11-12
• 前言12-13
• 材料與方法13-18
• 結(jié)果18-21
• 附圖21-40
• 附表40-42
• 討論42-47
• 結(jié)論47-48
• 參考文獻(xiàn)48-50
• 綜述 深部真菌感染研究進(jìn)展50-65
• 參考文獻(xiàn)58-65
• 致謝65-66
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷66

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：卷曲巴克斯霉原變種（Backusella circina var.circina）形態(tài)學(xué)觀察及致病性的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：315893