目的研究微小RNA-22（miR-22）靶向核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體蛋白3（NLRP3）在巨噬細(xì)胞RAW264.7清除結(jié)核分枝桿菌（MTB）中的作用。方法體外培養(yǎng)RAW264.7巨噬細(xì)胞,分為miR-22 mimic+NLRP3-WT組、miR-22 NC+NLRP3-WT組、miR-22 mimic+NLRP3-MUT組和miR-22 NC+NLRP3-MUT組。采用雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證miR-22與NLRP3基因的靶向關(guān)系。采用MTB標(biāo)準(zhǔn)菌株H37Rv感染RAW264.7巨噬細(xì)胞,分為NC組（正常生長(zhǎng)RAW264.7巨噬細(xì)胞）、H37Rv組（感染H37Rv的RAW264.7巨噬細(xì)胞）、H37Rv+mimic NC組（H37Rv組基礎(chǔ)上轉(zhuǎn)染miR-22 mimic NC序列）和H37Rv+mimic組（H37Rv組基礎(chǔ)上轉(zhuǎn)染miR-22 mimic序列）,采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)RAW264.7巨噬細(xì)胞微管相關(guān)蛋白輕鏈3-II（LC3-II）+、MTB抗原Ag85A⁺（Ag85A⁺）;采用實(shí)時(shí)定量PCR（RT-qPCR）檢測(cè)RAW264... 

【文章來源】：免疫學(xué)雜志. 2020,36(12)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要試劑與儀器
    1.2 細(xì)胞培養(yǎng)
    1.3 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)
    1.4 MTB感染及分組
    1.5 流式細(xì)胞儀檢測(cè)LC3-Ⅱ+細(xì)胞、Ag85A+細(xì)胞
    1.6 各組RAW264.7巨噬細(xì)胞中mi R-22、NLRP3m RNA水平檢測(cè)
    1.7 免疫印跡法（Western blot,WB）檢測(cè)各組RAW264.7巨噬細(xì)胞中NLRP3、caspase-1蛋白表達(dá)
    1.8 各組RAW264.7巨噬細(xì)胞上清液中IL-1β、IL-18水平檢測(cè)
    1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 mi R-22與NLRP3基因靶向關(guān)系驗(yàn)證
    2.2 各組RAW264.7巨噬細(xì)胞LC3-II+細(xì)胞、Ag85A+細(xì)胞比例
    2.3 各組RAW264.7巨噬細(xì)胞中mi R-22、NLRP3m RNA水平比較
    2.4 各組RAW264.7巨噬細(xì)胞中NLRP3、caspase-1蛋白水平比較
    2.5 RAW264.7巨噬細(xì)胞上清液中IL-1β、IL-18水平比較
3 討論



本文編號(hào)：3148702