HBx對小鼠肝細(xì)胞炎癥損傷及線粒體功能影響的研究
發(fā)布時(shí)間：2021-04-10 10:34
研究目的:本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)線粒體細(xì)胞色素C氧化酶亞單位III（cytochrome c oxidase subunit,COXIII）是乙型肝炎病毒x蛋白（hepatitis B virus x protein,HBx）的特異性結(jié)合蛋白,兩者相互作用可誘發(fā)線粒體功能損傷,繼而影響肝細(xì)胞的生物學(xué)功能。本研究擬采用流體動力學(xué)體內(nèi)轉(zhuǎn)染法構(gòu)建表達(dá)HBx的小鼠模型,觀察HBx造成小鼠肝細(xì)胞急性炎癥損傷的情況,在動物模型層面上探討HBx對肝細(xì)胞線粒體功能的影響,進(jìn)一步闡明HBx誘發(fā)肝細(xì)胞炎癥損傷的具體機(jī)制。研究方法:實(shí)驗(yàn)用清潔級成年雄性昆明小鼠（KM小鼠）30只隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組（pcDNA3.1-HBx質(zhì)粒組）、空質(zhì)粒對照組（pcDNA3.1質(zhì)粒組）以及空白對照組（質(zhì)粒溶媒劑組）。以構(gòu)建好的pcDNA3.1-HBx質(zhì)粒、pcDNA3.1質(zhì)粒及質(zhì)粒溶媒劑通過尾靜脈分別高壓注射進(jìn)入各組小鼠體內(nèi),在第24小時(shí)處死,取小鼠肝組織以及經(jīng)眼球采集血清。逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcription and polymerase chain reaction,RT-PCR）檢測HBx基因mR...
【文章來源】：福建醫(yī)科大學(xué)福建省
【文章頁數(shù)】：53 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
RT-PCR檢測各實(shí)驗(yàn)小鼠組肝組織中HBxmRNA的表達(dá)情況
討 論病毒是一種小型的部分雙鏈環(huán)狀嗜肝 DNA 病毒，含有四由 x 基因編碼為 x 蛋白被認(rèn)為在慢性肝炎以及原發(fā)性肝癌要作用。HBx 是一種多功能蛋白，分子量大小約為 17kd，不僅具有廣泛的反式激活功能，還能與宿主細(xì)胞內(nèi)的蛋白控細(xì)胞的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及氧化應(yīng)激胞損傷，最終導(dǎo)致肝癌的發(fā)生。課題組前期已經(jīng)成功建立了通過一系列的實(shí)驗(yàn)證實(shí) HBx 在細(xì)胞內(nèi)部的結(jié)合位點(diǎn)已經(jīng)精在轉(zhuǎn)染 HBx 的人正常肝細(xì)胞及肝癌細(xì)胞中高表達(dá)的 HBx圖 1.2 Western blot 檢測肝組織中 HBx 的表達(dá)情況1：空白對照組（質(zhì)粒溶媒劑）2：空質(zhì)粒對照組 3：HBx 實(shí)驗(yàn)組
24.小鼠血清中 IL-6、MDA 以及 SOD 含量的測定血清中炎癥因子 IL-6 水平檢測結(jié)果如圖 2.2A 中所示，各組數(shù)據(jù)如表 2-1 所，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)組與對照組血清中均有 IL-6 的表達(dá)，但實(shí)驗(yàn)組小鼠清中 IL-6 水平明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。血清中氧化應(yīng)激關(guān)指標(biāo) MDA、SOD 水平檢測結(jié)果如圖 2.2（B、C）中所示，各組數(shù)據(jù)如表 2-1圖 2.1 小鼠急性肝損傷的情況A：小鼠血清中 ALT 和 AST 水平檢測值B：肝臟組織 HE 染色（40 X），箭頭示肝細(xì)胞壞死區(qū)域Control：空白對照組 Mock：空載質(zhì)粒對照組 HBx：實(shí)驗(yàn)組
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Oxidative damage in the progression of chronic liver disease to hepatocellular carcinoma:An intricate pathway[J]. Romilda Cardin,Marika Piciocchi,Marina Bortolami,Andromachi Kotsafti,Luisa Barzon,Enrico Lavezzo,Alessandro Sinigaglia,Kryssia Isabel Rodriguez-Castro,Massimo Rugge,Fabio Farinati. World Journal of Gastroenterology. 2014(12)
[2]表達(dá)HBVX基因的小鼠模型的建立及對肝細(xì)胞凋亡因子的影響[J]. 郭晨,李丹,林納,黃月紅,陳治新,王小眾. 世界華人消化雜志. 2011(12)
[3]HBV X基因?qū)Τ扇烁渭?xì)胞HL-7702線粒體功能的影響[J]. 林納,李丹,陳紅英,陳治新,王小眾. 細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2008(10)
[4]2006年～2010年全國乙型病毒性肝炎防治規(guī)劃[J]. 中國實(shí)用鄉(xiāng)村醫(yī)生雜志. 2006(08)
本文編號：3129483
【文章來源】：福建醫(yī)科大學(xué)福建省
【文章頁數(shù)】：53 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
RT-PCR檢測各實(shí)驗(yàn)小鼠組肝組織中HBxmRNA的表達(dá)情況
討 論病毒是一種小型的部分雙鏈環(huán)狀嗜肝 DNA 病毒，含有四由 x 基因編碼為 x 蛋白被認(rèn)為在慢性肝炎以及原發(fā)性肝癌要作用。HBx 是一種多功能蛋白，分子量大小約為 17kd，不僅具有廣泛的反式激活功能，還能與宿主細(xì)胞內(nèi)的蛋白控細(xì)胞的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及氧化應(yīng)激胞損傷，最終導(dǎo)致肝癌的發(fā)生。課題組前期已經(jīng)成功建立了通過一系列的實(shí)驗(yàn)證實(shí) HBx 在細(xì)胞內(nèi)部的結(jié)合位點(diǎn)已經(jīng)精在轉(zhuǎn)染 HBx 的人正常肝細(xì)胞及肝癌細(xì)胞中高表達(dá)的 HBx圖 1.2 Western blot 檢測肝組織中 HBx 的表達(dá)情況1：空白對照組（質(zhì)粒溶媒劑）2：空質(zhì)粒對照組 3：HBx 實(shí)驗(yàn)組
24.小鼠血清中 IL-6、MDA 以及 SOD 含量的測定血清中炎癥因子 IL-6 水平檢測結(jié)果如圖 2.2A 中所示，各組數(shù)據(jù)如表 2-1 所，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)組與對照組血清中均有 IL-6 的表達(dá)，但實(shí)驗(yàn)組小鼠清中 IL-6 水平明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。血清中氧化應(yīng)激關(guān)指標(biāo) MDA、SOD 水平檢測結(jié)果如圖 2.2（B、C）中所示，各組數(shù)據(jù)如表 2-1圖 2.1 小鼠急性肝損傷的情況A：小鼠血清中 ALT 和 AST 水平檢測值B：肝臟組織 HE 染色（40 X），箭頭示肝細(xì)胞壞死區(qū)域Control：空白對照組 Mock：空載質(zhì)粒對照組 HBx：實(shí)驗(yàn)組
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Oxidative damage in the progression of chronic liver disease to hepatocellular carcinoma:An intricate pathway[J]. Romilda Cardin,Marika Piciocchi,Marina Bortolami,Andromachi Kotsafti,Luisa Barzon,Enrico Lavezzo,Alessandro Sinigaglia,Kryssia Isabel Rodriguez-Castro,Massimo Rugge,Fabio Farinati. World Journal of Gastroenterology. 2014(12)
[2]表達(dá)HBVX基因的小鼠模型的建立及對肝細(xì)胞凋亡因子的影響[J]. 郭晨,李丹,林納,黃月紅,陳治新,王小眾. 世界華人消化雜志. 2011(12)
[3]HBV X基因?qū)Τ扇烁渭?xì)胞HL-7702線粒體功能的影響[J]. 林納,李丹,陳紅英,陳治新,王小眾. 細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2008(10)
[4]2006年～2010年全國乙型病毒性肝炎防治規(guī)劃[J]. 中國實(shí)用鄉(xiāng)村醫(yī)生雜志. 2006(08)
本文編號：3129483
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