目的應(yīng)用重組酶聚合酶擴(kuò)增(RPA)技術(shù),建立一種敏感、特異、簡(jiǎn)便且快速的日本血吸蟲(chóng)核酸檢測(cè)方法。方法選擇Sj28S核糖體基因片段為靶序列,用Primer Premier 5軟件設(shè)計(jì)特異性引物,建立RPA擴(kuò)增反應(yīng),并進(jìn)行優(yōu)化以確定最佳反應(yīng)條件。提取不同蟲(chóng)期日本血吸蟲(chóng),以及曼氏血吸蟲(chóng)、埃及血吸蟲(chóng)、單尾尾蚴感染釘螺、華支睪吸蟲(chóng)、大片形吸蟲(chóng)、衛(wèi)氏并殖吸蟲(chóng)和牛帶絳蟲(chóng)等基因組DNA,評(píng)價(jià)所建立方法的特異性和敏感性,并對(duì)不同混合比例(1∶10、 1∶50、 1∶100、 1∶250、 1∶500、 1∶1 000、 1∶2 000)的陽(yáng)性和陰性釘螺基因組DNA的檢出性能和重復(fù)性進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果建立的RPA方法可特異地?cái)U(kuò)增出日本血吸蟲(chóng)216 bp大小的目的基因片段。RPA的最佳反應(yīng)條件為39℃、 20 min。該方法與曼氏血吸蟲(chóng)、埃及血吸蟲(chóng)、單尾尾蚴感染釘螺、華支睪吸蟲(chóng)、大片形吸蟲(chóng)、衛(wèi)氏并殖吸蟲(chóng)和牛帶絳蟲(chóng)及陰性釘螺基因組DNA均無(wú)交叉反應(yīng)。針對(duì)日本血吸蟲(chóng)成蟲(chóng)基因組的最低檢出限為100 fg/μl,針對(duì)重組質(zhì)粒的最低檢出限為100拷貝/μl,且血吸蟲(chóng)不同蟲(chóng)期的基因組DNA樣本均能被準(zhǔn)確檢出。應(yīng)用建立的RP... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志. 2020年03期 北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【部分圖文】：

RPA檢測(cè)的特異性評(píng)價(jià)結(jié)果

RPA技術(shù)具有操作簡(jiǎn)單、反應(yīng)迅速、靈敏高效的優(yōu)勢(shì)[20]，已被廣泛應(yīng)用于各種寄生蟲(chóng)的檢測(cè)。研究人員分別應(yīng)用RPA技術(shù)對(duì)瘧原蟲(chóng)、埃及血吸蟲(chóng)和曼氏血吸蟲(chóng)進(jìn)行檢測(cè)，均取得較好的實(shí)驗(yàn)效果[21-23]。目前，關(guān)于日本血吸蟲(chóng)感染的核酸檢測(cè)已有諸多報(bào)道，本課題組前期開(kāi)展的日本血吸蟲(chóng)核酸檢測(cè)技術(shù)Meta分析結(jié)果表明，等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的診斷效能優(yōu)于依賴變溫?cái)U(kuò)增設(shè)備的PCR類技術(shù)，在等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)中，RPA又具有相對(duì)的診斷優(yōu)勢(shì)[24]。RPA技術(shù)是近年來(lái)新興起來(lái)的一種核酸等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)，與傳統(tǒng)PCR相比，該方法無(wú)需高昂儀器設(shè)備，借助水浴鍋，甚至是在室溫下，20 min內(nèi)即可完成反應(yīng)，操作簡(jiǎn)便快速，有利于基層單位和邊遠(yuǎn)山區(qū)的推廣應(yīng)用[25]。圖4 不同蟲(chóng)期日本血吸蟲(chóng)基因組DNA的RPA檢測(cè)結(jié)果

不同蟲(chóng)期日本血吸蟲(chóng)基因組DNA的RPA檢測(cè)結(jié)果


本文編號(hào)：2946577