研究目的1.了解廣東省H3N2亞型流感病毒的流行以及全基因組基因變異情況,并為廣東省流感病毒監(jiān)測(cè)防控提供參考意義,對(duì)H3N2的疫苗研制提供了理論依據(jù)。2.分析不同型別的禽流感病毒在活禽零售市場(chǎng)和批發(fā)市場(chǎng)市場(chǎng)的各類外環(huán)境標(biāo)本和活禽肛咽拭子標(biāo)本中的空間分布和時(shí)空分布,分析不同型別的禽流感病毒在各類標(biāo)本中的污染情況。3.探究活禽市場(chǎng)從業(yè)人員針對(duì)不同型別的禽流感病毒的血清流行病學(xué),了解不同型別的禽流感病毒在職業(yè)暴露人群中的感染情況。研究方法1.廣東省H3N2亞型流感病毒基因序列研究采集2015年01月—2017年12月期間廣東省流感監(jiān)測(cè)哨點(diǎn)醫(yī)院流感患者鼻咽拭子標(biāo)本,利用雞胚病毒分離法和MDCK細(xì)胞病毒分離法分離培養(yǎng)流感病毒。提取病毒核酸,檢測(cè)出甲型流感陽(yáng)性標(biāo)本后,對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步的H3亞型特異檢測(cè)。PCR法逆轉(zhuǎn)錄并擴(kuò)增病毒,利用毛細(xì)管電泳法檢測(cè)擴(kuò)增條帶,將得到目的條帶的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行序列測(cè)定及分析。2.廣東省禽流感監(jiān)測(cè)和職業(yè)暴露人群血清學(xué)研究采集2017年02月至2019年02月期間6個(gè)地市禽流感監(jiān)測(cè)活禽市場(chǎng)外環(huán)境標(biāo)本和活禽肛咽拭子標(biāo)本,流感病毒雞胚分離培養(yǎng)法分離培養(yǎng)禽流感病毒。提取病毒核酸,檢測(cè)出甲型流感陽(yáng)性標(biāo)本后,進(jìn)行H5、H7、H9亞型的特異性檢測(cè)。對(duì)流行病學(xué)概況資料和核酸檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行整理和分析;同時(shí)采集廣東省6個(gè)地市職業(yè)暴露人群血清標(biāo)本并進(jìn)行問(wèn)卷調(diào)查,利用哈獸維科禽流感病毒H5、H7、H9亞型血凝抑制試驗(yàn)抗原與陽(yáng)性血清,對(duì)血清標(biāo)本進(jìn)行HA試驗(yàn)和HI試驗(yàn)。研究結(jié)果1.廣東省H3N2亞型流感病毒基因序列中,2015—2017年12月分離株數(shù)目為17株,所占比重最高,其次為6月和7月。各地市間比較,清遠(yuǎn)、河源、中山、深圳占比重較高;各年齡組間進(jìn)行比較,童年(0-6歲)與少年(7-17歲)人數(shù)較多,遠(yuǎn)高于其他組別;各性別組間比較,男性略高于女性。同時(shí)將60株分離株的HA、NA基因與2016—2018年和2015—2016年流感疫苗株的氨基酸位點(diǎn)相比發(fā)現(xiàn),前者增加了多個(gè)氨基酸位點(diǎn)突變。會(huì)導(dǎo)致病毒對(duì)神經(jīng)氨酸酶抑制劑的敏感性降低的NA氨基酸突變位點(diǎn)均未發(fā)生變異,提示2015年～2017年廣東省分離株未產(chǎn)生耐藥毒株,仍對(duì)奧司他韋等神經(jīng)氨酸酶抑制劑敏感。與底物直接作用的抗原決定簇位點(diǎn)和對(duì)酶起催化作用的位點(diǎn)都沒(méi)有發(fā)生位點(diǎn)突變,提示NA蛋白的酶活性中心保持高度的保守。2.廣東省禽流感監(jiān)測(cè)和職業(yè)暴露人群血清研究采集了2017年2月—2019年2月期間,陽(yáng)江、廣州、茂名、梅州、潮州、佛山6個(gè)地市共17個(gè)活禽貿(mào)易零售市場(chǎng)和活禽貿(mào)易批發(fā)市場(chǎng)的禽類泄殖腔拭子和咽拭子、各類外環(huán)境拭子,共計(jì)14958份標(biāo)本。A型禽流感病毒陽(yáng)性率與H9亞型禽流感病毒陽(yáng)性率較其他亞型高,且變化趨勢(shì)基本一致。6個(gè)地市之間的禽流感病毒陽(yáng)性率有一定差異。各型別佛山的禽流感病毒陽(yáng)性率均為最高。活禽批發(fā)市場(chǎng)A型、H5亞型、H7亞型、未分型禽流感病毒陽(yáng)性率略高于活禽零售市場(chǎng)�；钋萘闶凼袌�(chǎng)中佛山羅湖市場(chǎng)的A型禽流感病毒陽(yáng)性率最高�；钋菖l(fā)市場(chǎng)中佛山中南農(nóng)產(chǎn)品交易中心的A型H5亞型、H9亞型、未分型禽流感病毒陽(yáng)性率最高;陽(yáng)江三鳥批發(fā)市場(chǎng)的H7亞型禽流感病毒陽(yáng)性率最高;茂名茂南區(qū)袂花市場(chǎng)的各類型別禽流感病毒陽(yáng)性率最低。職業(yè)暴露人群血清標(biāo)本采集于2017年—2018年4月和10月分別在選定的活禽市場(chǎng)收集從業(yè)人員血清樣本進(jìn)行血清學(xué)調(diào)查,共采集547份血清標(biāo)本,均為陰性。研究結(jié)論廣東省H3N2亞型流感病毒基因序列研究顯示H3N2亞型亞型流感呈雙峰流行特點(diǎn)且未成年人易感。廣東省2015優(yōu)勢(shì)流行株屬3c.2a分支和3c.3a分支,2016年和2017年的優(yōu)勢(shì)流行株均屬3c.2a分支,與我國(guó)整體優(yōu)勢(shì)進(jìn)化分支情況相同。本研究發(fā)現(xiàn)2015—2017年間,我國(guó)甲型H3N2亞型流感病毒分離株間、分離株與疫苗株之間的同源性總體較高,但存在一定的差異且分支不夠明確。本研究所涉及的60株分離株與2015—2016年和2016—2018年疫苗株相比,HA1區(qū)氨基酸位點(diǎn)變異數(shù)目分別為38和40,變異率分別為為11.55%和12.15%,共涉及A～E5個(gè)抗原表位區(qū)域。特別是多株分離株發(fā)生N121K和R142G/K位點(diǎn)突變,均屬區(qū)域的關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn),表明H3N2亞型流感病毒有持續(xù)突變的趨勢(shì),與早期報(bào)道一致。與兒童高病死率相關(guān)的HA基因T128A位點(diǎn),本研究表示未發(fā)生變異。因此,我們要密切關(guān)注H3N2亞型流感的關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)變異情況。H3N2亞型流感病毒在最近幾年的致病性較其他亞型的流感要低,但其仍然具有引起高致病性大規(guī)模流行的可能。我們應(yīng)加強(qiáng)和完善流感的預(yù)測(cè)系統(tǒng),及時(shí)比對(duì)和分析病毒基因序列,掌握廣東省A(H3N2)流感病毒的抗原性和基因特性變異情況,從而為研制疫苗提供重要的依據(jù),及時(shí)防控流感病毒的傳播與流行。廣東省禽流感監(jiān)測(cè)分析表明廣東省活禽市場(chǎng)外環(huán)境中禽流感病毒污染情況不容樂(lè)觀,且污染情況主要發(fā)生在流通環(huán)節(jié);不同型別的禽流感病毒的分布具有季節(jié)性差異,甲型、H5、H7、H9及除H5/H7/H9亞型以外的其他亞型檢出陽(yáng)性率在冬春季較高。6個(gè)地市之間的禽流感病毒陽(yáng)性率有一定差異,其中各型別佛山的禽流感病毒陽(yáng)性率均為最高。自2017年秋季起,H7N9亞型禽流感病毒免疫工作的開展,可能是H7亞型禽流感病毒陽(yáng)性檢出率持續(xù)極低的最主要原因。絕大多數(shù)類型外環(huán)境標(biāo)本和禽類肛咽拭子均檢出禽流感病毒,A型禽流感病毒陽(yáng)性檢出率較高的有鴿籠擦拭標(biāo)本、鵪鶉肛咽拭子、秤盤表面涂抹標(biāo)本、運(yùn)輸車、地板擦拭標(biāo)本、鴨肛咽拭子等,表明在禽類稱重、運(yùn)輸?shù)拳h(huán)節(jié)易造成污染,主要原因可能和不同類型外環(huán)境標(biāo)本受禽類檢查污染的嚴(yán)重程度不同有關(guān)。此次血清學(xué)調(diào)查中,針對(duì)H5、H7、H9亞型的HI試驗(yàn)結(jié)果結(jié)果均為陰性,提示無(wú)隱性感染者。
【學(xué)位單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R511.7;R181.3
【部分圖文】：

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本文編號(hào)：2892700