第一部分肝內(nèi)膽管癌的抗病毒治療研究目的:乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)感染是肝內(nèi)膽管癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC)的重要危險(xiǎn)因素,本研究擬評(píng)估抗病毒治療(antiviral therapy,AVT)對(duì)合并HBV感染的ICC病人手術(shù)預(yù)后的影響。研究方法:回顧性的研究2006年至2011年,在上海東方肝膽外科醫(yī)院和福建孟超肝膽外科醫(yī)院接受肝切除治療的928例合并HBV感染ICC病人的臨床病理資料。詳細(xì)記錄病人的病毒再激活,腫瘤復(fù)發(fā),腫瘤特異性生存和總體生存數(shù)據(jù)。生存率的分析使用時(shí)間依賴的Cox回歸模型,以校正潛在協(xié)變量。結(jié)果:接受術(shù)前AVT,未接受術(shù)前AVT-低病毒載量(2000 IU/mL),以及未接受術(shù)前AVT-高病毒載量(≥2000 IU/mL)病人的術(shù)后病毒再激活率分別為3.3%,8.3%和15.7%(P0.001)。高病毒載量和病毒再激活是腫瘤復(fù)發(fā)(hazard ratio[HR]:1.22和1.34),腫瘤特異性生存(HR:1.36和1.46)和總體生存(HR:1.23和1.36)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。接受AVT治療病人的術(shù)后5年腫瘤復(fù)發(fā)率,腫瘤特異性生存率和總體生存率(70.5%,46.9%和43.0%)優(yōu)于未接受AVT-高病毒載量的病人(86.5%,20.9%和20.5%,所有P0.001);與未接受AVT-低病毒載量的病人無(wú)顯著差異(71.7%,35.5%和33.5%,P=0.057,0.051和0.060)。同未接受AVT-高病毒載量的病人相比,無(wú)論是術(shù)前還是術(shù)后開始AVT治療,均能改善病人的長(zhǎng)期預(yù)后(腫瘤復(fù)發(fā)HR:0.44和0.54;腫瘤特異性生存HR:0.38和0.57;總體生存HR:0.46和0.54)。結(jié)論:病毒再激活影響合并HBV感染ICC病人的肝切除手術(shù)預(yù)后。AVT治療可以降低病毒再激活率,改善高病毒載量病人的手術(shù)長(zhǎng)期預(yù)后。第二部分長(zhǎng)鏈非編碼RNA在肝內(nèi)膽管癌進(jìn)展中的作用和機(jī)制研究目的:肝內(nèi)膽管癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC)的發(fā)病率和死亡率逐年升高,已成為研究熱點(diǎn)。手術(shù)切除是唯一可能治愈ICC的治療方式,但術(shù)后復(fù)發(fā)率高,遠(yuǎn)期療效并不理想。由于ICC起病隱匿,早期無(wú)明顯臨床癥狀,病人發(fā)現(xiàn)時(shí)多處于晚期階段,失去手術(shù)機(jī)會(huì)。長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long noncoding RNA,lnc RNA)長(zhǎng)度大于200 bp,沒有或僅有弱的蛋白編碼能力。越來(lái)越多的證據(jù)表明,lnc RNA廣泛參與細(xì)胞過程,包括表觀遺傳特征和基因表達(dá)的調(diào)控,但在ICC中卻鮮有研究。本研究將探索lnc RNA在ICC腫瘤進(jìn)展中的作用和機(jī)制,以期找到新的診斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)。研究方法:通過基因芯片檢測(cè)找出ICC癌和癌旁組織中差異表達(dá)的lnc RNA分子,結(jié)合高內(nèi)涵增殖實(shí)驗(yàn)篩選,鑒定出增殖相關(guān)功能陽(yáng)性目的基因。q PCR驗(yàn)證目的基因芯片檢測(cè)結(jié)果,并進(jìn)行大樣本驗(yàn)證,分析目的基因的表達(dá)與病人臨床病理特征及手術(shù)預(yù)后的關(guān)系。選擇RBE細(xì)胞系作為工具細(xì)胞,短發(fā)卡RNA(short hairpin RNA,sh RNA)慢病毒敲減目的基因,觀察目的基因改變對(duì)細(xì)胞凋亡,細(xì)胞周期和克隆形成能力的影響。裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)觀察目的基因改變對(duì)QBC939細(xì)胞成瘤能力的影響。使用RNA熒光原位雜交技術(shù)及核質(zhì)分離PCR對(duì)目的基因進(jìn)行亞細(xì)胞定位。生物信息學(xué)預(yù)測(cè)目的基因可以靶定的微小RNA(micro RNA,mi RNA)及下游靶基因,雙熒光素酶報(bào)告基因驗(yàn)證目的基因和靶基因之間的相互作用。結(jié)果:共7對(duì)ICC癌和癌旁組織用于基因芯片檢測(cè),發(fā)現(xiàn)113條lnc RNA分子在癌組織中高表達(dá)。在RBE細(xì)胞系中使用sh RNA慢病毒干擾目的基因,結(jié)合高內(nèi)涵增殖實(shí)驗(yàn)篩選,找出一條與ICC增殖相關(guān)的lnc RNA,并將其命名為URICC(up regulated in intrahepatic cholangiocarcinoma)。對(duì)116例ICC病人的分析顯示,URICC高表達(dá)的病人具有更高的血清糖鏈抗原19-9水平(58.8 vs.27.2 U/m L,P=0.030),更大的腫瘤直徑(7.0 vs.6.1 cm,P=0.019),腫瘤數(shù)目多發(fā)者以及合并大血管侵犯者更多(50.0%vs.25.9%,P=0.007;25.9%vs.8.6%,P=0.014)。多因素Cox回歸分析顯示,URICC高表達(dá)是病人術(shù)后復(fù)發(fā)(hazard ratio[HR]:1.974,P=0.020)和總體生存(HR:1.796,P=0.047)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。干擾URICC的表達(dá)能夠?qū)⒓?xì)胞周期阻滯在G2/M期,促進(jìn)細(xì)胞凋亡,抑制克隆形成。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明,干擾URICC的表達(dá)可減弱QBC939細(xì)胞的裸鼠皮下成瘤能力。雙熒光素酶報(bào)告基因顯示,URICC可以通過競(jìng)爭(zhēng)性內(nèi)源RNA(competitive endogenous RNA,ce RNA)機(jī)制,解除mi R-320a對(duì)MCL-1的抑制,從而逃避線粒體途徑的細(xì)胞凋亡。結(jié)論:URICC在ICC癌組織中高表達(dá),干擾URICC可以抑制ICC細(xì)胞增殖。高表達(dá)URICC與病人差的預(yù)后顯著相關(guān)。在機(jī)制上,URICC可以通過靶向結(jié)合mi R-320a,解除其對(duì)MCL-1的抑制,從而促進(jìn)ICC的進(jìn)展,是ICC的潛在治療靶點(diǎn)和腫瘤標(biāo)志物。
【學(xué)位單位】：中國(guó)人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R735.7;R512.62
【部分圖文】：

- 1圖 1. 研究流程圖排除標(biāo)準(zhǔn)，僅按主要原因計(jì)；T，且 HBV-DNA< 2000 IU/mL；VT，且 HBV-DNA≥ 2000 IU/mL；T，且 HBV-DNA< 2000 IU/mL；T，且 HBV-DNA≥ 2000 IU/mL；始 AVT，且術(shù)后未中斷。

圖 2. 對(duì)于經(jīng)肝切除治療，接受 AVT，未接受 AVT 合并高病毒載量及未接受 AVT 合并低病毒載量病人的總體生存，腫瘤特異性生存和腫瘤復(fù)發(fā)。(A)：腫瘤復(fù)發(fā)；(B)：腫瘤特異性生存；(C)：總體生存。生存曲線使用時(shí)間依賴 Cox 回歸方法繪制，校正了年齡，性別，糖鏈抗原 19-9，癌胚抗原，腫瘤直徑，腫瘤數(shù)目，組織學(xué)亞型，淋巴結(jié)狀態(tài)，直接侵犯，病毒再激活，肝切除術(shù)式和輸血。校正的多因素分析結(jié)果顯示，同 No-AVT-高病毒組相比，AVT 組和 No-AVT-低病

海軍軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文五、AVT 治療開始時(shí)間對(duì)病人手術(shù)長(zhǎng)期預(yù)后的影響在 AVT 組的 198 例病人中，有 87 例術(shù)前開始 AVT 治療，并且肝切除術(shù)后均繼續(xù)治療 87 (術(shù)前加術(shù)后 AVT 組)；剩下的 111 例病人僅在肝切除術(shù)后接受 AVT 治療 (術(shù)后 AVT 組)。No-AVT-高病毒組的 146 例病人也一起進(jìn)行了分析 (圖 1)。在圖 3 中，術(shù)前加術(shù)后 AVT 組和術(shù)后 AVT 組病人具有相似的 Cox 校正 1-，3-，和 5-年腫瘤復(fù)發(fā)率 (23.3%，46.5%和 61.7% vs. 27.9%，52.4%和 67.2%，P = 0.330)，但均顯著低于 No-AVT-高病毒組 (54.4%，75.9%和 84.5%；P<0.001，P=0.001)。術(shù)前加術(shù)后 AVT 組和術(shù)后 AVT 組病人相應(yīng)的腫瘤特異性生存和總體生存也相似 (分別為 88.0%，66.4%和 57.7% vs. 78.7%，56.6%和 44.6%，P=0.088；82.8%，60.1%和52.0% vs. 79.2%，57.6%和 44.3%，P=0.468)。均顯著高于 No-AVT-高病毒組 (67.5%，33.6%和 24.4%，P < 0.001，P = 0.008；66.0%，31.7%和 22.4%，P < 0.001，P = 0.003)。
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本文編號(hào)：2887459