目的:探討長(zhǎng)鏈非編碼RNA00238(long intergenic non-coding RNA00238,Linc00238)在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)生活周期中的調(diào)控作用及可能的機(jī)制。方法:利用LincRNA芯片比較HBV陽(yáng)性(HBV(+))與HBV陰性(HBV(-))肝組織樣本中LincRNA表達(dá)差異,根據(jù)芯片結(jié)果,最終選擇Linc00238為研究對(duì)象,real-time PCR驗(yàn)證Linc00238表達(dá);利用過(guò)表達(dá)及RNA干擾,檢測(cè)Linc00238對(duì)HBV復(fù)制、轉(zhuǎn)錄以及表達(dá)水平影響。利用雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)檢測(cè)Linc00238對(duì)HBV啟動(dòng)子活性的影響。結(jié)果:LincRNA芯片在HBV(+)組織中共發(fā)現(xiàn)13條LincRNA表達(dá)發(fā)生變化,其中2條上調(diào),11條下調(diào),real-time PCR進(jìn)一步證實(shí)Linc00238在HBV(+)肝組織樣本中表達(dá)水平明顯降低,在HBV穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系HepG2.2.15、HepAD38及HBV瞬時(shí)轉(zhuǎn)染細(xì)胞模型中同樣發(fā)現(xiàn)Linc00238表達(dá)下調(diào),提示HBV感染抑制Linc00238表達(dá)。過(guò)表達(dá)Linc00238,HBV復(fù)制及蛋白表達(dá)水平明顯減低,引入sh00238干擾Linc00238表達(dá)后,HBV復(fù)制及蛋白表達(dá)水平恢復(fù)(P0.05);雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)顯示,HepG2細(xì)胞共轉(zhuǎn)染pHBs-luc、pHBx-luc、pHBc-luc及pCDNA-linc00238后的報(bào)告熒光與對(duì)照組無(wú)明顯差異(P0.05)。結(jié)論:通過(guò)體外研究發(fā)現(xiàn)Linc00238對(duì)HBV蛋白及DNA表達(dá)具有抑制作用,但研究進(jìn)一步證實(shí)Linc00238不能通過(guò)影響HBV啟動(dòng)子活性抑制HBV表達(dá)與復(fù)制。
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類(lèi)】：R512.62
【部分圖文】：

a：ELISA 檢測(cè) HepAD38 細(xì)胞中轉(zhuǎn)染 pCDNA-linc00238 后 HBsAg 水平；b:ELISA 檢HepAD38 細(xì)胞中轉(zhuǎn)染 pCDNA-linc00238 后 HBeAg 水平；c：Western blot 檢測(cè) HepAD3中轉(zhuǎn)染 pCDNA-linc00238 后 HBc 水平。圖 2-1 HepAD38 細(xì)胞過(guò)表達(dá) Lnc00238 后 HBV 蛋白水平Figure2-1 HBV protein levels in HepAD38 cells up-regulated Linc002382.2 高表達(dá) Linc00238 后抑制 HBV DNA 復(fù)制在 HepAD38 細(xì)胞中轉(zhuǎn)染 pCDNA-Linc00238，HBV DNA 復(fù)制水平較對(duì)照顯降低，HBV 復(fù)制中間體表達(dá)水平較對(duì)照組亦明顯降低（圖 2-2），結(jié)果證Linc00238 對(duì) HBV DNA 復(fù)制具有抑制作用。

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文2.3 干擾 Linc00238 作用后上調(diào) HBV 蛋白表達(dá)水平在 HepAD38 細(xì)胞中過(guò)分別表達(dá) Linc00238+sh-NC、Linc00238+sh-00238、pCDNA-NC+sh-00238、pCDNA-NC+sh-NC，用 ELISA 檢測(cè) HBs 及 HBe 表達(dá)，結(jié)果顯示，過(guò)表達(dá) Linc00238 后 HBV 蛋白表達(dá)水平得到抑制，而當(dāng)干擾外源性L(fǎng)inc00238 表達(dá)后，HBV 蛋白水平得到部分恢復(fù)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05，圖 2-3）。結(jié)果進(jìn)一步明確，Linc00238 對(duì) HBV 生活周期具有抑制作用
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本文編號(hào)：2885193