目的:探討長鏈非編碼RNA00238(long intergenic non-coding RNA00238,Linc00238)在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)生活周期中的調(diào)控作用及可能的機制。方法:利用LincRNA芯片比較HBV陽性(HBV(+))與HBV陰性(HBV(-))肝組織樣本中LincRNA表達差異,根據(jù)芯片結(jié)果,最終選擇Linc00238為研究對象,real-time PCR驗證Linc00238表達;利用過表達及RNA干擾,檢測Linc00238對HBV復(fù)制、轉(zhuǎn)錄以及表達水平影響。利用雙熒光素酶報告系統(tǒng)檢測Linc00238對HBV啟動子活性的影響。結(jié)果:LincRNA芯片在HBV(+)組織中共發(fā)現(xiàn)13條LincRNA表達發(fā)生變化,其中2條上調(diào),11條下調(diào),real-time PCR進一步證實Linc00238在HBV(+)肝組織樣本中表達水平明顯降低,在HBV穩(wěn)定表達細胞系HepG2.2.15、HepAD38及HBV瞬時轉(zhuǎn)染細胞模型中同樣發(fā)現(xiàn)Linc00238表達下調(diào),提示HBV感染抑制Linc00238表達。過表達Linc00238,HBV復(fù)制及蛋白表達水平明顯減低,引入sh00238干擾Linc00238表達后,HBV復(fù)制及蛋白表達水平恢復(fù)(P0.05);雙熒光素酶報告系統(tǒng)顯示,HepG2細胞共轉(zhuǎn)染pHBs-luc、pHBx-luc、pHBc-luc及pCDNA-linc00238后的報告熒光與對照組無明顯差異(P0.05)。結(jié)論:通過體外研究發(fā)現(xiàn)Linc00238對HBV蛋白及DNA表達具有抑制作用,但研究進一步證實Linc00238不能通過影響HBV啟動子活性抑制HBV表達與復(fù)制。
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R512.62
【部分圖文】：

a：ELISA 檢測 HepAD38 細胞中轉(zhuǎn)染 pCDNA-linc00238 后 HBsAg 水平；b:ELISA 檢HepAD38 細胞中轉(zhuǎn)染 pCDNA-linc00238 后 HBeAg 水平；c：Western blot 檢測 HepAD3中轉(zhuǎn)染 pCDNA-linc00238 后 HBc 水平。圖 2-1 HepAD38 細胞過表達 Lnc00238 后 HBV 蛋白水平Figure2-1 HBV protein levels in HepAD38 cells up-regulated Linc002382.2 高表達 Linc00238 后抑制 HBV DNA 復(fù)制在 HepAD38 細胞中轉(zhuǎn)染 pCDNA-Linc00238，HBV DNA 復(fù)制水平較對照顯降低，HBV 復(fù)制中間體表達水平較對照組亦明顯降低（圖 2-2），結(jié)果證Linc00238 對 HBV DNA 復(fù)制具有抑制作用。

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文2.3 干擾 Linc00238 作用后上調(diào) HBV 蛋白表達水平在 HepAD38 細胞中過分別表達 Linc00238+sh-NC、Linc00238+sh-00238、pCDNA-NC+sh-00238、pCDNA-NC+sh-NC，用 ELISA 檢測 HBs 及 HBe 表達，結(jié)果顯示，過表達 Linc00238 后 HBV 蛋白表達水平得到抑制，而當(dāng)干擾外源性Linc00238 表達后，HBV 蛋白水平得到部分恢復(fù)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05，圖 2-3）。結(jié)果進一步明確，Linc00238 對 HBV 生活周期具有抑制作用
【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王艷巧;陳傳杰;張光文;;乙型肝炎病毒相關(guān)原發(fā)性肝癌的危險因素分析[J];肝臟;2019年10期

2 杜希芬;;電化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)在乙型肝炎病毒臨床檢驗中的應(yīng)用效果[J];心理月刊;2019年13期

3 買木熱·肉孜;阿不來提·阿不都熱合木;;拉米夫定治療乙型肝炎病毒引起失代償肝病臨床分析[J];大家健康(學(xué)術(shù)版);2015年06期

4 刀琴;;不同乙肝治療方法對抗結(jié)核治療中的肝功保護作用[J];健康之路;2016年09期

5 戴娘欽;;siRNA對乙型肝炎病毒抵抗的研究進展[J];中國醫(yī)藥指南;2012年02期

6 魏茂周;鄭嶸;董安山;王華麗;;胸腺肽α1預(yù)防乙型肝炎病毒再激活臨床研究[J];中國當(dāng)代醫(yī)藥;2012年07期

7 李鋼;胡明道;;乙型肝炎病毒X蛋白在肝細胞癌發(fā)生發(fā)展中的作用[J];醫(yī)學(xué)綜述;2012年11期

8 陳惠文;劉壬通;羅宜招;賀勇鋒;;乙型肝炎病毒外膜大蛋白檢測的臨床應(yīng)用[J];中國醫(yī)藥指南;2010年22期

9 劉魚;王憬惺;李武平;黃毅;曾沛斌;何苗;;HIV感染獻血者中乙型肝炎病毒的感染特征研究[J];中國輸血雜志;2010年S1期

10 趙燕飛;姜新華;蘭天麗;;乙型肝炎病毒大蛋白檢測的臨床意義及應(yīng)用價值[J];中國衛(wèi)生檢驗雜志;2010年12期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 盛秋菊;乙型肝炎病毒母嬰傳播阻斷策略和病毒變異與阻斷失敗關(guān)系的研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2018年

2 王亞琦;酒精性脂肪性肝病合并乙型肝炎病毒肝內(nèi)復(fù)制小鼠模型的建立及其對膽固醇代謝的影響研究[D];華中科技大學(xué);2018年

3 李伯安;乙型肝炎病毒e抗原相互作用蛋白基因的克隆化及功能的初步研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2004年

4 王玥;應(yīng)用RNAi抑制乙型肝炎病毒復(fù)制和表達的研究[D];吉林大學(xué);2004年

5 王迅;á干擾素誘導(dǎo)的細胞蛋白與乙型肝炎病毒相互作用關(guān)系的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2004年

6 劉曉紅;乙型肝炎病毒X蛋白羧基端缺失突變體對肝癌細胞生物學(xué)行為的影響及其機制的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2005年

7 王剛;HBV感染HepG2細胞早期過程研究[D];山東大學(xué);2005年

8 鄧春青;四個HBV感染相關(guān)候選基因的SNP關(guān)聯(lián)研究及初步功能鑒定[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2006年

9 楊桂濤;HLA-DRB1基因和慢性HBV感染相關(guān)性的初步研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2006年

10 任廣立;siRNA抑制乙型肝炎病毒的復(fù)制和表達的實驗研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2006年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 黃琴;Linc00238在乙型肝炎病毒復(fù)制中的調(diào)控作用[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2019年

2 陳紅;乙型肝炎病毒X蛋白調(diào)控cGAS信號通路的機制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2019年

3 楊軍;NOX2促進乙型肝炎病毒復(fù)制的機制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2019年

4 王靜;鴨乙型肝炎病毒環(huán)介導(dǎo)等溫擴增檢測系統(tǒng)的建立及其基因組序列分析[D];南陽師范學(xué)院;2019年

5 沈志清;乙型肝炎病毒S蛋白對人APOAⅡ基因調(diào)控及機制[D];福建醫(yī)科大學(xué);2018年

6 蔣佳宏;HBV整合調(diào)控肝癌細胞系HepG2.2.15凋亡及其機制的研究[D];浙江中醫(yī)藥大學(xué);2019年

7 趙詠旺;原發(fā)性肝癌精確放療后乙型肝炎病毒（HBV）再激活分類預(yù)測[D];齊魯工業(yè)大學(xué);2019年

8 李紅梅;α干擾素對HBV基因型Ⅰ抗病毒作用初步研究[D];昆明理工大學(xué);2015年

9 熊智;Na~+-牛磺膽酸共轉(zhuǎn)運多肽的表達純化與行為表征的研究[D];哈爾濱工業(yè)大學(xué);2018年

10 趙文昕;血液系統(tǒng)腫瘤患者乙型肝炎病毒（HBV）感染及其臨床結(jié)局分析[D];山東大學(xué);2018年

本文編號：2885193