目的:分析丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)抗體陽性人群血清中miR-134和miR-92a表達(dá)水平的變化,并初步探討miR-134和miR-92a檢測在HCV感染診斷及疾病進(jìn)展評估中的應(yīng)用價值。方法:選取遼寧國際旅行衛(wèi)生保健中心2016年1月至9月檢測的丙型肝炎病毒抗體陽性體檢者60例血清樣本和60例健康對照者的血清樣本。采用實時熒光定量PCR(realtime fluorescencequantitative PCR)法對血清中miR-134和miR-92a的表達(dá)水平進(jìn)行相對定量檢測,分析其在Anti-HCV陽性組和健康對照組中的表達(dá)差異。結(jié)果:1.受檢者基本參數(shù)分析顯示,健康對照組和Anti-HCV陽性組在性別構(gòu)成上的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);在年齡分布上,Anti-HCV陽性組平均年齡高于健康對照組平均年齡(P0.05);Anti-HCV陽性組ALT、HCV RNA定量水平均明顯高于健康對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。2.實驗得出,60各血清樣本的總RNA濃度范圍為24.8-44.6 ng/ul。為了得到相同的擴(kuò)增效率,本實驗將個樣本總RNA濃度一致化,都調(diào)整到20ng/ul。3.通過文獻(xiàn)查閱,可知血清miRNA定量檢測所選的內(nèi)參主要有兩種,即U6和miR-16。兩種內(nèi)參基因表達(dá)都有高穩(wěn)定性的特點,但有文獻(xiàn)指出,在對照組和患病組中miR-16的表達(dá)有一定的變化。所以,本研究的內(nèi)參選用U6,并對RNU6B表達(dá)的穩(wěn)定性進(jìn)行驗證。驗證得出,對照組與HCV抗體陽性組間U6 snRNA的Ct值未有明顯差異(P=0.6530.05),結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)資料~([1]),認(rèn)為U6 snRNA可以作為該實驗內(nèi)參基因。4.Anti-HCV陽性組血清中miR-134和miR-92a的表達(dá)水平較健康對照組均有明顯增加,而且差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.0120.05),可能是丙型肝炎病毒感染直接或間接促進(jìn)了miR-134和miR-92a表達(dá)的上調(diào)。5.受試者工作特征曲線(receiver-operator characteristic curve,ROC)分析顯示結(jié)果顯示miR-134和miR-92a的AUC值分別為0.9867(95%CI:0.9724-1.001,P0.0001)和0.8931(95%CI:0.8365-0.9496,P0.0001);在臨界值6.115×10~(-5)(miR-134)和4.231×10~(-2)(miR-92a)處,miR-134和miR-92a對丙型肝炎病毒感染的診斷靈敏度和特異度分別為80%、98.33%和61.67%、98.33%。miR-134和miR-92a作為HCV感染的血清學(xué)指標(biāo),具有潛在的診斷價值。6.通過SPSS20.0進(jìn)行相關(guān)性統(tǒng)計分析顯示,Anti-HCV陽性組血清中的miR-134和miR-92a之間存在明顯正相關(guān)性:相關(guān)系數(shù)r=0.823,P=0.000(0.05)。7.miR-134與ALT無相關(guān):r=0.203,P=0.119;miR-92a和ALT之間存在正相關(guān)性:r=0.341,P=0.0080.05;miR-134與HCV-RNA無相關(guān):r=-0.015,P=0.909;miR-92a與HCV-RNA無相關(guān):r=0.083,P=0.529。結(jié)論:1.與正常對照組相比,Anti-HCV陽性體檢者血清中miR-134和miR-92a的表達(dá)水程度均有不同程度的增加,可能是丙型肝炎病毒感染直接或間接促使了miR-134和miR-92a的表達(dá)上調(diào)。2.ROC分析結(jié)果提示,miR-134和miR-92a可作為潛在的血清學(xué)診斷指標(biāo),在HCV檢測方面有重要意義。3.相關(guān)性分析顯示血清中miR-134和miR-92a之間的表達(dá)水平存在正相關(guān);miR-92a與ALT表達(dá)水平存在正相關(guān),miR-134與ALT及HCV RNA表達(dá)水平均未見明顯相關(guān)性;而miR-92a與HCV RNA也未見明顯相關(guān)性。表明血清中miR-134和miR-92a可能成為HCV感染的單獨診斷及病程發(fā)展監(jiān)控的指標(biāo)。
【學(xué)位單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R512.63
【部分圖文】：

圖 1Anti-HCV 陽性組和健康對照組 U6 snRNA 的 Ct 值讀數(shù)明，對照組與 HCV 抗體陽性組間 U6 snRNA 的 Ct 值未有明5），結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)資料[1]，認(rèn)為 U6 snRNA 可以作為該實驗內(nèi) miRNA 的表達(dá)水平。組 miR-134 和 miR-92a 表達(dá)水平比較-HCV 陽性組血清中 miR-134 和 miR-92a 的表達(dá)水平較健康對且差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.012<0.05），可能是丙型肝炎病了 miR-134 和 miR-92a 表達(dá)的上調(diào)(見圖 2)。

圖 1Anti-HCV 陽性組和健康對照組 U6 snRNA 的 Ct 值讀數(shù)結(jié)果表明，對照組與 HCV 抗體陽性組間 U6 snRNA 的 Ct 值未有明顯差異（53>0.05），結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)資料[1]，認(rèn)為 U6 snRNA 可以作為該實驗內(nèi)參基因不同靶 miRNA 的表達(dá)水平。）不同組 miR-134 和 miR-92a 表達(dá)水平比較Anti-HCV 陽性組血清中 miR-134 和 miR-92a 的表達(dá)水平較健康對照組均加，而且差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.012<0.05），可能是丙型肝炎病毒感染接促進(jìn)了 miR-134 和 miR-92a 表達(dá)的上調(diào)(見圖 2)。

大連醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文（五）miR-134 和 miR-92a 的 ROC 分析利用受試者工作特征曲線工具分析，可評估血清中 miR-134 和 miR-92a 是可作為潛在的丙型肝炎病毒感染血清學(xué)診斷指標(biāo)。結(jié)果顯示 miR-134 和 miR-9的 AUC 值分別為 0.9867（95%CI：0.9724-1.001，P<0.0001）和 0.8931（95%CI0.8365-0.9496，P<0.0001）；在臨界值 6.115×10-5（miR-134）和 4.231×1（miR-92a）處，miR-134 和 miR-92a 對丙型肝炎病毒感染的診斷靈敏度和特異分別為 80%、98.33%和 61.67%、98.33%(圖 3 中 miR-134 和 miR-92a 的 Identi數(shù)值相同均為 98.33，線條重合，miR-92a 的黑色 Identity 線被 miR-134 的綠Identity 線覆蓋，未顯現(xiàn)出)。二者作為 HCV 感染的血清學(xué)指標(biāo)，具有潛在的診價值。（見圖 3）
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前7條

1 ;中國丙型肝炎流行病學(xué)狀況與反思[J];臨床合理用藥雜志;2013年26期

2 梁秀清;李佳英;烏云斯琴;;ELISA法與2種GICA法檢測丙型肝炎病毒抗體結(jié)果分析[J];疾病監(jiān)測與控制;2010年09期

3 李卓;;HCV標(biāo)志物及檢測[J];中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志;2010年03期

4 Shashi Bala;Miguel Marcos;Gyongyi Szabo;;Emerging role of microRNAs in liver diseases[J];World Journal of Gastroenterology;2009年45期

5 ;MicroRNA signatures in liver diseases[J];World Journal of Gastroenterology;2009年14期

6 李成梅,鄭繼剛,杜桂森;miRNA:一種新的基因表達(dá)調(diào)節(jié)子[J];遺傳;2004年01期

7 葉茂,陳躍磊,明鎮(zhèn)寰;miRNA(microRNA)家族的研究進(jìn)展[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2003年03期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 張少波;病毒傳染性疾病中miRNA的調(diào)控功能及診斷效能的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

本文編號：2857324