1目的:旨在掌握我國東北黑龍江牡丹江、華中河南三門峽、華東福建武夷山和華南廣西憑祥這四個地區(qū)的自然風(fēng)景區(qū)的蜱以及鼠形動物、鳥等宿主動物體內(nèi)伯氏疏螺旋體、斑點熱群立克次體、嗜吞噬細胞無形體及巴貝西原蟲這四種病原體的感染及復(fù)合感染情況,選取了牡丹江鏡泊湖、三門峽甘山國家森林公園、武夷山風(fēng)景區(qū)及憑祥友誼關(guān)這四個自然風(fēng)景區(qū),分析上述自然風(fēng)景區(qū)蜱媒傳染病感染的風(fēng)險,為該自然風(fēng)景區(qū)做好科學(xué)合理且經(jīng)濟有效的蜱媒傳染病的防控工作提供基礎(chǔ)的理論支持,以便能夠做到對自然風(fēng)景區(qū)蜱媒傳染病的早期預(yù)警。2方法:采用人工布旗法在調(diào)查地區(qū)草叢或林中捕捉游離蜱;在哺乳動物如牛、羊、犬等體表采集寄生蜱;采用夾夜法捕獲鼠形動物,取其膀胱、脾等組織;用網(wǎng)捕法捕獲鳥類,取其血液、肝臟等組織。將標(biāo)本帶回實驗室分類鑒定后提取DNA,采用PCR或Nested-PCR法擴增基因片斷,然后進行瓊脂糖凝膠電泳及凝膠成像系統(tǒng)觀察結(jié)果,以判定標(biāo)本感染病原體情況,隨機選取陽性標(biāo)本進行測序和序列分析。應(yīng)用c2檢驗或Fisher確切概率法進行統(tǒng)計分析,判定采集地區(qū)四種病原體的感染情況,并采用軟件MEGA5.0構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹分析序列,確定病原體的分類學(xué)位置。3結(jié)果:檢測牡丹江鏡泊湖地區(qū)2012年和2013年采集到嗜群血蜱781只,全溝硬蜱70只,日本血蜱52只,對全部蜱標(biāo)本進行四種病原體檢測發(fā)現(xiàn):(1)伯氏疏螺旋體陽性標(biāo)本12只,感染率為1.33%。全溝硬蜱、嗜群血蜱、日本血蜱的感染率分別為15.71%、0.17%、0.00%,經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析,三個蜱種之間伯氏疏螺旋體的感染率有統(tǒng)計學(xué)差異(c2=50.03,P0.05)。經(jīng)測序比對分析發(fā)現(xiàn),牡丹江鏡泊湖檢測的陽性蜱標(biāo)本中,伯氏疏螺旋體屬于B.afzelii型和B.garinii型。(2)斑點熱群立克次體陽性標(biāo)本57只,感染率6.31%。全溝硬蜱、嗜群血蜱和日本血蜱的感染率分別為35.71%、3.97%、1.92%,經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析,三個蜱種之間斑點熱群立克次體的感染率有統(tǒng)計學(xué)差異(c2=63.29,P0.05)。經(jīng)測序比對分析發(fā)現(xiàn),牡丹江鏡泊湖檢測的陽性蜱標(biāo)本中,斑點熱群立克次體屬于Rickettsia heilongjiangii、Rickettsia raoultii、Candidatus Rickettsia tarasevichiae和一種未知的斑點熱群立克次體。(3)嗜吞噬細胞無形體陽性標(biāo)本2只,感染率0.22%,感染嗜吞噬細胞無形體的的蜱標(biāo)本均為全溝硬蜱。各蜱種間感染率無明顯差異(c2=5.04,P﹥0.05)。經(jīng)測序比對發(fā)現(xiàn),牡丹江鏡泊湖檢測的的陽性蜱標(biāo)本中,嗜吞噬細胞無形體與中俄邊境菌株及中國東北菌株距離最近。(4)巴貝西原蟲陽性標(biāo)本2只,陽性感染率為0.22%,感染巴貝西原蟲的的蜱標(biāo)本均為全溝硬蜱。各蜱種間感染率無明顯差異(c2=5.04,P﹥0.05)。經(jīng)測序比對發(fā)現(xiàn),牡丹江鏡泊湖檢測的陽性蜱標(biāo)本中,巴貝西原蟲屬于Babesia microti。此外,在牡丹江鏡泊湖檢測的全溝硬蜱標(biāo)本中,存在伯氏疏螺旋體和嗜吞噬細胞無形體、伯氏疏螺旋體和巴貝西原蟲及伯氏疏螺旋體和斑點熱群立克次體的復(fù)合感染情況。牡丹江鏡泊湖附近捕獲的12只鼠形動物中未檢測到四種病原體。河南三門峽甘山附近采集的248只長角血蜱中,檢測到斑點熱群立克次體陽性標(biāo)本1只,感染率為0.40%,經(jīng)測序比對發(fā)現(xiàn),檢測的陽性蜱標(biāo)本中的斑點熱群立克次體與Rickettsia sp.(福建、河北、韓國等分離菌株)在同一分支,同源性最近。廣西憑祥友誼關(guān)附近采集到的161只具角血蜱中未檢測到上述四種病原體的存在;在該地區(qū)捕獲的53只鼠形動物中,檢測到3只鼠形動物感染了伯氏疏螺旋體,感染率5.66%,經(jīng)測序比對發(fā)現(xiàn),檢測的陽性標(biāo)本中,伯氏疏螺旋體屬于B.valaisiana。福建武夷山附近采集31只寄生蜱中均未檢測到上述四種病原體的存在。4結(jié)論:本課題對上述四個自然風(fēng)景區(qū)內(nèi)蜱及鼠形動物、鳥標(biāo)本中四種重要的蜱媒傳染病的病原體進行了初步的研究和探討。牡丹江鏡泊湖的蜱標(biāo)本中檢測到了伯氏疏螺旋體、斑點熱群立克次體、嗜吞噬細胞無形體及巴貝西原蟲四種病原體的感染,而且全溝硬蜱感染了上述四種病原體,在全溝硬蜱中還存在復(fù)合感染的情況;河南三門峽甘山森林公園的蜱標(biāo)本中檢測出了斑點熱群立克次體的感染;廣西憑祥友誼關(guān)的鼠形動物標(biāo)本中檢測出了伯氏疏螺旋體的感染。本研究為我國自然風(fēng)景區(qū)的蜱媒傳染病的深入研究奠定了基礎(chǔ),自然風(fēng)景區(qū)內(nèi)蜱及蜱媒傳染病的防控工作應(yīng)該引起公共衛(wèi)生機構(gòu)的重視。
【學(xué)位單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類】：R51
【部分圖文】：

圖 3-1 牡丹江鏡泊湖不同蜱種伯氏疏螺旋體感染情況條形圖建武夷山蜱標(biāo)本中伯氏疏螺旋體情況感染情況建武夷山采集的 31 只蜱標(biāo)本進行檢測，經(jīng)伯氏疏螺旋體 5S～隔區(qū)進行巢式 PCR 的擴增結(jié)果顯示，蜱標(biāo)本中未檢測到陽性蜱標(biāo)本中沒有伯氏疏螺旋體感染。本中斑點熱群立克次體感染情況西憑祥蜱標(biāo)本中斑點熱群立克次體感染情況測的蜱標(biāo)本使用普通 PCR 擴增斑點熱群立克次體 ompA 基因161 只具角血蜱中未檢測到陽性標(biāo)本，說明檢測的蜱標(biāo)本中沒體感染。南三門峽蜱標(biāo)本中斑點熱群立克次體感染情況南三門峽甘山森林公園附近采集的蜱標(biāo)本進行檢測，共檢測 2

圖 3-2 牡丹江鏡泊湖不同蜱種斑點熱群立克次體感染情況條形 福建武夷山蜱標(biāo)本中斑點熱群立克次體感染情況福建武夷山風(fēng)景區(qū)附近采集的 31 只蜱標(biāo)本進行檢測，用普通 P立克次體 ompA 基因片段，結(jié)果顯示，蜱標(biāo)本中沒有檢測到陽性測的蜱標(biāo)本中沒有斑點熱群立克次體感染。標(biāo)本中嗜吞噬細胞無形體感染情況 廣西憑祥蜱標(biāo)本中嗜吞噬細胞無形體感染情況 161 只具角血蜱標(biāo)本進行檢測，采用巢式 PCR 的方法擴增蜱標(biāo)無形體檸檬酸鹽合成酶基因（gltA)片段，結(jié)果顯示，未檢測到陽測的蜱標(biāo)本中沒有嗜吞噬細胞無形體感染。 河南三門峽蜱標(biāo)本中嗜吞噬細胞無形體感染情況用巢式 PCR 方法，擴增蜱標(biāo)本中嗜吞噬細胞無形體檸檬酸鹽合)片段結(jié)果顯示，檢測的 248 只蜱標(biāo)本中未出現(xiàn)陽性感染標(biāo)本，

科學(xué)院碩士學(xué)位論文 蜱媒傳染病病原體分子生物學(xué)檢本 2 只，嗜吞噬細胞無形體陽性感染率 0.22%。其中 2 只陽性標(biāo)本均，全溝硬蜱的陽性感染率為 2.86%。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，牡丹江鏡泊湖北間嗜吞噬細胞無形體的陽性感染率無統(tǒng)計學(xué)差異( 2=5.04，P﹥0.05與全溝硬蜱的陽性感染率無統(tǒng)計學(xué)差異（P﹥0.05）；嗜群血蜱與全性感染率無統(tǒng)計學(xué)差異（P﹥0.05）。牡丹江鏡泊湖嗜吞噬細胞無形見表 3-3。表 3-3 牡丹江鏡泊湖不同蜱種嗜吞噬細胞無形體感染情況蜱種 檢測數(shù)（只） 陽性數(shù)（只） 陽性感染率（本血蜱 52 0 0.00群血蜱 781 0 0.00溝硬蜱 70 2 2.86合計 903 2 0.22
【參考文獻】

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1 王爽;寇增強;王梅;任艷艷;胡彬;房明;畢振旺;;一起人粒細胞無形體和查菲埃立克體符合感染病例的確認(rèn)和調(diào)查[J];疾病監(jiān)測;2012年08期

本文編號：2851633