白血病是一類骨髓造血干細(xì)胞的惡性克隆性疾病,其克隆中的白血病細(xì)胞增殖失控、分化障礙、凋亡受阻,停止在細(xì)胞發(fā)育的不同階段。在骨髓和其他造血組織中白血病細(xì)胞大量增生累積,并浸潤(rùn)其他組織和器官,而正常造血功能受抑制。白血病的分類較復(fù)雜,其發(fā)病機(jī)制目前尚不完全清楚。當(dāng)前采用的治療方法主要是支持治療、化療及造血干細(xì)胞移植等。盡管治療方法不斷改善,但其5年生存率仍是較低,其中急性髓系白血病年輕患者和年老患者5年生存率分別為60%和10%。因此,開發(fā)新的白血病治療方法是亟待解決的問(wèn)題。近年來(lái)的報(bào)道指出,寄生蟲感染和癌癥之間呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)。比如克魯斯錐蟲、剛地弓形蟲、旋毛蟲、犬弓首蛔蟲、卡氏棘阿米巴及約氏瘧原蟲等,均在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出抗癌效應(yīng)。瘧療,即利用瘧疾感染作為治療另一些疾病的簡(jiǎn)稱。Greentree LB于1981年明確提出了瘧療用于腫瘤治療的設(shè)想。瘧療在歷史上曾成功地應(yīng)用于治療神經(jīng)性梅毒。上世紀(jì)50年代德國(guó)的Werner Zabel教授曾用間日瘧治療過(guò)l9例癌癥病人。我國(guó)學(xué)者陳小平等,早在上世紀(jì)80年代就將瘧疾用于臨床上一些腫瘤患者的治療,也取得了一定的效果。1980年,世界衛(wèi)生組織(WHO)的統(tǒng)計(jì)資料顯示,世界各個(gè)瘧疾流行區(qū)的癌癥發(fā)病率都是最低的。Giugni曾報(bào)道,在瘧疾流行區(qū),癌癥死亡率幾乎減少一半。上世紀(jì)50年代,印度的瘧疾發(fā)病率較高,而癌癥很少見,到1980年,當(dāng)瘧疾有所控制后,癌癥病人卻增加了。文獻(xiàn)曾記載有數(shù)百例惡性腫瘤患者因感染了病原生物而康復(fù)的例子,美國(guó)科學(xué)家證實(shí)至少有150例患者當(dāng)時(shí)患過(guò)瘧疾或傷寒。我國(guó)河南省北部地區(qū)食道癌發(fā)病率很高,而該省南部地區(qū)瘧疾流行區(qū)的癌癥發(fā)病率卻很低。近年來(lái),實(shí)驗(yàn)證明瘧原蟲感染對(duì)一些動(dòng)物的實(shí)體瘤有一定的抗癌作用,但瘧原蟲感染對(duì)白血病的影響還未見報(bào)道。本研究以小鼠急性粒單核白血病細(xì)胞株WEHI-3接種BALB/c小鼠建立白血病模型,并以非致死型鼠約氏瘧原蟲(Plasmodium yoelii 17XNL)感染小鼠,探討了瘧原蟲感染對(duì)小鼠白血病的抑制作用及其作用機(jī)制。本論文包括《瘧原蟲感染對(duì)小鼠白血病抑制作用的觀察》及《瘧原蟲感染對(duì)小鼠白血病抑制作用的機(jī)制研究》兩部分。一、瘧原蟲感染對(duì)小鼠白血病抑制作用的觀察目的:通過(guò)構(gòu)建小鼠白血病模型,觀察瘧原蟲感染對(duì)小鼠白血病的抑制作用。方法:BALB/c小鼠分為5組(每組10只),A組為正常對(duì)照組;B組為瘧原蟲感染組,每只小鼠腹腔接種1×10~5個(gè)含P.yoelii的紅細(xì)胞(PRBC);C組為白血病組,每只小鼠腹腔接種1×10~5個(gè)小鼠急性粒單核白血病細(xì)胞(WEHI-3細(xì)胞);D組為瘧原蟲治療組,即先接種WEHI-3細(xì)胞(劑量同C組),1周后再感染瘧原蟲(劑量同B組);E組為瘧原蟲預(yù)防組,即先感染瘧原蟲(劑量同B組),2周后再接種WEHI-3細(xì)胞(劑量同C組)。接種WEHI-3細(xì)胞后每日觀察小鼠的一般情況,包括小鼠的毛色、體重變化、精神狀態(tài)、活動(dòng)情況等。接種WEHI-3細(xì)胞后第22天處死各組小鼠并進(jìn)行骨髓涂片和肝脾組織學(xué)檢查。結(jié)果:小鼠經(jīng)腹腔接種WEHI-3細(xì)胞后2周開始出現(xiàn)消瘦,拱背,豎毛,萎靡少動(dòng),腹部膨大,行動(dòng)遲緩,精神狀態(tài)較差。接種WEHI-3細(xì)胞后22天,小鼠骨髓涂片顯示幼稚粒單核細(xì)胞超過(guò)30%(按WHO標(biāo)準(zhǔn)骨髓中幼稚細(xì)胞≥20%即可診斷白血病),肝、脾結(jié)構(gòu)破壞,大量腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn),提示造模成功。無(wú)論是在接種WEHI-3細(xì)胞前感染P.yoelii或感染P.yoelii后接種WEHI-3細(xì)胞,小鼠均呈現(xiàn)一定的抗腫瘤作用,具體表現(xiàn)為骨髓中幼稚粒單核細(xì)胞比率均顯著下降(與未接種P.yoelii的白血病小鼠相比,p0.001);肝、脾組織中腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少,特別是接種WEHI-3細(xì)胞前感染P.yoelii組小鼠,肝、脾組織結(jié)構(gòu)未見明顯破壞。結(jié)論:以上結(jié)果提示,瘧原蟲感染對(duì)小鼠白血病具有抑制作用;預(yù)先感染瘧原蟲可抑制小鼠白血病的發(fā)生,該研究結(jié)果為闡明瘧疾流行區(qū)腫瘤發(fā)生率明顯低于非流行區(qū)的現(xiàn)象提供了實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。二、瘧原蟲感染對(duì)小鼠白血病抑制作用的機(jī)制研究目的:通過(guò)構(gòu)建小鼠白血病模型,研究瘧原蟲感染對(duì)小鼠白血病抑制作用的機(jī)制。方法:BALB/c小鼠分為5組(每組10只),A組為正常對(duì)照組;B組為瘧原蟲感染組,每只小鼠腹腔接種1×10~5個(gè)含P.yoelii的紅細(xì)胞(PRBC);C組為白血病組,每只小鼠腹腔接種1×10~5個(gè)WEHI-3細(xì)胞;D組為瘧原蟲治療組,即先接種WEHI-3細(xì)胞(劑量同C組),1周后再感染瘧原蟲(劑量同B組);E組為瘧原蟲預(yù)防組,即先感染瘧原蟲(劑量同B組),2周后再接種WEHI-3細(xì)胞(劑量同C組)。所有小鼠于接種WEHI-3細(xì)胞后第22天處死,從全血中分離白細(xì)胞,用熒光標(biāo)記的抗體染色,流式細(xì)胞儀檢測(cè)T細(xì)胞表面標(biāo)志(CD3)、B細(xì)胞表面標(biāo)志(CD19)、單核細(xì)胞表面標(biāo)志(CD11b)和巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志(Mac-3);用ELISA試劑盒檢測(cè)血清中IFN-γ和TNF-α含量;從腹腔分離巨噬細(xì)胞,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)巨噬細(xì)胞的吞噬功能;取脾細(xì)胞、以YAC-1細(xì)胞作為靶細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測(cè)NK細(xì)胞殺傷活性。結(jié)果:白血病組小鼠T細(xì)胞(CD3~+)和B細(xì)胞(CD19~+)數(shù)量明顯低于正常組,而單核細(xì)胞(CD11b~+)和巨噬細(xì)胞(Mac-3~+)數(shù)量明顯高于正常組。小鼠無(wú)論是在接種WEHI-3細(xì)胞前感染P.yoelii或感染P.yoelii后接種WEHI-3細(xì)胞,T細(xì)胞和B細(xì)胞的水平均顯著升高而單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的水平明顯下降,與未感染瘧原蟲的白血病組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.001),提示瘧原蟲感染提高了T、B細(xì)胞的增殖能力而抑制了單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的增殖,與此同時(shí),Th1型細(xì)胞因子IFN-γ和TNF-α的含量增加。結(jié)果還顯示感染瘧原蟲后,白血病小鼠的巨噬細(xì)胞吞噬活性和NK細(xì)胞殺傷活性明顯增強(qiáng),與未感染瘧原蟲的白血病組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.001),提示固有免疫也參與了抗腫瘤效應(yīng)。結(jié)論:瘧原蟲感染對(duì)小鼠白血病具有抑制作用,其機(jī)制為瘧原蟲感染提高了宿主的保護(hù)性免疫應(yīng)答,包括固有免疫和適應(yīng)性免疫。
【學(xué)位單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R531.3;R733.7
【部分圖文】：

圖 1 瘧原蟲的生活史（Ménard, 2013）Fig.1 The life cycle of Plasmodium（Ménard, 2013）不同的蟲株及瘧原蟲感染的不同時(shí)期均會(huì)產(chǎn)生特異性的免疫應(yīng)答，所以宿主針對(duì)瘧原蟲的免疫反應(yīng)也很復(fù)雜。宿主的固有免疫和適應(yīng)性免疫均參與了這個(gè)過(guò)程[2-8]。不管是人類瘧疾還是鼠瘧模型，對(duì)于固有免疫的作用機(jī)制還知之甚少。DC、巨噬細(xì)胞及 NK 細(xì)胞均在瘧原蟲的固有免疫中發(fā)揮重要作用。同時(shí)這些細(xì)胞可以產(chǎn)生一些調(diào)節(jié)性細(xì)胞因子，從而影響適應(yīng)性免疫。從免疫小鼠分離出的骨髓來(lái)源的 DC、Mφ 和 B 細(xì)胞均能遞呈瘧原蟲抗原給T 細(xì)胞[9]。不管是固有免疫還是適應(yīng)性免疫，DC 作為 APC，均發(fā)揮著關(guān)鍵性的

圖 2 紅內(nèi)期瘧原蟲的固有免疫和適應(yīng)性免疫（Stevenson, 2004）Fig.2 Innate and adaptive immunity of blood-stage malaria（Stevenson, 2004）白血病是一類骨髓造血干細(xì)胞的惡性克隆性疾病[22]，其克隆中的白血病細(xì)胞增殖失控、分化障礙、凋亡受阻，停止在細(xì)胞發(fā)育的不同階段[23,24]。在骨髓和其他造血組織中白血病細(xì)胞大量增生累積，并浸潤(rùn)其他組織和器官，而正常造血受抑制[25,26]。這是一類嚴(yán)重危害人類健康的造血系統(tǒng)惡性腫瘤，在世界范圍內(nèi)，白血病的發(fā)病率約為 15/100,000，且每年遞增[27]。在美國(guó)，每年約有 3.7/100,000的成人死于白血病[28]，兒童腫瘤發(fā)病率中白血病占首位[29]。在中國(guó)，惡性腫瘤死亡率中白血病占第六位（男性）和第八位（女性），而在兒童和 35 歲以下的人群中占第一位[30,31]。白血病的分類較復(fù)雜，其發(fā)病機(jī)制目前尚不完全清楚。當(dāng)前

圖 4 小鼠一般情況觀察A：正常小鼠；B：白血病小鼠，出現(xiàn)拱背；C：白血病小鼠，腹部膨大Fig.4 The general status of miceA：Normal mice；B：Leukemic mice，in extrados；C：Leukemic mice，abdominaldistension2. 肝脾重量白血病組小鼠接種 WEHI-3 細(xì)胞 2 周后開始出現(xiàn)腹部腫大。小鼠接種 WEHI-3 細(xì)胞后第 22 天處死小鼠，分離出肝、脾，拍照并稱重。
【參考文獻(xiàn)】

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1 于金玲;劉孝剛;;旋毛蟲感染誘導(dǎo)的抗MCF-7腫瘤細(xì)胞作用[J];畜牧與獸醫(yī);2012年01期

2 聶作良;聶淼;廖志剛;馬道明;徐建明;王志光;;瘧疾療法治療腫瘤的可行性及其要點(diǎn)探討[J];醫(yī)學(xué)信息(上旬刊);2011年09期

3 張媛媛;宮鵬濤;張西臣;李建華;楊舉;張國(guó)才;;旋毛蟲抗C57BL/6小鼠體內(nèi)Hepa1-6肝癌細(xì)胞作用的研究[J];中國(guó)病原生物學(xué)雜志;2009年01期

4 楊小軍;袁芳;黃艷琴;胡銀英;戴志芳;彭衛(wèi)東;袁鏗;;蛔蟲體腔液對(duì)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒作用[J];實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué);2008年06期

5 李霞;張國(guó)才;張西臣;李建華;楊舉;宮鵬濤;徐鵬;;旋毛蟲對(duì)BALB/c小鼠體內(nèi)人結(jié)腸癌HCT-8細(xì)胞的作用[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;2008年04期

6 宮鵬濤;張西臣;李建華;張國(guó)才;楊舉;曹利利;張景芝;;旋毛蟲抗小鼠體內(nèi)A549肺癌細(xì)胞作用的研究[J];中國(guó)病原生物學(xué)雜志;2008年03期

7 王學(xué)林;楊世杰;吳秀萍;于申業(yè);葉春艷;鄧洪寬;魏征仁;王衛(wèi)芳;王芯蕊;劉明遠(yuǎn);;旋毛蟲蟲體蛋白對(duì)肝癌細(xì)胞H7402的抑制作用[J];中國(guó)腫瘤生物治療雜志;2007年05期

8 劉英杰;朱曉彤;馬世紅;李季;;瘧疾療法抗腫瘤效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)觀察[J];中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào);2006年10期

9 秘營(yíng)昌;王建祥;;我國(guó)急性白血病的診斷治療現(xiàn)狀[J];國(guó)際輸血及血液學(xué)雜志;2006年04期

10 吳濤;張西臣;李建華;劉全;尹繼剛;楊舉;;旋毛蟲抗小鼠體內(nèi)SP2/0腫瘤作用的研究[J];中國(guó)寄生蟲病防治雜志;2005年06期

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1 楊小軍;人蛔蟲提取物抗腫瘤作用及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D];南昌大學(xué);2009年

2 董征;小鼠粒單細(xì)胞白血病模型的建立及相關(guān)白血病基因表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2009年

本文編號(hào)：2836695