第一部分miRNA-451a及其靶基因在結(jié)核病發(fā)病過程中的作用[目的]:本研究旨在揭示miRNA-451a在結(jié)核病發(fā)病過程中發(fā)揮的調(diào)節(jié)作用。通過分析miRNA-451a及其部分靶基因在繼發(fā)性肺結(jié)核、血行播散型結(jié)核病患者和健康人中的表達(dá)差異,分析其在結(jié)核病發(fā)生發(fā)展過程中的作用。并建立細(xì)胞感染模型,進(jìn)一步驗(yàn)證miRNA-451a的調(diào)節(jié)作用。同時(shí)通過對(duì)細(xì)胞感染模型的分析,揭示miRNA-451a對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬細(xì)菌和殺菌抑菌作用的影響。[方法]:收集符合入組標(biāo)準(zhǔn)的繼發(fā)性肺結(jié)核患者、血行播散型結(jié)核病患者和健康人的外周靜脈血樣本,對(duì)所有納入標(biāo)本進(jìn)行RNA提取,并將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA,通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR,對(duì)三組樣本的miRNA-451a及其靶基因MIF、MMP-9進(jìn)行相對(duì)定量分析,比較其差異。本研究細(xì)胞感染模型的構(gòu)建采用THP-1細(xì)胞,設(shè)計(jì)了 miRNA-451a類似物進(jìn)行轉(zhuǎn)染,使其表達(dá)上調(diào)或抑制。后續(xù)使用H37Rv標(biāo)準(zhǔn)毒株進(jìn)行細(xì)胞感染實(shí)驗(yàn),對(duì)miRNA-451a表達(dá)情況不同的細(xì)胞組進(jìn)行菌落形成單位(Colony-Forming Units,CFU)的對(duì)比,分析miRNA-451a對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬結(jié)核分枝桿菌以及細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌存活情況的影響。并通過Western Blot方法對(duì)感染后細(xì)胞內(nèi)MIF蛋白的表達(dá)水平進(jìn)行對(duì)比分析。[結(jié)果]:繼發(fā)性肺結(jié)核組中miRNA-451a及MMP-9的表達(dá)水平低于血行播散型結(jié)核病組及健康對(duì)照組的表達(dá)水平,而繼發(fā)性肺結(jié)核組與血行播散型結(jié)核病組的MIF表達(dá)水平均高于健康對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001)。在細(xì)胞模型中,miRNA-451 a表達(dá)水平升高會(huì)負(fù)向調(diào)控MIF基因的表達(dá)水平,同時(shí)細(xì)胞內(nèi)MIF蛋白水平亦降低。另外,miRNA-451a表達(dá)較高的巨噬細(xì)胞吞噬細(xì)菌能力顯著低于miRNA-451a表達(dá)較低的巨噬細(xì)胞,并且細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌存活率高于陰性對(duì)照,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001)。[結(jié)論]:miRNA-451a通過負(fù)向調(diào)控其靶基因MIF的表達(dá),減弱巨噬細(xì)胞抗結(jié)核分枝桿菌的活性,使結(jié)核分枝桿菌更容易逃脫巨噬細(xì)胞的免疫反應(yīng),并產(chǎn)生更嚴(yán)重的結(jié)核病臨床類型。第二部分三種細(xì)胞因子在結(jié)核性胸水與惡性胸水中的診斷價(jià)值[目的]:分析結(jié)核性胸水與惡性胸水中巨噬細(xì)胞遷移抑制因子(MIF)、孤核受體α(RORα)和孤核受體γ(RORα)水平的差異,探討其在肺結(jié)核和肺癌鑒別診斷中的價(jià)值。[方法]:選取已確診為肺結(jié)核和肺癌的凍存胸水樣本各80例,收集研究對(duì)象的基本信息,采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)各樣本胸水中的MIF、ROR α及ROR γ水平,應(yīng)用軟件SPSS20.0進(jìn)行對(duì)比分析。[結(jié)果]:結(jié)核組和肺癌組胸水中的MIF水平中位數(shù)(四分位數(shù))[M(Q1～Q3)]分別為 5.83(2.41～16.43)、2.79(0.91～11.12)ng/L,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);結(jié)核組和肺癌組胸水中ROR α水平和ROR γ水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。[結(jié)論]:肺結(jié)核患者胸水中MIF水平高于肺癌患者,胸水中MIF水平對(duì)結(jié)核性胸水和惡性胸水的鑒別有一定診斷價(jià)值,ROR α及RORγ的鑒別診斷能力仍有待進(jìn)一步驗(yàn)證。
【學(xué)位單位】：北京市結(jié)核病胸部腫瘤研究所
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R52
【部分圖文】：

的表達(dá)情況和差異，我們運(yùn)用了實(shí)時(shí)熒光定量ＰＣＲ技術(shù)對(duì)三種基因進(jìn)行相對(duì)定逡逑量分析。我們首先對(duì)各反應(yīng)的擴(kuò)增曲線以及溶解曲線進(jìn)行了初步觀察分析。其逡逑中一部分樣本的擴(kuò)增曲線和溶解曲線見圖Ｉ和圖２。由圖中的溶解曲線可知，曲逡逑線呈現(xiàn)為獨(dú)立的單峰，無其他雜峰或非特異性條帶出現(xiàn)，表明該定量ＰＣＲ結(jié)果逡逑可靠準(zhǔn)確，進(jìn)行相對(duì)定量分析，其結(jié)果亦較準(zhǔn)確。逡逑Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋Ｐｌｏｔ邐Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋Ｐｌｏｔ逡逑？＇邐—￣邐W￣逡逑＾邐ｆ邐－邐／邋ＭＭＰ－９逡逑ｉ邐／邐＇邐５邋，，，ａ－Ｖ逡逑：＞00＜邐、．邐Ｉ逡逑ｃｃｔａｏ＊邐ｔｏｎｏｉ逡逑ＣＯｔｔｔＤ＇邐－邋－邋－邋—邋－邐Ｃ３ＸＭ＇逡逑ＣＷ邐ｃ？ｌ逡逑Ａ邐Ｂ逡逑Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋Ｐｌｏｔ逡逑ｇａｐｄｈ／逡逑００１邋？邐／邋ＭＩＦ逡逑５邋１？逡逑瞻邐—Ｖ逡逑３００００１逡逑：sE逡逑Ｃｆ0ｅ逡逑Ｃ逡逑圖ｉ三種基因的擴(kuò)增曲線逡逑注：Ａ：ｍｉＲＮＡ－４５１ａ及其內(nèi)參Ｕ６擴(kuò)增曲線；Ｂ：ＭＭＰ－９及其內(nèi)參ＧＡｒｏＨ擴(kuò)增曲線；逡逑Ｃ：ＭＩＦ及其內(nèi)參ＧＡＰＤＨ擴(kuò)增曲線。逡逑２９逡逑

邋ｍｉＲＮＡ－４５１ａ在兩種不同類型結(jié)核病與健康人情況和差異逡逑通過實(shí)時(shí)熒光定量ＰＣＲ技術(shù)，對(duì)不同類型肺結(jié)核患者及健康人ｉＲＮＡ－４５１ａ的表達(dá)水平進(jìn)行相對(duì)定量分析。我們發(fā)現(xiàn)，健康人核病和繼發(fā)性肺結(jié)核患者三組人群屮ｎｕＲＮＡ－４５ｌａ的表達(dá)情況．００１）。對(duì)結(jié)果進(jìn)…步分析，發(fā)現(xiàn)繼發(fā)性肺結(jié)核患者外周血中的表達(dá)情況明顯低于健康人外周血中的ｍｉＲＮＡ邋？邋４５丨ａ表達(dá)情差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。另外，繼發(fā)性肺結(jié)核患者外周血中的ｍｉＲＮＡ明顯低于血行播散型結(jié)核病患者外周血中的ｍｉＲＮＡ－４５１ａ的水差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。然而，血行播散型結(jié)核病患者外周血的ｍｃｉｒ表達(dá)情況與健康人外周血■的ｍｉＲＮＡ邋－邋４５１ａ表達(dá)情況無明顯差圖邋３。逡逑

也明顯高于健康人（Ｐ＝邋０．００１），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。然而血行播散型結(jié)核病逡逑患者外周血的ＭＩＦ表達(dá)情況與繼發(fā)性肺結(jié)核患者之間無明顯差異（Ｐ邋＝邋０．８３３）。逡逑見圖４。逡逑ＭＩＦ逡逑邐＾邐逡逑S緬義希溴澹保埃у�？？逦＊＊辶x希煎�？？邋逦辶x希掊�？？逦．辶x希埃擔(dān)危�？？逦：？？？辶x希浚�？？辶x希埃板澹叔五巍澹梢誨義賢跡村澹停保圃諶檠局械南嘍員澩鎪藉義獻(xiàn)ⅲ河茫硎荊繡澹跡埃埃擔(dān)揮茫硎荊繡澹跡埃埃保揮茫硎荊校跡埃埃埃薄ｅ義希矗玻玻沖危停停校澹乖諏街植煌嘈徒岷瞬∮虢】等巳褐械謀澩镥義锨榭齪筒鉅戾義希停停校乖諶槿巳褐械謀澩鍇榭鼉哂型臣蒲Р鉅歟ǎ繡澹藉澹埃埃埃保�。进一步钒櫫x希常插義

本文編號(hào)：2834365