背景:近年來醫(yī)療技術得到快速發(fā)展,侵襲性操作技術的提高、HIV感染者的增多、放療、化療應用等因素,使醫(yī)院內侵襲性念珠菌血癥的發(fā)病率不斷上升,由于念珠菌血癥患者大多基礎狀態(tài)差、病死率高,目前臨床醫(yī)生預防性及治療性使用抗真菌藥物的頻率較過去顯著增多,臨床分離念珠菌株也出現(xiàn)了耐藥現(xiàn)象。為了更好的預防控制醫(yī)院內感染念珠菌血癥的發(fā)病率,制定科學合理的防控措施,同時探討念珠菌對唑類抗真菌藥物的耐藥機制,更好的合理使用抗真菌藥物,本研究收集南昌大學第一附屬醫(yī)院2015年2月至2016年8月念珠菌血癥患者中血液分離的致病真菌,鑒定后進行體外藥敏試驗得到耐唑類抗真菌藥物的念珠菌,通過PCR擴增ERG3基因與ERG11基因并測序,將測序結果與基因庫里標準菌株進行比對分析,確定突變基因~([1]),探討念珠菌對唑類抗真菌藥物的耐藥機制,為臨床醫(yī)生對侵襲性念珠菌血癥患者的預防及治療提供參考依據(jù)。目的:1、收集念珠菌血癥患者的致病真菌,進行菌株鑒定及體外藥物敏感性實驗,篩選出耐唑類抗真菌藥物的白念珠菌、熱帶念珠菌菌株;2、探討白念珠菌、熱帶念珠菌對唑類抗真菌藥物的耐藥機制。方法:收集南昌大學第一附屬醫(yī)院住院患者,血液中分離的真菌,經(jīng)形態(tài)學、分子生物學鑒定,確定為白念珠菌和熱帶念珠菌,然后應用美國臨床試驗標準化研究所M27-A3方案進行體外藥敏實驗,篩選出耐唑類抗真菌藥物的耐藥菌株。通過PCR擴增耐藥株靶酶基因ERG11與ERG3并測序,在NCBI基因庫里比對分析找出突變位點,分析其突變與耐藥是否有關。結果:1、從念珠菌血癥患者血液中共分離出52株念珠菌,其中熱帶念珠菌17株(32.69%),白念珠菌16株(30.77%),光滑念珠菌14株(26.92%),其他念珠菌2株。發(fā)現(xiàn)1株白念珠菌與6株熱帶念珠菌為唑類藥物耐藥株。2、經(jīng)體外藥敏實驗篩出耐唑類抗真菌藥物的白念菌株1株、熱帶念珠菌6株。3、白念珠菌ERG3基因發(fā)現(xiàn)2個(T381C,T432C)同義突變,未發(fā)現(xiàn)錯義突變;白念珠菌ERG11基因發(fā)現(xiàn)2個(T394C,C615A)錯義突變,導致第132位酪氨酸突變?yōu)榻M氨酸,第205位酪氨酸突變?yōu)楣劝彼?和2個(T485A,C795T)同義突變;熱帶念珠菌ERG11發(fā)現(xiàn)2個(A395T,C461T,)發(fā)生錯義突變,導致第132位酪氨酸突變?yōu)楸奖彼?第154位絲氨酸突變?yōu)楸奖彼?和3個(T225C,G264A,T35G)同義突變;熱帶念珠菌ERG3基因發(fā)現(xiàn)6個(T35G,A334G,C527G,C815A,C820A,T38A)錯義突變:導致第12位亮氨酸突變?yōu)榻M氨酸,第112位絲氨酸突變?yōu)楦拾彼?第176位丙氨酸突變?yōu)樘於彼?第272位脯氨酸突變?yōu)楣劝滨０?第274位組氨酸突變?yōu)樘於０?第13位苯丙氨酸突變?yōu)槔野彼?和4個(A366G,T912A,C528A,T531C)同義突變。4、結論:1、我院念珠菌菌血癥中,熱帶念珠菌所占比例最高,其次為白念珠菌,非白念珠菌占我院念珠菌血癥第一位。2、念珠菌血癥中,分離出的熱帶念珠菌、白念珠菌對唑類抗真菌藥物存在一定比例的耐藥。3、白念珠菌和熱帶念珠菌對唑類抗真菌藥物耐藥機制與ERG11、ERG3基因的突變有關。
【學位單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R519.3
【部分圖文】：

11313 0.5 0.125 0.12511063 0.5 0.015 0.12513018 0.5 0.015 0.1258379 0.5 0.015 0.1259061 0.25 0.015 0.06光滑念珠菌（菌株編號） 氟康唑 伏立康唑 伊曲康唑1312612075120764410.50.1250.12510.250.5PCR 擴增結果圖 1~2。對 7 株臨床分離的念珠菌（1 株白念珠菌與 6 株熱帶念珠R 擴增,均能獲得預計產(chǎn)物,大小與 DNA Marker 比較,位置相符,無非。

圖 2 熱帶念珠菌 ERG3 基因片段凝膠電泳結果結果ERG11基因與ERG3基因測得的堿基序列如下，（登錄號 AY856352 和 M23673）進行比對找出 的 A 計數(shù)為 1，確定突變基因；使用 DNAMAN 變與錯義突變及導致的氨基酸的變化。38 ERG11CCATACGAATTCTTTGAAAAGTGCAGATTGAATTATGTTATTAGGTAAAGTTATGACTGTTTATTTATTCATTTACAATGCTAAATTATCCGATGTTTCTATTTGACTACTCCTGTTTTTGGTAAAGGTGTTATAGATTAATGGAACAAAAGAAGTTTGCTAAATTTCAAAACCTATGTTCCAAAGATCAGAGAAGAAACGATGTTAGTTTCAAAACCAAGGAAAGAGA

【參考文獻】

相關期刊論文 前4條

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相關碩士學位論文 前3條

1 買佳;白色念珠菌ERG11基因突變與其耐三唑類抗真菌藥物的關系[D];鄭州大學;2015年

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本文編號：2833550