目的：染色體易位是急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)最常見(jiàn)的細(xì)胞遺傳學(xué)異常。t(8;21)(q22;q22)是AML中最常見(jiàn)的染色體易位,易位形成的AML1-ETO融合基因是t(8；21)AML的顯著特征和始發(fā)因素,同時(shí),存在其他的事件協(xié)同引起AML的發(fā)生。研究證實(shí),AML1-ETO的選擇性剪切體AML1-ETO9a與此類白血病的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān),但AML1-ETO9a產(chǎn)生的調(diào)控機(jī)制目前尚不清楚。材料與方法：1、收集21例AML1-ETO陽(yáng)性配對(duì)樣本(同一患者不同病程的樣本,包含初治或者復(fù)發(fā)的樣本以及緩解的樣本),2例AML1-ETO陰性(也屬于AML-M2患者)配對(duì)樣本,進(jìn)行外顯子高通量測(cè)序分析體細(xì)胞突變數(shù)；對(duì)23例樣本的突變基因重現(xiàn)性分析；2、從大量AML臨床樣本和正常人骨髓表達(dá)芯片數(shù)據(jù)庫(kù)中,分析不同染色體核型樣本中,富含絲氨酸／精氨酸剪接因子(serine/arginine-rich splicing factor, SRSF)總體上的表達(dá)水平;分析22例AML1-ETO陽(yáng)性、22例AML1-ETO陰性和5例正常人骨髓中表達(dá)芯片數(shù)據(jù)庫(kù),找出在AML1-ETO陽(yáng)性樣本中異常高表達(dá)的剪切因子SRSF2、SRSF6和SRSF11;克隆ETO9a外顯子及其側(cè)翼序列,體外轉(zhuǎn)錄,RNA沉淀(RIP),質(zhì)譜分析,對(duì)所得到的145個(gè)差異且有意義的蛋白進(jìn)行信號(hào)途徑分析;Western blot對(duì)RIP及質(zhì)譜結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證;3、構(gòu)建SRSF2的慢病毒表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染細(xì)胞株,克隆形成實(shí)驗(yàn)及細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn),證實(shí)SRSF2對(duì)選擇性剪切體AML1-ET09a產(chǎn)生的影響,以及對(duì)AML1-ETO陽(yáng)性和陰性的細(xì)胞增殖及惡性表型的影響;4、生物信息學(xué)分析及熒光素酶驗(yàn)證AML1-ET09a是miR-9-1的靶基因；熒光定量PCR檢測(cè)miR-9-1在細(xì)胞系和臨床樣本中的表達(dá)。結(jié)果：1、外顯子高通量測(cè)序結(jié)果表明：23例樣本,每個(gè)初治或者復(fù)發(fā)樣本的體細(xì)胞平均突變位點(diǎn)數(shù)目為18.6個(gè),突變基因重現(xiàn)性統(tǒng)計(jì),分析可能存在的共性基因突變,其中重現(xiàn)性最高的基因是c-KIT,其重現(xiàn)性為17.4%(4/23),其次為NRAS占13%(3/23), FLT3、NOTCH1、PHF6各占8.7%(2/23)�？偨Y(jié)蘇州大學(xué)和我們的臨床樣本分析數(shù)據(jù)以及美國(guó)UCSD張東爾教授的結(jié)果發(fā)現(xiàn),AML1-ETO9a在AML1-ETO陽(yáng)性的臨床樣本中所占得比例分別為100%(44/44)、100%(10/10)和95%(35/37),均遠(yuǎn)高于c-KIT突變。2、在t(8;21)AML中,SRSF總體上的表達(dá)明顯比其它各型染色體異常AML臨床樣本中高,進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),SRSF2、SRSF6、SRSF11這三個(gè)剪切因子在AML1-ETO陽(yáng)性的AML中異常高表達(dá)。3、用ETO9a外顯子及其側(cè)翼序列進(jìn)行的RIP及質(zhì)譜分析,對(duì)有差異的145個(gè)有意義的蛋白進(jìn)行信號(hào)途徑分析發(fā)現(xiàn),超過(guò)82%(119/145)的蛋白與核mRNA的剪切、加工、剪切復(fù)合體的裝配、調(diào)控密切相關(guān),其它的18%(26/145)蛋白則負(fù)責(zé)調(diào)控細(xì)胞的凋亡和死亡。SRSF2的慢病毒轉(zhuǎn)染AML1-ETO陽(yáng)性的細(xì)胞株Kasumi-1和SKNO-1,定量PCR檢測(cè)AML1-ETO和AML1-ETO9a的表達(dá),發(fā)現(xiàn)在這兩種細(xì)胞系中AML1-ETO9a的表達(dá)量顯著提高,分別從13%和7.5%提高到54.2%和50.6%,證實(shí)SRSF2可以導(dǎo)致AML1-ETO9a選擇性剪切體的產(chǎn)生,克隆形成實(shí)驗(yàn)及細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)證實(shí),SRSF2可特異性地調(diào)控AML1-ETO融合基因陽(yáng)性細(xì)胞的惡性增殖,而對(duì)AML1-ETO陰性的細(xì)胞系如HL-60則沒(méi)有影響。4、生物信息學(xué)分析、熒光素酶報(bào)道載體及Western blot證實(shí),AML1、AML1-ETO、AML1-ET09a都是miR-9-1的靶基因,而實(shí)時(shí)熒光定量PCR證實(shí)miR-9-1在t(8;21)AML表達(dá)明顯降低。結(jié)論：1、從遺傳學(xué)、基因結(jié)構(gòu)、基因功能及重現(xiàn)性上來(lái)說(shuō),AML1-ET09a是t(8;21)AML一個(gè)更為普遍的“第二次打擊”；2、在轉(zhuǎn)錄／剪切水平上,剪切因子SRSF2促進(jìn)了AML1-ET09a的選擇性剪切,并且特異性地促進(jìn)了AML1-ETO陽(yáng)性細(xì)胞的惡性增殖;3、翻譯水平上,AML1-ET09a是miR-9-1的一個(gè)靶基因,miR-9-1可以抑制AML1-ET09a的蛋白翻譯,而miR-9-1在t(8;21)AML中表達(dá)明顯降低,從而導(dǎo)致AML1-ET09a大量翻譯出蛋白,導(dǎo)致t(8;21)AML的發(fā)生。目的：侵襲性真菌病(invasive fungal disease, IFD)在惡性血液病患者中發(fā)病率和死亡率均很高,有IFD病史的患者在進(jìn)一步的化療或造血干細(xì)胞移植(hematopoietic stem cell transplantation, HSCT)中,IFD復(fù)燃率高,預(yù)后差。二級(jí)預(yù)防(secondary antifungal prophylaxis, SAP)可有效地預(yù)防IFD復(fù)燃。本研究旨在探討有IFD病史的惡性血液病患者接受進(jìn)一步的化療或HSCT時(shí)進(jìn)行SAP的策略和療效,分析SAP失敗的危險(xiǎn)因素。材料與方法：我們回顧性分析了2008年1月至2013年6月就診于我院血液科接受化療或HSCT且既往有IFD病史的惡性血液病患者的病歷資料,分析患者的臨床特點(diǎn)和IFD的診斷標(biāo)準(zhǔn),探討不同SAP策略的療效以及影響IFD復(fù)燃的危險(xiǎn)因素。結(jié)果：入組164例患者,中位隨訪180天,40例出現(xiàn)IFD復(fù)燃,其中121例(73.78%,121/164)進(jìn)行SAP的患者復(fù)燃20例,復(fù)燃率為16.5%(20/121),43例未進(jìn)行SAP的患者復(fù)燃20例,復(fù)燃率為46.5%(20/43),兩組復(fù)燃率比較有顯著性差異(p=0.000)。121例進(jìn)行SAP的患者,其中58例選用既往抗真菌治療有效的藥物進(jìn)行SAP,8例IFD復(fù)燃,復(fù)燃率13.8%(8/58),63例換用其他廣譜抗真菌藥物進(jìn)行SAP,12例IFD復(fù)燃,復(fù)燃率19.0%(12/63),兩組復(fù)燃率比較無(wú)顯著性差異(P=0.437)。異基因HSCT患者IFD復(fù)燃率(25%,15/60)明顯高于化療或自體HSCT患者(8.2%,5/61)(P=0.013)。多因素分析二級(jí)預(yù)防下IFD復(fù)燃的危險(xiǎn)因素顯示異基因HSCT為影響IFD復(fù)燃的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。結(jié)論：對(duì)既往有IFD病史的惡性血液病患者予SAP可有效地防止IFD復(fù)燃,異基因HSCT患者的SAP更應(yīng)重視。
【學(xué)位單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類】：R733.7;R519

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 李艷;于力;;造血干細(xì)胞移植后侵襲性真菌感染的現(xiàn)狀與未來(lái)[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2011年02期

2 李艷;高麗;王莉莉;丁一;徐媛媛;李紅華;靖_g;薄劍;黃文榮;王全順;高春記;于力;;異基因移植患者RQ-PCR監(jiān)測(cè)巨細(xì)胞病毒感染并指導(dǎo)搶先治療的臨床研究(英文)[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2013年01期

本文編號(hào)：2822447