目的觀察在高糖環(huán)境和相對低糖環(huán)境下人永生化角質(zhì)形成細胞(HaCaT細胞)的生長情況,以及白念珠菌干預不同環(huán)境下生長的HaCaT細胞后的情況;檢測不同糖濃度環(huán)境下、不同時間段HaCaT細胞表達Toll樣受體2、Toll樣受體2mRNA(Toll-like receptor 2、Toll-like receptor 2 mRNA,TLR2、TLR2 mRNA)以及IL-8的差異,并探討其在皮膚抗真菌過程中的免疫機制。方法分別在高糖和低糖DMEM培養(yǎng)基下共同培養(yǎng)HaCaT細胞;在RPMI1640培養(yǎng)液、高糖DMEM培養(yǎng)液、低糖DMEM培養(yǎng)液中誘導白念珠菌菌絲,選擇誘導菌絲狀態(tài)較好的1組的用于后續(xù)細胞干預實驗。將高糖和低糖環(huán)境下培養(yǎng)的HaCaT細胞分別與白念珠菌菌懸液混合培養(yǎng),分別設(shè)立為高糖實驗組(HG-Test組),低糖實驗組(LG-Test組);同時將兩種培養(yǎng)基下未受白念珠菌感染的HaCaT細胞做對照,分別設(shè)立為高糖對照組(HG-Control組),低糖對照組(LG-Control組)。觀察不同環(huán)境下HaCaT細胞的生長情況以及細胞與白念珠菌共同培養(yǎng)時的生長情況。在第1、6、24小時提取各組中總RNA,通過逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(Real-Time PCR,RT-PCR)的方法檢測各組中TLR2 mRNA表達量的變化;在第1、6、24小時提取各組中總蛋白,通過Western blot技術(shù)檢測各組中TLR2表達量的變化;在第1、4、6、12小時提取各組中細胞/細胞與真菌的培養(yǎng)上清液,通過酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)檢各組中IL-8表達量的變化。結(jié)果在RPMI1640培養(yǎng)液、高糖DMEM培養(yǎng)液、低糖DMEM培養(yǎng)液誘導白念珠菌菌絲的過程中,發(fā)現(xiàn)RPMI1640培養(yǎng)液誘導菌絲成功率相對較高,達92.17±0.18%,且菌絲狀態(tài)較好,可用于后續(xù)干預實驗。白念珠菌干預HaCaT細胞后,HG組與LG組未見明顯差異,隨著培養(yǎng)時間延長,可見白念珠菌趨于簇集,培養(yǎng)上清液趨于渾濁。在第1、6、24小時,TLR2 mRNA表達量始終表現(xiàn)為LG-Test組高于HG-Test組,LG-Control組高于HG-Control組,實驗組高于對照組(P㩳0.01),且HG-Test組在第24小時與LG-Test組相比下降得更明顯(P㩳0.01);而HG-Control組與LG-Control組則始終無明顯改變(P㧐0.01)。TLR2的表達量始終表現(xiàn)為LG-Test組高于HG-Test組,LG-Control組高于HG-Control組,且實驗組高于對照組,尤其在對照組中,差異更明顯(P㩳0.01)。且受干預后,TLR2與TLR2 mRNA的變化趨勢在HG、LG組中相同,即從干預開始其量分別增加,持續(xù)至第6小時,24小時下降較明顯,且HG組在第24小時與LG組相比TLR2的表達量下降得更明顯(P㩳0.01)。在第1、4、6、12小時,IL-8的表達量始終表現(xiàn)為LG-Test組高于HG-Test組,LG-Control組高于HG-Control組,且實驗組高于對照組(P㩳0.01)。且受干預后,整體上其變化趨勢在HG、LG組中相同,即從干預開始其量分別增加,持續(xù)至第6小時,12小時下降較明顯,且HG-Test組與LG-Test組在第12小時IL-8的表達量下降得均較明顯(P㩳0.01)。結(jié)論HaCaT細胞感染白念珠菌后,高糖環(huán)境不利于角質(zhì)形成細胞TLR2與IL-8的分泌,推測糖尿病患者易患白念珠菌感染相關(guān)皮膚病與角質(zhì)形成細胞表達TLR2及IL-8比正常血糖者減少有關(guān)。
【學位單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R587.2;R756.5
【部分圖文】：

天津醫(yī)科大學碩士學位論文 一、白念珠菌對高糖環(huán)境 HaCaT 細胞表達 TLR2 與 IL-8 的影響三組白念珠菌分別在含 10% 胎牛血清的 RPMI1640 培養(yǎng)液、高糖 DMEM培養(yǎng)液、低糖 DMEM 培養(yǎng)液中誘導菌絲 3 小時。每組中白念珠菌起始濃度均為2×106/ml ，均置搖床以 150 r/min，37℃環(huán)境下震蕩培養(yǎng)。誘導結(jié)束后，顯微鏡下觀察各組中白念珠菌菌絲相的狀態(tài)�？梢娫� RPMI1640 培養(yǎng)液中，白念珠菌大部分形成細長菌絲，（圖 1-a）；在高糖 DMEM 培養(yǎng)液環(huán)境下，白念珠菌數(shù)量明顯增加，部分形成菌絲，但是菌體之間粘連成團（圖 1-b）；在低糖 DMEM培養(yǎng)液中，可見白念珠菌部分形成菌絲，數(shù)量無明顯變化（圖 1-c）。統(tǒng)計各組菌絲生成率以及白念珠菌數(shù)量的改變，結(jié)果如下（表 4），三種環(huán)境下，白念珠菌經(jīng)過 3 小時的誘導菌絲，從菌絲形成率和白念珠菌數(shù)量的穩(wěn)定性兩方面考慮，發(fā)現(xiàn) RPMI1640 培養(yǎng)液是較為合適的選擇。

高糖、低糖環(huán)境下HaCaT細胞生長情況

大學碩士學位論文 一、白念珠菌對高糖環(huán)境 H表達 TLR2 與 IL-8 的影糖、低糖環(huán)境下白念珠菌與 HaCaT 細胞共同培養(yǎng)情況糖、低糖 DMEM 培養(yǎng)基環(huán)境下的 HaCaT 細胞分別與白念珠菌，觀察其第 1、6 小時培養(yǎng)情況（a b c d）。可見白念珠菌呈菌CaT 細胞接觸，LG 組與 HG 組的白念珠菌與 HaCaT 細胞接觸于延長，未見明顯差異。隨著培養(yǎng)時間延長，可見白念珠菌趨液趨于渾濁（圖 3）。

【參考文獻】

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1 關(guān)勇;;糖尿病皮膚感染與微生物菌群關(guān)系的研究進展[J];糖尿病新世界;2014年14期

2 張玉萍;徐文閣;;糖尿病皮膚感染與微生物菌群關(guān)系的研究進展[J];中國微生態(tài)學雜志;2013年11期

3 張愛蓮;喻艷坤;劉賦佩;王丹陽;周浩;張富春;;金黃色葡萄球菌對Bcap-37細胞TLR2和IL-1β、TNF-α以及NF-κB表達的影響[J];細胞與分子免疫學雜志;2013年05期

4 楊連娟;高志琴;龔偉明;楊虹;李民;戴鶴駿;溫海;;念珠菌性包皮龜頭炎56例臨床分析[J];中國真菌學雜志;2013年02期

5 余益本;王建平;;TLR信號通路研究進展[J];細胞與分子免疫學雜志;2012年12期

6 張廣靜;卓金士;金巖;盧濤;;人的原代上皮角質(zhì)形成細胞和永生化的上皮角質(zhì)形成細胞HaCaT的增殖能力的比較[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2011年01期

7 張萍;帕麗達·阿布利孜;;皮膚癬菌基因分型研究進展[J];皮膚性病診療學雜志;2010年01期

8 蔣霞;駱志成;魏玉平;;近平滑念珠菌引起的多部位皮膚感染1例[J];中國麻風皮膚病雜志;2010年02期

9 高微;姜日花;李敏;賈玉璽;;糖尿病患者龜頭念珠菌定植及菌種分析[J];中國皮膚性病學雜志;2009年09期

10 田鳴;青春;牛軼雯;謝挺;董叫云;金曙雯;花蘭女;宋菲;陸樹良;;糖尿病大鼠表皮角質(zhì)形成細胞生物學變化的機制研究[J];創(chuàng)傷外科雜志;2007年04期

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1 段德鑒;角質(zhì)形成細胞抗白念珠菌感染免疫作用機制的研究[D];四川大學;2005年

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1 劉欣欣;IL-22對角質(zhì)形成細胞表達HB-EGF及TIG3作用機制的研究[D];天津醫(yī)科大學;2015年

2 張再超;高糖及糖基化終末產(chǎn)物減少皮膚成纖維細胞膠原蛋白合成的機制初探[D];華東師范大學;2009年

3 劉樂;不同培養(yǎng)條件對白念珠菌芽管形成的影響[D];蘭州大學;2008年

本文編號：2814041