本文關(guān)鍵詞：ARFP在HCV感染慢性化中的作用及與TBX21基因多態(tài)性關(guān)系的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)是引起慢性肝炎的主要病原體之一,HCV感染極易慢性化,其慢性化率可達(dá)75%-85%,約20%的感染者將進(jìn)展為肝纖維化,甚至肝癌等終末期肝病。HCV感染所引起的丙型肝炎呈全球分布,據(jù)WHO統(tǒng)計(jì),目前全世界HCV感染者約有1.8億人,嚴(yán)重威脅著人類的健康。目前,關(guān)于HCV感染慢性化的機(jī)制尚未完全闡明。對HCV核心基因密碼子移位產(chǎn)生的轉(zhuǎn)框蛋白(alternative reading frame protein,ARFP)的研究表明,ARFP能夠引起細(xì)胞內(nèi)NF-κB的持續(xù)激活,從而增強(qiáng)細(xì)胞抵抗TNF-α誘導(dǎo)凋亡的能力,抑制細(xì)胞凋亡,是HCV在細(xì)胞內(nèi)建立持久感染的機(jī)制之一。此外,ARFP也可像核心蛋白(Core蛋白)一樣,發(fā)揮干擾細(xì)胞周期,調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、凋亡,誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的作用。我們的研究發(fā)現(xiàn),ARFP抗體陽性率與疾病進(jìn)程相關(guān),在不同臨床類型丙型肝炎患者中,中重度和肝硬化患者ARFP抗體陽性率高于急性丙肝組。另外,ARFP還可能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫參與HCV感染的進(jìn)程和轉(zhuǎn)歸。本實(shí)驗(yàn)室前期研究結(jié)果顯示,ARFP陽性HCV患者與ARFP抗體陰性HCV患者相比,血清中γ-干擾素(gamma interferon,IFN-γ),白細(xì)胞介素-2,4,5,10(interluekin,IL-2,il-4,il-5andil-10)水平呈明顯差異,在體外培養(yǎng)的外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheralbloodmononuclearcells,pbmc)中,arfp有上調(diào)il-4、il-5和下調(diào)ifn-γ水平的作用,提示在hcv感染者中,arfp可能通過影響th1/th2平衡,減少細(xì)胞損傷,以利于病毒細(xì)胞內(nèi)寄生,導(dǎo)致病毒持續(xù)感染。t-bet是促進(jìn)th0細(xì)胞分化和調(diào)控th1/th2細(xì)胞亞群及細(xì)胞因子平衡的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子,arfp可能通過影響該轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)而參與hcv感染的慢性化進(jìn)展,因此,相關(guān)研究具有重要意義。t-bet是由tbx21基因編碼的,有研究表明,該基因t-1993crs4794063)位點(diǎn)變異影響tbx21基因的轉(zhuǎn)錄活性,另還有多個(gè)snp位點(diǎn)與多種疾病有關(guān),如t-1514c(rs17250932)、g-1499a(rs2074190)位點(diǎn)snp與hbv具有相關(guān)性,t-1993crs4794063位點(diǎn)變異還和自身免疫性肝炎,il-4和tnf-α的表達(dá)量有關(guān),但該基因位點(diǎn)變異與hcv疾病進(jìn)程的相關(guān)性,未見相關(guān)報(bào)道。為了探討arfp參與th1/th2漂移的分子機(jī)制,本課題組構(gòu)建了hcv1b型arfp基因的重組質(zhì)粒pcoldii-f,經(jīng)過鎳離子親和層析純化后得到高純度的arfp。收集慢性hcv1b型患者(chronichepatitispatient,chp)的血樣,elisa定性檢測arfp抗體,并依據(jù)檢測結(jié)果分成2組[f-ab(+)chp、f-ab(-)chp],收集健康者血樣作為對照組。用westernblotting法檢測f-ab(+)chp組、f-ab(-)chp組和健康對照組的pbmc中t-bet的表達(dá)水平,并用不同濃度的arfp體外刺激pbmc,逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(rt-pcr)法檢測細(xì)胞中stat1和stat6的表達(dá)水平,westernblotting法檢測磷酸化的stat1/6水平。結(jié)果表明,f-ab(+)chp組t-bet表達(dá)水平低于f-ab(-)chp組,stat1/6表達(dá)水平并不受arfp刺激的影響,然而,arfp可影響pbmc中stat1/6的磷酸化水平。本研究還通過分子流行病學(xué)研究方法,對江蘇省句容市和鎮(zhèn)江市的有償獻(xiàn)血人群進(jìn)行調(diào)查,收集747名慢性hcv患者[190名f-ab(-),557名f-ab(+)]和354名健康對照,用改進(jìn)的多重高溫連接酶檢測反應(yīng)(improvedmultipleligasedetectionreaction,imldr)基因分型技術(shù)檢測tbx21(編碼t-bet轉(zhuǎn)錄因子)基因三個(gè)位點(diǎn)(rs17250932,rs2074190,rs4794067)等位基因的分布頻率,采用病例-對照、病例-病例研究設(shè)計(jì),分析了中國漢族人群TBX21基因多態(tài)性與HCV慢性化進(jìn)程及ARFP產(chǎn)生的關(guān)系。結(jié)果表明rs4794067 C等位基因在CHP患者中的分布頻率明顯高于健康對照者,特別是在F-Ab(+)組。分層分析后發(fā)現(xiàn),在HCV 1b基因型亞組和輕度肝纖維化亞組中,rs4794067 C等位基因攜帶者,和HCV Non-1b基因型亞組中rs2074190 G等位基因攜帶者,他們在HCV感染進(jìn)程中,具有更高的ARFP產(chǎn)生風(fēng)險(xiǎn)。而在年輕的女性患者中,rs4794067 C等位基因攜帶者的慢性化進(jìn)程的風(fēng)險(xiǎn)更高。本研究提示,TBX21的基因多態(tài)性與中國漢族高危人群的HCV感染的慢性化進(jìn)程和ARFP產(chǎn)生顯著相關(guān)。本研究綜合評價(jià)HCV的生物學(xué)因素(病毒基因變異)、宿主免疫因素(Th1/Th2平衡)、遺傳背景(TBX21基因多態(tài)性)和環(huán)境因素在HCV感染慢性化進(jìn)程中的作用及其相互關(guān)系,初步探討HCV ARFP參與Th1/Th2漂移的機(jī)制以及宿主因素與ARFP產(chǎn)生的關(guān)系,為深入研究病毒性肝炎慢性化的機(jī)制提供理論基礎(chǔ),對于探索HCV治療方法具有一定意義。
【關(guān)鍵詞】：丙型肝炎病毒 ARFP Th1/Th2 T-bet 基因多態(tài)性
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R512.63
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 前言12-16
• 第一部分 HCV1b型ARFP的原核表達(dá)和純化16-24
• 前言16-17
• 材料與方法17-19
• 實(shí)驗(yàn)方法19-21
• 結(jié)果21-22
• 討論22-24
• 第二部分 HCV ARFP及T-bet與HCV慢性化機(jī)制的研究24-43
• 前言24-25
• 材料與方法25-27
• 實(shí)驗(yàn)方法27-33
• 結(jié)果33-39
• 討論39-43
• 第三部分 中國漢族高風(fēng)險(xiǎn)人群TBX21基因多態(tài)性與HCV感染轉(zhuǎn)歸和ARFP產(chǎn)生的關(guān)聯(lián)研究43-61
• 前言43-44
• 材料與方法44-49
• 研究對象49-51
• 結(jié)果51-58
• 討論58-61
• 參考文獻(xiàn)61-72
• 小結(jié)72-74
• 綜述74-89
• 參考文獻(xiàn)80-89
• 附錄一 符號及縮略語說明89-91
• 附錄二 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況91-93
• 致謝93

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳芬;王瓊;;急性乙型病毒性肝炎慢性化影響因素研究[J];中國民康醫(yī)學(xué);2006年16期

2 曾愛萍;常潔;劉芳;邱蔚蔚;;丙型肝炎病毒感染慢性化進(jìn)程影響因素觀察[J];江蘇醫(yī)藥;2007年06期

3 王漧萬;媄惠風(fēng);余P沉

本文編號：280531