【摘要】：目的分析二期梅毒、潛伏梅毒、神經(jīng)梅毒患者外周血中自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)及其亞型、IFN-γ+的NK細(xì)胞百分比,研究NK細(xì)胞在梅毒螺旋體感染中發(fā)揮的作用,探討NK細(xì)胞在梅毒螺旋體慢性化感染中的可能機(jī)制。方法1.外周血中NK細(xì)胞及其亞型的檢測:收集健康志愿者10例,梅毒患者40例,其中包括二期梅毒患者14例,潛伏梅毒患者12例,神經(jīng)梅毒患者14例。獲得上述健康對照和患者的外周血并分離單個核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測CD8+T細(xì)胞、NKT細(xì)胞和NK細(xì)胞及其亞型的百分比,及NK細(xì)胞表面受體CD158a和CD158e1的表達(dá)。2.NK細(xì)胞功能的檢測:分別收集5例健康對照和8例二期梅毒患者的外周血,分離PBMC,并用MACS分選外周血CD3-CD56+NK細(xì)胞,用K562細(xì)胞刺激NK細(xì)胞,用流式細(xì)胞術(shù)檢測IFN-γ+NK細(xì)胞和Granzyme B+NK細(xì)胞的百分比。進(jìn)一步將NK細(xì)胞與K562細(xì)胞以不同的比例(分別為1:1,10:1,30:1)混合培養(yǎng)8小時(shí)后,用流式細(xì)胞術(shù)檢測不同效靶比下NK細(xì)胞對K562細(xì)胞的殺傷效率。3.統(tǒng)計(jì)分析:運(yùn)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示各組數(shù)據(jù),未配對的兩組間實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)比較用曼-惠特尼檢驗(yàn),配對樣本兩組間比較用t檢驗(yàn)。P0.05視為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1.二期梅毒患者、神經(jīng)梅毒和潛伏梅毒患者外周血CD3-CD56+NK細(xì)胞百分比分別為(42.42±4.16)%,(48.39±4.81)%,(46.87±5.1)%,與正常對照組[(66.64±3.58)%]相比均顯著降低(P=0.0035,P=0.01,P=0.006)。二期梅毒患者外周血中CD3+CD56+NKT細(xì)胞百分比[(6.58±0.72)%]顯著低于正常對照組[(11.6±1.67)%,P=0.006];潛伏梅毒和神經(jīng)梅毒患者外周血中CD3+CD56+NKT細(xì)胞的百分比與正常對照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.76,P=0.09)。二期梅毒、神經(jīng)梅毒和潛伏梅毒患者外周血CD8+T細(xì)胞的百分比與正常對照組相比均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.27,P=0.09,P=0.46)。2.二期梅毒患者外周血CD3-CD56dimNK細(xì)胞的百分比為(38.9±4.19)%,與正常對照組[(54.9±5.9)%]相比顯著降低(P=0.03)。神經(jīng)梅毒和潛伏梅毒患者外周血CD3-CD56dimNK細(xì)胞的百分比與正常對照相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.21,P=0.17)。與正常對照相比,二期梅毒病人和神經(jīng)梅毒病人外周血CD3-CD56dim CD16-NK細(xì)胞百分比下降,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.016,P=0.0105)。二期梅毒、神經(jīng)梅毒和潛伏梅毒患者外周血CD3-CD56dimCD16dimNK細(xì)胞百分比降低,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.001,P=0.003,P=0.02)。二期梅毒患者外周血CD3-CD56-CD16dim NK細(xì)胞和CD3-CD56-CD16brightNK細(xì)胞百分比顯著高于正常對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.01,P=0.04)。二期梅毒、神經(jīng)梅毒和潛伏梅毒患者外周血CD3-CD56brightNK細(xì)胞的比例與正常對照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.11,P=0.19,P=0.06)。3.用K562刺激外周血PBMC后,二期梅毒和神經(jīng)梅毒患者外周血IFN-γ+NK細(xì)胞的比例分別為(4.88±0.65)%和(4.59±0.98)%,與正常對照組[(9.45±1.75)%]相比均顯著降低(P=0.0002,P=0.0015)。潛伏梅毒組外周血IFN-γ+NK細(xì)胞的比例與正常對照相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。同樣,二期梅毒和神經(jīng)梅毒患者IFN-γ+的CD3-CD56dimNK細(xì)胞、CD3-CD56brightNK細(xì)胞比例低于正常對照組。用K562細(xì)胞刺激純化的NK細(xì)胞,二期梅毒患者IFN-γ+NK細(xì)胞比例[(3.127±0.46)%]顯著低于正常對照組[(5.504±0.69)%,P=0.01];二期梅毒患者Granzyme B+NK細(xì)胞的比例與正常對照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在NK細(xì)胞殺傷功能實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),在效靶比1:1、10:1和30:1時(shí),二期梅毒殺傷K562細(xì)胞的能力與正常對照組相比均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。加入CD158a抗體封閉后,IFN-γ+NK細(xì)胞比例比未加CD158a抗體封閉組增多,但兩者之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.11)。結(jié)論1.梅毒患者外周血NK細(xì)胞總的百分比減少,其中以細(xì)胞毒性NK細(xì)胞亞型百分比減少為主,而免疫功能不完善的NK細(xì)胞亞型百分比增多,提示梅毒螺旋體感染可降低機(jī)體內(nèi)NK細(xì)胞的功能。2.梅毒患者外周血IFN-γ+NK細(xì)胞百分比降低,提示梅毒螺旋體可能抑制了NK細(xì)胞分泌細(xì)胞因子IFN-γ的能力,從而降低了NK細(xì)胞調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫應(yīng)答的能力。3.梅毒螺旋體感染導(dǎo)致NK細(xì)胞的數(shù)量減少和功能受損,NK細(xì)胞的免疫能力減低,從而導(dǎo)致機(jī)體不能完全清除梅毒螺旋體,引起慢性化的感染。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R759.1

【參考文獻(xiàn)】

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1 姜擁軍;陳歡;何磊;張子寧;孫曉娟;劉靜;韓曉旭;丁海波;尚紅;;HIV感染者CD56~(dim)CD16~+NK細(xì)胞表面活化受體和抑制受體的變化[J];免疫學(xué)雜志;2010年11期

2 周平玉;顧志英;錢伊弘;徐金華;樂嘉豫;廖康煌;王俠生;;早期梅毒皮損形成機(jī)制的研究[J];中華皮膚科雜志;2006年05期

3 姜擁軍,尚紅,張子寧,耿文清,刁瑩瑩,代娣,韓曉旭,張e

本文編號：2798283