發(fā)布時(shí)間：2020-08-13 00:50

【摘要】：目的探討亞甲基藍(lán)(MB)介導(dǎo)的光動(dòng)力療法(PDT)在適合波長及光能量的光源下抗菌作用和作用機(jī)理及聯(lián)合碘化鉀(KI)時(shí)PDT的抗菌療效。方法通過分光光度計(jì)檢測MB溶液的最大吸收峰位而決定MB介導(dǎo)的PDT抗菌作用的最適波長。第一部分實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)對象為白色念珠菌標(biāo)準(zhǔn)株DAY286,首先將制備為10~7 CFU/mL的白色念珠菌懸液分成以下四組:空白對照組:無光照,不加MB;PDT組:根據(jù)MB濃度的不同將其分為10μmol/L組、50μmol/L組和100μmol/L組,與菌液孵育后給予10 J/cm~2、40J/cm~2和80 J/cm~2光照射;單純光照組:不加MB,僅給予光照,光源條件同PDT組;單純光敏劑組:僅加入MB,不進(jìn)行光照。通過不同濃度的MB介導(dǎo)的PDT對白色念珠菌的殺傷作用確定MB最適濃度。其次將白色念珠菌懸液分成三組:空白對照組、PDT組和單純光照組。(1)空白對照組:不加MB,不給予光照。(2)PDT組:將白色念珠菌懸液加入MB避光孵育30min,在適當(dāng)?shù)牟ㄩL下給予不同的光能量0 J/cm~2、10 J/cm~2、20 J/cm~2、40J/cm~2、80 J/cm~2、160 J/cm~2、320 J/cm~2光的照射。(3)光照組:不加入MB,僅給予光照射,光源條件同PDT組。各組的白色念珠菌存活率使用菌落形成單位(CFU)給予測定。第二部分實(shí)驗(yàn)選取金黃色葡萄球菌質(zhì)控菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ACCC25923為實(shí)驗(yàn)對象,通過酶標(biāo)儀調(diào)整光密度(OD)將其制備為10~8 CFU/mL的金黃色葡萄球菌懸液。在光能量為10 J/cm~2下,為檢測MB最適濃度劑量將實(shí)驗(yàn)分為:(1)空白對照組:無光照,不加入MB。(2)PDT組按MB濃度將其分為0.1μmol/L組、0.2μmol/L組、0.5μmol/L組、1.0μmol/L組和5.0μmol/L組。(3)單純MB組:僅有MB,無光照。(4)單純光照組:不加入MB,僅給與光照。通過不同濃度的MB殺菌作用確定最適MB濃度后將實(shí)驗(yàn)分為:絕對對照組:不加MB及KI,不給予光照;對照組:給予MB和光照,不加KI;單純KI組:不加MB及光照,僅加入KI;PDT(KI)組:金黃色葡萄球菌懸液與適宜濃度的MB避光孵育30 min,在給予不同濃度的KI混合均勻后進(jìn)行光源照射;光照(KI)組:僅加入KI,不加光敏劑MB,予以同PDT(KI)組相同的光源照射;光敏劑(KI)組:加入MB及KI,不予任何光照。利用CFU測定各組金黃色葡萄球菌的存活率。第三部分實(shí)驗(yàn)使用熒光分子探針SOSG和HPF檢測MB在不同光能量下產(chǎn)生的熒光量,初步研究MB抗菌作用機(jī)理。結(jié)果(1)光敏劑MB對白色念珠菌殺傷作用的最適濃度為100μmol/L。在光源波長為660 nm的光照射下,光能量為0~320 J/cm~2時(shí),光能量越高,MB介導(dǎo)的PDT殺菌作用越強(qiáng)(P 0.05)。在320 J/cm~2光能量下,MB介導(dǎo)的PDT對白色念珠菌的殺傷作用最強(qiáng),白色念珠菌存活率最低為0.000073%(P 0.05)。光能量為0 J/cm~2的PDT組及光照組與空白對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P 0.05)。(2)選擇MB對金黃色葡萄球菌的合適殺菌作用濃度0.2μmol/L,在光源波長660 nm,10 J/cm~2的光照射下,MB介導(dǎo)的PDT在聯(lián)合KI后對金黃色葡萄球菌的殺傷用作加強(qiáng)(P 0.05)。單純KI組、光照(KI)組和光敏劑(KI)組與絕對對照組比較,金黃色葡萄球菌菌落數(shù)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P 0.05)。(3)在相同光能量下熒光分子探針SOSG所測得的MB熒光量均高于HPF的熒光測得量(P 0.01)。結(jié)論(1)在160~320 J/cm~2的光能量范圍內(nèi),MB介導(dǎo)的PDT對白色念珠菌具有較好的殺傷作用。(2)MB介導(dǎo)的PDT在聯(lián)合KI時(shí)抗菌作用效果加強(qiáng)。(3)MB介導(dǎo)的PDT抗菌作用主要是通過Ⅱ型反應(yīng)機(jī)制。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R519;R515
【圖文】：

和甘露聚糖-蛋白質(zhì)復(fù)合體等主要成分，影響了真菌細(xì)胞壁的合成從而達(dá)到抑菌目的。主要代表藥物有卡泊芬凈、米卡芬凈、阿尼芬凈等。以卡泊芬凈為例，其化學(xué)結(jié)構(gòu)如圖1-1c,通過抑制真菌細(xì)胞壁中的 -（1,3）-D-葡聚糖酶來阻止其的合成[11, 12]。（4）核苷類抗真菌藥：目前氟胞嘧啶為臨床上最為常見的核苷類抗真菌藥物，氟胞嘧啶進(jìn)入真菌細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)變?yōu)榉蜞奏ぃ蓴_其嘧啶代謝引出錯(cuò)誤的真菌細(xì)胞 RNA 遺傳密碼，從而抑制真菌蛋白質(zhì)的合成[13, 14]。氟胞嘧啶結(jié)構(gòu)示意圖見圖 1-1d。a bc d圖 1-1 部分抗真菌藥物結(jié)構(gòu)示意圖

圖 1-2 亞甲基藍(lán)分子結(jié)構(gòu)Figure 1-2 Molecular structure of methylene blue用光敏劑與適當(dāng)波長下的可見光相結(jié)合，激發(fā)光性的活性氧(reactive oxygen species ,ROS)[31

圖 1-3 MB 介導(dǎo)的光動(dòng)力療法示意圖Figure 1-3 Schematic diagram of MB mediated photodynamic therapy在光照射下，光敏劑吸收光能由基態(tài)經(jīng)過單重激發(fā)態(tài)躍遷為三重激發(fā)態(tài)，三重激發(fā)態(tài)與底發(fā)生氫或電子轉(zhuǎn)移可發(fā)生 PDT 的Ⅰ型反應(yīng)；三重激發(fā)態(tài)光敏劑發(fā)生能量傳遞將會(huì)發(fā)生 PDT的Ⅱ型反應(yīng)。nder light irradiation, the light absorption energy of the photosensitizer transitions from the ground state

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本文編號：2791267