【摘要】：研究背景:孢子絲菌病是一種深部真菌病,可以導(dǎo)致皮膚、皮下組織及附近淋巴組織的亞急性和(或)慢性感染,也可向內(nèi)臟和骨骼播散,嚴(yán)重者可引起全身的播散性感染。本病在我國(guó)東北地區(qū)相對(duì)多發(fā),對(duì)人們的健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅。目前該病的診斷需要進(jìn)行真菌培養(yǎng)和組織病理檢查,耗時(shí)較長(zhǎng)。部分歐美地區(qū)采用孢子絲菌素皮試的方法用于快速診斷和篩查孢子絲菌病,但我國(guó)尚未開(kāi)展,是否可將該方法廣泛應(yīng)用需要進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究和臨床驗(yàn)證。目的:通過(guò)建立小鼠孢子絲菌病模型,提取孢子絲菌素,皮試觀察陽(yáng)性率結(jié)果,以驗(yàn)證孢子絲菌素皮試是否可以快速診斷孢子絲菌病。方法:1.選取吉林大學(xué)第二醫(yī)院皮膚科保存的孢子絲菌臨床分離株,用沙氏葡萄糖瓊脂(SDA)平板培養(yǎng)基于25℃條件下培養(yǎng)2周~4周,制備孢子絲菌懸液。2.選取昆明遠(yuǎn)交系雄性小鼠40只,分為模型組和對(duì)照組各20只,兩組再分為尾靜脈組和皮下注射組各10只。模型組注射孢子絲菌懸液建立小鼠孢子絲菌病模型,對(duì)照組注射生理鹽水。于第四周時(shí)從模型組每組隨機(jī)選取2只小鼠處死進(jìn)行真菌培養(yǎng)及組織病理檢查,驗(yàn)證小鼠孢子絲菌模型是否成功。3.選取吉林大學(xué)第二醫(yī)院皮膚科保存的孢子絲菌臨床分離菌株,用沙氏葡萄糖液體(SDB)培養(yǎng)基25℃條件下培養(yǎng)1周~2周。將形成菌膜的液體培養(yǎng)基進(jìn)行離心、均質(zhì)、除菌過(guò)濾和分裝,獲得孢子絲菌素原液。用BCA蛋白定量試劑盒測(cè)出標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算出孢子絲菌素的蛋白濃度。4.小鼠孢子絲菌模型成功建立后,模型組分別進(jìn)行皮內(nèi)注射0.1ml孢子絲菌素原液、1:50倍稀釋液、1:100倍稀釋液,對(duì)照組皮內(nèi)注射0.1ml的生理鹽水。分別于注射后的48小時(shí)及72小時(shí)觀察并記錄結(jié)果。評(píng)判標(biāo)準(zhǔn):紅斑直徑0.5cm為陰性,紅斑直徑0.5~1.0cm為弱陽(yáng)性,紅斑直徑1.0~2.0cm為陽(yáng)性,紅斑直徑2.0cm為強(qiáng)陽(yáng)性。5.采用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,Fisher確切概率法對(duì)各組陽(yáng)性率差異進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)。結(jié)果:1.模型組皮下注射組及尾靜脈組所有小鼠皮膚均出現(xiàn)皮損改變,多數(shù)在7~14天于接種處出現(xiàn)紅斑、結(jié)節(jié)、結(jié)痂,28天時(shí)達(dá)高峰。皮下注射組病變多位于接種處及臨近皮膚,尾靜脈組病變多局限于尾部。組織真菌培養(yǎng)和病理檢查符合孢子絲菌病改變。2.提取的孢子絲菌素原液蛋白含量為106ug/ml。3.模型組各組間48小時(shí)和72小時(shí)陽(yáng)性結(jié)果均一致。采用SPSS19.0軟件,Fisher確切概率法對(duì)各組陽(yáng)性率結(jié)果進(jìn)行檢驗(yàn),尾靜脈組原液皮試陽(yáng)性率(12.5%)和皮下注射組原液皮試陽(yáng)性率(0.0%)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=1.0,P0.05),尾靜脈組1:50稀釋液皮試陽(yáng)性率(37.5%)和皮下注射組1:50稀釋液皮試陽(yáng)性率(50.0%)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=1.0,P0.05),尾靜脈組1:100稀釋液皮試陽(yáng)性率(25.0%)和皮下注射組1:100稀釋液皮試陽(yáng)性率(37.5%)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=1.0,P0.05)。模型組原液、1:50倍稀釋液、1:100倍稀釋液皮試陽(yáng)性率分別為6.3%、43.8%、31.3%,1:50倍稀釋液即有效濃度為2.15μg/ml皮試陽(yáng)性率最高。結(jié)論:1.免疫正常的小鼠孢子絲菌病造模成功率為100%。2.小鼠孢子絲菌病模型孢子絲菌素皮試陽(yáng)性率較低,是否可以將孢子絲菌素皮試用于快速診斷孢子菌病須進(jìn)一步驗(yàn)證。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R756
【圖文】：

第 3 章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果第 3 章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1 小鼠孢子絲菌病模型建立結(jié)果模型組所有小鼠均出現(xiàn)皮損改變，多數(shù)在 7～14 天于接種處出現(xiàn)紅斑、結(jié)節(jié)、結(jié)痂，28 天時(shí)達(dá)高峰，皮下注射組病變多位于接種處及臨近皮膚（圖 3.1），尾靜脈組病變多局限于尾部（圖 3.2），對(duì)照組無(wú)明顯皮疹改變。真菌培養(yǎng)（圖 3.3）及組織病理學(xué)檢查（圖 3.4）符合孢子絲菌病。

靜脈組病變多局限于尾部（圖 3.2），對(duì)照組無(wú)明顯皮疹改變。真菌培養(yǎng)（圖 3.3）及組織病理學(xué)檢查（圖 3.4）符合孢子絲菌病。圖 3.1 模型組皮下注射組小鼠背部皮損改變

圖 3.3 組織真菌培養(yǎng)可見(jiàn)褐色孢子絲菌菌落生長(zhǎng)圖 3.4 皮膚組織病理（HE×200）：呈混合炎性肉芽腫改變，可見(jiàn)多核巨細(xì)胞。3.2 孢子絲菌素蛋白濃度測(cè)定

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 景東云;王學(xué)軍;彭琳琳;張勤;王玲;呂雪蓮;;臨床分離99株孢子絲菌病原體的分子和表型鑒定[J];中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志;2015年03期

2 譚靜文;劉偉;萬(wàn)U

本文編號(hào)：2778890