【摘要】：目的利用巢式PCR反應(yīng)的敏感性、特異性和準(zhǔn)確性等特點(diǎn),選取大理地區(qū)白族人群和鼠為調(diào)查對象,對畢氏微孢子蟲和隱孢子蟲的感染情況進(jìn)行調(diào)查;研究白族人群和鼠感染的畢氏微孢子蟲是否存在人獸共患基因型,以及白族人群和鼠感染的隱孢子蟲種類,為今后微孢子病和隱孢子蟲病的進(jìn)一步研究提供參考。方法從2016年4月至2017年7月,在大理市周邊及村莊共采集599份白族人群糞便樣本和287份鼠糞便樣本,用OMG試劑盒提取糞便樣本DNA�；谖㈡咦酉x內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(ITS)序列和隱孢子蟲的核糖體小亞基(SSU rRNA)基因中的多態(tài)區(qū),應(yīng)用巢式PCR方法擴(kuò)增糞便樣本DNA,把成功擴(kuò)增到條帶的樣本測序,確定陽性率。在NCBI序列庫進(jìn)行同源序列搜索,并應(yīng)用Cluster X 1.83、SPSS19.0和MEGA6等分子生物學(xué)軟件進(jìn)行序列比對、分析和建樹,確定蟲種、基因型及流行規(guī)律。結(jié)果1.在大理地區(qū)采集到的599份白族人群糞便樣本中,經(jīng)巢式PCR擴(kuò)增、測序后檢測出12份陽性樣本,畢氏微孢子蟲的感染率為2.00%(12/599,95%CI0.88~3.13)。其中男性感染率為2.91%(8/275,95%CI 0.92~4.90),女性感染率為1.24%(4/324,95%CI 0.03~2.44),男女兩組感染率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.15)。18歲以下的人群組無畢氏微孢子蟲感染,18~40歲人群中有2人感染,感染率為1.36%(2/147,95%CI 0.00~3.23);在41~65歲的304人中有7人感染畢氏微孢子蟲,感染率為2.30%(7/304,95%CI 0.62~3.99);在65歲以上人群中有3人感染畢氏微孢子蟲,感染率為3.49%(3/86,95%CI 0.00~7.37);年齡組之間感染率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.44)。農(nóng)村居民畢氏微孢子蟲感染率(2.97%,11/370,95%CI 1.24~4.70)顯著高于城鎮(zhèn)人群感染率(0.44%,1/229,95%CI 0.00~1.29),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。12份陽性樣本中鑒定出4種已知基因型:EbpC(n=5)、SC02(n=1)、Henan-Ⅳ(n=2)和D(n=1);3種新基因型,分別命名為Yunnan1,Yunnan2和Yunnan3。2.在采集到的287份鼠糞便樣本中共檢測出12份畢氏微孢子蟲陽性樣本,感染率為4.18%(12/287,95%CI 1.87~6.50)。其中褐家鼠感染率為4.44%(12/270),黃胸鼠感染率為0(0/17)。幼年組感染率為12.50%(2/16,95%CI 0.00~28.70),少年組感染率為1.37%(1/73,95%CI 0.00~4.04),成年組感染率為4.55%(9/198,95%CI 1.64~7.45),差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。雌性感染率為4.57%(8/175,95%CI 1.48~7.67),雄性感染率3.57%(4/112,95%CI 0.13~7.00),差異無統(tǒng)計學(xué)意義。鼠糞便樣本中除了發(fā)現(xiàn)與人群糞便中相同的基因型D和EbpC外,還有一種新基因型,命名為YNM1。3.白族人群隱孢子蟲的研究中僅檢測出1份陽性樣本,感染率為0.17%(1/599),為鼠隱孢子蟲(Cryptosporidium muris)。4.鼠糞便樣本中檢測出13份隱孢子蟲陽性樣本,全為鼠隱孢子蟲,感染率為4.53%(13/287,95%CI 2.12~6.94)。幼年組感染率(31.25%,5/16,95%CI8.54~53.96)顯著高于少年組(6.85%,5/73,95%CI 1.06~12.64)和成年組(1.52%,3/198,95%CI 0.00~3.22),年齡段是鼠感染隱孢子蟲的重要風(fēng)險因素,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.001)。雌性感染率為6.29%(11/175,95%CI 2.69~9.88),雄性感染率為1.79%(2/112,95%CI 0.00~4.24),差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。有一幼年鼠既感染畢氏微孢子蟲,也感染隱孢子蟲。結(jié)論本研究首次解析了大理地區(qū)白族人群及鼠畢氏微孢子蟲的人獸共患基因型和隱孢子蟲的種類。白族人群畢氏微孢子蟲感染率為2.00%,隱孢子蟲感染率為0.17%;鼠畢氏微孢子蟲感染率為4.18%,隱孢子蟲感染率為4.53%。成功鑒定出畢氏微孢子蟲基因型:EbpC、SC02、Henan-Ⅳ、D、Yunnan1、Yunnan2、Yunnan3和YNM1;發(fā)現(xiàn)鼠糞便樣本中有與人群糞便樣本相同的基因型:D和EbpC;其中Yunnan1、Yunnan2、Yunnan3和YNM1是本次研究鑒定出的新型。人和鼠感染的隱孢子蟲都為鼠隱孢子蟲(C.muris)。
【學(xué)位授予單位】：大理大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R531.5;R181.81
【圖文】：

圖 1. 微孢子蟲進(jìn)化地位研究的變遷[10]Figure 1. Changes in the evolutionary status of Microsporidium隨著近幾年分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，除了傳統(tǒng)的生物學(xué)分類方法，現(xiàn)如進(jìn)化和種系發(fā)育分析上，用來鑒定和分類的基因有 SSUrRNA 基因的內(nèi)轉(zhuǎn)錄

圖 3. 中國西南地區(qū)云南省大理地區(qū)調(diào)查地點(diǎn)圖Figure 3. The investigation site of Dali BaiAutonomous Prefecture, Yunnan Province, SouthwestChina

基于巢式 PCR 方法檢測，在白族人群 599 份糞便樣品中成功擴(kuò)增出 12 份陽性樣本，條帶大小約為 390bp（如圖 4 所示）。圖4. 人群糞便樣本中畢氏微孢子蟲PCR擴(kuò)增結(jié)果Figure 4. The PCR amplification of E.bieneusi in faecal samples of people

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2773223