發(fā)布時(shí)間：2017-03-30 10:18

  本文關(guān)鍵詞：神經(jīng)梅毒的臨床與實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景梅毒是由梅毒螺旋體引起的一種長(zhǎng)期慢性性傳播疾病,可侵犯人體多個(gè)器官和系統(tǒng),甚至可以引起包括神經(jīng)系統(tǒng)在內(nèi)的一些實(shí)質(zhì)性器官不可逆的組織損傷,導(dǎo)致多種并發(fā)癥。其中,神經(jīng)梅毒是最嚴(yán)重的并發(fā)癥之一。近年來,梅毒發(fā)病率快速增加,每年約有110萬人感染梅毒,對(duì)公共衛(wèi)生構(gòu)成嚴(yán)重威脅,引起全球關(guān)注。尤為值得注意的是,HIV/梅毒共感染近年來呈上升趨勢(shì).在性傳播過程中,約25%一期、二期梅毒患者共感染HIV,梅毒感染也增加了HIV的易感性(達(dá)8倍)。因此在國(guó)家衛(wèi)生部制定的[中國(guó)預(yù)防與控制梅毒規(guī)劃(2010-2020年)]中,提出5年有效遏制疫情快速攀升勢(shì)頭,10年降低發(fā)病率,基本消除先天梅毒,并指出將控制HIV感染與阻斷梅毒感染置于一個(gè)預(yù)防體系之下。梅毒合并HIV感染引起系統(tǒng)性免疫激活,破壞粘膜和上皮屏障,引起組織損傷,因而使得神經(jīng)梅毒的發(fā)病率顯著上升。深入了解梅毒合并HIV感染導(dǎo)致的神經(jīng)梅毒在我國(guó)的流行特征,有助于進(jìn)一步開展對(duì)該合并感染導(dǎo)致的中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷的早期診斷,對(duì)于疾病預(yù)防和臨床治療具有十分重要的意義。迄今,神經(jīng)梅毒診斷沒有特異性和敏感性均好的金標(biāo)準(zhǔn)。目前,世界各國(guó)有關(guān)神經(jīng)梅毒診斷的指南中將腦脊液中VDRL陽(yáng)性為診斷神經(jīng)梅毒的相對(duì)金標(biāo)準(zhǔn)。當(dāng)CSF-VDRL陰性時(shí),診斷神經(jīng)梅毒主要依靠腦脊液里白細(xì)胞或總蛋白升高。然而,HIV感染自身也會(huì)引起腦脊液中白細(xì)胞的異常。因此,HIV/梅毒共感染的患者診斷神經(jīng)梅毒面臨更大困難。一般認(rèn)為,合并HIV感染的梅毒患者,建議做腦脊液檢查以排除神經(jīng)梅毒。美國(guó)CDC針對(duì)腰穿的指導(dǎo)指南為有神經(jīng)癥狀、眼部癥狀、晚期潛伏梅毒、病期不明的潛伏梅毒、治療失敗及合并HIV感染的患者建議做腰穿,但是否對(duì)所有合并HIV感染的梅毒患者均要作腰穿監(jiān)測(cè)尚存爭(zhēng)議。因此,了解和掌握HIV/梅毒共感染人群中神經(jīng)梅毒發(fā)病情況及其相關(guān)的有診斷價(jià)值的臨床和實(shí)驗(yàn)檢查指標(biāo),可為早期神經(jīng)梅毒的診斷提供線索,指導(dǎo)腦脊液的檢查。據(jù)我們所知,在中國(guó)HIV/梅毒共感染的男性人群中神經(jīng)梅毒發(fā)病情況及相關(guān)因素研究尚未有報(bào)道。已知,機(jī)體的免疫狀態(tài)在清除病原微生物的過程中發(fā)揮重要作用,而不適當(dāng)?shù)拿庖邞?yīng)答導(dǎo)致的炎癥反應(yīng)會(huì)引起包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)在內(nèi)的組織損傷。梅毒螺旋體的中樞感染是否也存在同樣的機(jī)制迄今不明。神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)細(xì)胞的免疫細(xì)胞,含量較少。當(dāng)中樞神經(jīng)系統(tǒng)受到外傷、感染及功能失調(diào)時(shí),在致炎因素作用下小膠質(zhì)細(xì)胞被激活,參與多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)病如阿爾茨海默病(AD)。梅毒螺旋體感染所引起的麻痹性癡呆在認(rèn)知損害方面和AD非常相似。梅毒螺旋體進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)后,靜止的小膠質(zhì)細(xì)胞被活化并釋放炎癥介質(zhì),是否也會(huì)引起神經(jīng)毒性,對(duì)神經(jīng)元引起“二次損傷”,值得我們探討。我們運(yùn)用神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞原代培養(yǎng)技術(shù)來進(jìn)行上述研究。神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞原代培養(yǎng)為研究小膠質(zhì)細(xì)胞參與多種神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)病機(jī)制打下基礎(chǔ),使體外實(shí)驗(yàn)成為可能。體外神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞原代培養(yǎng)早期由McCarthy與Gulian建立,但培養(yǎng)步驟較繁瑣,獲得的小膠質(zhì)細(xì)胞量少,純度低。后來,多種小膠質(zhì)細(xì)胞的原代培養(yǎng)方法均在此方法上進(jìn)行改進(jìn),但目前仍沒建立一種標(biāo)準(zhǔn)的穩(wěn)定的高效的神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞的原代培養(yǎng)方法。研究目的：第一部分.1.了解掌握在HIV/梅毒共感染的男性人群中,神經(jīng)梅毒的發(fā)病情況。2.分析神經(jīng)梅毒的相關(guān)因素,為神經(jīng)梅毒的早期診斷提供有價(jià)值的臨床和實(shí)驗(yàn)檢查指標(biāo)。第二部分.1.建立一種穩(wěn)定的高效的鼠神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞原代培養(yǎng),為后續(xù)體外實(shí)驗(yàn)奠定基礎(chǔ)。2.初步探索梅毒螺旋體刺激鼠神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞的活化作用。研究方法：第一部分.我們收集來自2009年1月至2014年8月上海市皮膚病醫(yī)院性病科的男性HIv/梅毒共感染患者共178例。在研究對(duì)象自愿簽訂知情同意書后,做一對(duì)一面對(duì)面調(diào)查,填調(diào)查問卷,收集社會(huì)人口學(xué)特征、行為學(xué)特征、梅毒、HIV等相關(guān)臨床資料�？崭�12小時(shí)采集靜脈血,分別收集血漿和血清,檢測(cè)血RPR和TPPA,用以診斷梅毒。做腰穿來收集腦脊液,檢測(cè)CSF-VDRL、CSF-TPPA、CSF-WBC和CSF-Tpr等用來診斷神經(jīng)梅毒。神經(jīng)梅毒的相關(guān)因素用二分類Logistic回歸多元分析模型方法進(jìn)行分析。第二部分.1.我們選用新生24小時(shí)內(nèi)C57BL/6J小鼠8-16只,取大腦皮質(zhì),制成單個(gè)細(xì)胞的懸液,進(jìn)行混合膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng),結(jié)合營(yíng)養(yǎng)剝離法。等混合細(xì)胞培養(yǎng)出現(xiàn)明顯分層,在3712恒溫下用振搖法分離純化小膠質(zhì)細(xì)胞.分離后的小膠質(zhì)細(xì)胞,在倒置顯微鏡下對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞計(jì)數(shù),用CDllb抗鼠/人抗體(PE)對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行熒光染色,最后用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)小膠質(zhì)細(xì)胞純度。2.把分離純化后獲得的小質(zhì)細(xì)胞按約1×105個(gè)/孔接種到12孔培養(yǎng)板。實(shí)驗(yàn)分3組：實(shí)驗(yàn)組加梅毒螺旋體1：100;陰性對(duì)照組加相同體積的培養(yǎng)液；陽(yáng)性對(duì)照組加1μg/mLLPS,各組均設(shè)復(fù)孔。分別刺激小膠質(zhì)細(xì)胞24小時(shí)后,用0.25%胰酶消化收集小膠質(zhì)細(xì)胞,分別染抗CD80+熒光抗體。以Flowjo軟件進(jìn)行獲取分析流式圖。用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組小膠質(zhì)細(xì)胞CD80表達(dá)百分比。研究結(jié)果第一部分：1.178例HIV/梅毒共感染男性患者年齡中位數(shù)為31歲(范圍：18-75歲)。大多數(shù)患者為男男同性戀(56.7%)。有4例一期梅毒,96例二期梅毒,7例早期潛伏梅毒,71例晚期潛伏梅毒及病程不明的潛伏梅毒,分別占比例為2.2%、54%、3.9%和39.8%。神經(jīng)梅毒的發(fā)病率在二期梅毒、早期潛伏梅毒、晚期潛伏梅毒及病程不明的潛伏梅毒所占比例分別為25.0%、14.3%和22.5%。2.有41例HIV/梅毒共感染患者符合神經(jīng)梅毒診斷,占比例為23%。神經(jīng)梅毒和外周血CD4+T細(xì)胞數(shù)≤350個(gè)/uL((0R,8.08：95%CI,2.12-30.78：P0.05)具有顯著相關(guān)性。年齡、梅毒分期、神經(jīng)癥狀、眼部癥狀和血RPR滴度≥1：32和神經(jīng)梅毒均無明顯相關(guān)性。第二部分：1.我們采取營(yíng)養(yǎng)剝離法和機(jī)械振搖法分離純化鼠神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞,獲得小膠質(zhì)細(xì)胞量為1×106個(gè)/培養(yǎng)瓶(25cm2),純度達(dá)到88%以上。2.與陰性對(duì)照組(CD80百分比0.44%)相比,實(shí)驗(yàn)組和陽(yáng)性對(duì)照組CD80表達(dá)的百分比分別為0.79%、1.01%�？梢奓PS能明顯激活神經(jīng)梅毒小膠質(zhì)細(xì)胞,使其抗原提呈作用增強(qiáng),但梅毒螺旋體刺激小膠質(zhì)細(xì)胞的活化作用不明顯。結(jié)論：第一部分在HIV/梅毒共感染人群中,外周血CD4+T細(xì)胞數(shù)≤350個(gè)/uL是神經(jīng)梅毒的一個(gè)危險(xiǎn)因素,可以作為做腰穿的指標(biāo)。單一的血RPR滴度≥1：32不能作為腰穿的臨界值,還需結(jié)合其他臨床和實(shí)驗(yàn)檢查指標(biāo)進(jìn)行評(píng)估是否做腦脊液檢查。另外,加強(qiáng)對(duì)性伴的性病篩查對(duì)控制梅毒播散具有重要作用。第二部分1.我們建立一種穩(wěn)定的高效的鼠神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞原代培養(yǎng),為后續(xù)研究神經(jīng)梅毒發(fā)病機(jī)制的體外實(shí)驗(yàn)奠定基礎(chǔ)。2.梅毒螺旋體刺激小膠質(zhì)細(xì)胞活化作用不明顯。尚需進(jìn)一步純化梅毒螺旋體混合液,探索梅毒螺旋體刺激小膠質(zhì)細(xì)胞的活化作用。
【關(guān)鍵詞】：人類免疫缺陷病毒 梅毒螺旋體 神經(jīng)梅毒 神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞 原代培養(yǎng)
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R759.13
【目錄】：

• 英文縮略詞5-6
• 中文摘要6-10
• 英文摘要10-17
• 第一部分 HIV/梅毒共感染的人群中神經(jīng)梅毒發(fā)病相關(guān)因素研究17-38
• 前言17-18
• 材料和方法18-26
• 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析26
• 結(jié)果26-32
• 討論32-34
• 結(jié)論34-35
• 參考文獻(xiàn)35-38
• 第二部分 梅毒螺旋體刺激鼠神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞的活化作用38-54
• 前言38-40
• 材料和方法40-44
• 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析44
• 結(jié)果44-49
• 討論49-51
• 結(jié)論51
• 參考文獻(xiàn)51-54
• 附錄54-55
• 致謝55-56
• 綜述56-65
• 參考文獻(xiàn)62-65

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1 劉y，

本文編號(hào)：276883