【摘要】：目的:比較通用引物ITS序列和金屬蛋白酶1在皮膚癬菌屬、酵母菌屬、霉菌屬擴(kuò)增的敏感性;探討金屬蛋白酶1聯(lián)合限制性內(nèi)切酶Hinf I在皮膚癬菌菌種鑒定中的敏感性和特異性,為臨床診治提供理論依據(jù)。方法:1、采集2016年11月至2017年5月在山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院門診擬診手足癬、體癬和甲真菌病的患者125例,記錄患者一般信息情況,用75%的酒精消毒皮損后,用鈍刀刮取患處和正常皮膚交界處的皮屑或者甲屑,將標(biāo)本大致分為兩份,一份滴加10%KOH液,光鏡下觀察;另一份接種于含氯霉素的沙堡弱培養(yǎng)基置于25℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),培養(yǎng)兩周至四周,分別觀察結(jié)果并記錄;2、統(tǒng)計(jì)鏡檢陽性的病例數(shù),培養(yǎng)陽性的病例數(shù)并記錄結(jié)果;3、培養(yǎng)陽性的菌株純化后用傳統(tǒng)的氯化芐方法提取DNA。再分別用ITS4、ITS86和金屬蛋白酶1特異性引物擴(kuò)增并進(jìn)行比較分析。金屬蛋白酶1聯(lián)合限制性內(nèi)切酶Hinf I對(duì)目的片段進(jìn)行酶切,并依據(jù)酶切后的片段大小進(jìn)行菌種的鑒定。結(jié)果:1、共收集臨床病例125例,其中確診真菌感染的病例62例,臨床標(biāo)本中鏡檢陽性標(biāo)本31例(35.2%),培養(yǎng)陽性菌株57例(64.7%)。其中菌落形態(tài)似皮膚癬菌屬45例,酵母菌屬12例,霉菌屬5例。經(jīng)限制性內(nèi)切酶酶切鑒定紅色毛癬菌40例,犬小孢子菌5例。2、臨床菌株在培養(yǎng)基上菌落形態(tài)多樣,大致可分為三種:酵母菌屬菌落呈柔軟、光滑、奶酪狀;皮膚癬菌屬菌落形態(tài)呈白色絨毛狀、羊毛狀、粉末狀,部分菌落基底有不同的色素沉著;霉菌屬菌落形態(tài)呈疏松、干燥、不透明,棉絮狀、網(wǎng)狀、灰黑色,灰綠色等有顏色的菌落。3、ITS4、ITS86通用引物擴(kuò)增培養(yǎng)陽性標(biāo)本均出現(xiàn)大約300-400bp左右大小的片段,但片段大小差異不大,不能具體鑒定到種;通用引物對(duì)不同屬的臨床真菌擴(kuò)增具有普遍適用性;菌落形態(tài)似皮膚癬菌屬的菌株經(jīng)金屬蛋白酶1基因設(shè)計(jì)的特異性引物擴(kuò)增后出現(xiàn)大約700bp左右的條帶,而菌落形態(tài)學(xué)似酵母菌屬和霉菌屬的菌株均未擴(kuò)增出明顯的目的條帶。4、金屬蛋白酶1基因設(shè)計(jì)的特異性引物擴(kuò)增產(chǎn)物采用Hinf I酶切后可將紅色毛癬菌切為133bp、255bp、358bp三條片段;犬小孢子菌則切為277bp、447bp兩條片段。結(jié)論:1、我們采用鏡檢和培養(yǎng)進(jìn)行臨床診斷,鏡檢方法方便、快速,但陽性率較低,培養(yǎng)方法陽性率比鏡檢結(jié)果高,相比文獻(xiàn)報(bào)道陽性率低,該方法可以鑒定到屬,但不能到種,仍具有一定的臨床診斷價(jià)值;2、在我科臨床淺部真菌病感染中紅色毛癬菌仍是最常見、最主要的致病菌;3、通用引物具有普遍適用性,對(duì)常見的皮膚癬菌屬、酵母菌屬、霉菌屬均具有敏感性;但具體鑒定到菌種需聯(lián)合限制性內(nèi)切酶酶切;4、首次采用金屬蛋白酶1對(duì)于臨床常見的皮膚癬菌進(jìn)行鑒定,結(jié)果具有較高的敏感性,聯(lián)合特異性限制性內(nèi)切酶Hinf I酶切后可以具體鑒定到菌種,對(duì)于臨床中常見的皮膚癬菌感染診斷價(jià)值更高,可以作為傳統(tǒng)方法的輔助性診斷方法。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R756
【圖文】：

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文2 結(jié) 果培養(yǎng)結(jié)果如下例 125 例，其中確診真菌感染的病例 62 例，臨)，培養(yǎng)陽性菌株 57 例（64.7%）；其中菌落形例，霉菌屬 5 例。的菌株在培養(yǎng)基上菌落形態(tài)多樣，大致可分為奶酪狀；皮膚癬菌屬菌落形態(tài)呈白色絨毛狀、同的色素沉著；霉菌屬菌落形態(tài)呈疏松、干燥 1 所示：

培養(yǎng)二周菌落形態(tài)

培養(yǎng)二周菌落形態(tài)

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

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本文編號(hào)：2755972