【摘要】：目的環(huán)孢子蟲與微孢子蟲作為人類腸道寄生蟲常見種類,對(duì)人類生存環(huán)境造成污染,曾在世界多地爆發(fā)性流行,免疫力低下患者感染后可致脫水性腹瀉直至死亡,嚴(yán)重威脅人類健康。獨(dú)龍牛(Bos frontalis)在中國(guó)境內(nèi)僅分布于云南怒江州獨(dú)龍江和怒江流域,具有很高的經(jīng)濟(jì)利用價(jià)值與寶貴的遺傳資源價(jià)值,環(huán)孢子蟲與微孢子作為腸道寄生蟲隨糞便排出,可污染環(huán)境,由于其存在人獸共患感染型可造成人群感染。本研究利用巢式PCR特異性敏感性及準(zhǔn)確性高的特點(diǎn),選取云南省怒江州獨(dú)龍牛為調(diào)查對(duì)象,對(duì)畢式微孢子蟲和環(huán)孢子蟲的感染情況進(jìn)行調(diào)查;研究獨(dú)龍牛的微孢子蟲和環(huán)孢子蟲基因型,為該地區(qū)人獸共患微孢子蟲病和環(huán)孢子蟲病的進(jìn)一步研究提供理論依據(jù)。方法從2017年9月至2018年9月,在云南省怒江州福貢縣、貢山縣周邊及村莊共五個(gè)地點(diǎn)分四個(gè)季節(jié)采集到1129份獨(dú)龍牛糞便樣本,用OMG試劑盒提取樣本DNA�；诃h(huán)孢子蟲核糖體小亞基(18S rRNA)基因和微孢子蟲內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(ITS)基因中的多態(tài)區(qū),利用巢式PCR擴(kuò)增提取的樣本DNA后凝膠電泳,將測(cè)到的陽性標(biāo)本送測(cè)序,確定陽性率。測(cè)序結(jié)果利用NCBI進(jìn)行序列檢索,應(yīng)用MEGA6、SPSS19.0、Cluster X 1.83等分子生物學(xué)軟件進(jìn)行序列比對(duì)分析和進(jìn)化樹繪制,確定蟲種、基因型及流行規(guī)律。結(jié)果1.在怒江州采集到的1129份獨(dú)龍牛糞便樣本中,經(jīng)巢式PCR擴(kuò)增、凝膠電泳后測(cè)序,共檢測(cè)到微孢子蟲19份,感染率為1.68%(19/1129,95%CI0.93%~2.43%),五個(gè)地點(diǎn)總感染率其中福貢縣的鳩門當(dāng)感染率為0(0/218),古泉村感染率為2.73%(6/220,95%CI 0.58%~4.88%),亞左洛村感染率為0.87%(2/231,95%CI 0~2.07%),貢山縣茨開鎮(zhèn)感染率1.28%(3/234,95%CI0~2.72%),獨(dú)龍江鄉(xiāng)感染率3.54%(8/226,95%CI 1.13%~5.95%),五個(gè)地點(diǎn)感染率(P=0.026,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)。四個(gè)季度總感染率其中春季感染率為1.10%(3/272,95%CI 0~2.34%),夏季感染率為3.26%(9/276,95%CI1.17%~5.36%),秋季感染率為1.28%(4/312,95%CI 0.03%~2.53%),冬季感染率為1.12%(3/269,95%CI 0~2.38%),四個(gè)季度感染率(P=0.137,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)。19份陽性樣本中鑒定出4種已知基因:EbpC(n=6)、CHN3(n=3)、CHN4(n=4)、BEB4(n=4);兩種新基因型分別命名為YNNJ1,YNNJ2。2.采集到的1129份獨(dú)龍牛糞便樣本中,共檢測(cè)到環(huán)孢子蟲17份,感染率為1.51%(17/1129,95%CI 0.80%~2.22%),五個(gè)地點(diǎn)總感染率其中鳩門當(dāng)感染率為0(0/218),古泉村感染率為0.91%(2/220,95%CI 0~2.16%),亞左洛村感染率為1.29%(3/232,95%CI 0~2.74%),貢山縣茨開鎮(zhèn)感染率1.71%(4/234,95%CI 0.05%~3.37%),獨(dú)龍江鄉(xiāng)感染率3.54%(8/226,95%CI1.13%~5.95%),五個(gè)地點(diǎn)感染率(P=0.036,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)。四個(gè)季度總感染率其中春季感染率為0.74%(2/272,95%CI 0~1.76%),夏季感染率為2.90%(8/276,95%CI 0.92%~4.88%),秋季感染率為0.64%(2/312,95%CI0~1.55%),冬季感染率為1.86%(5/269,95%CI 0.25%~3.47%),四個(gè)季度感染率(P=0.090,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)。結(jié)論本研究首次分析了云南省怒江地區(qū)獨(dú)龍牛微孢子蟲的人獸共患基因型種類和環(huán)孢子蟲種類。獨(dú)龍牛微孢子蟲春夏秋冬感染率分別為1.10%(3/272)、3.26%(9/276)、1.28%(4/312)、1.12%(3/269);獨(dú)龍牛環(huán)孢子蟲春夏秋冬感染率分別為0.74%(2/272)、2.90%(8/276)、0.64%(2/312)、1.86%(5/269)。成功鑒定出畢氏微孢子蟲基因型:EbpC、CHN3、CHN4、BEB4、YNNJ1、YNNJ2,全部為人獸共患基因型,其中YNNJ1、YNNJ2是本次研究鑒定出的新型微孢子蟲,豐富了該蟲種的基因型。分析發(fā)現(xiàn)微孢子蟲不同地點(diǎn)感染率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,地點(diǎn)是微孢子蟲感染的風(fēng)險(xiǎn)因素,以獨(dú)龍江鄉(xiāng)感染率最高;不同季度感染率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,微孢子蟲感染不受季節(jié)影響。本實(shí)驗(yàn)鑒定出環(huán)孢子蟲都為牛環(huán)孢子蟲,分析發(fā)現(xiàn)環(huán)孢子蟲不同地點(diǎn)感染率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,地點(diǎn)是環(huán)孢子蟲感染的風(fēng)險(xiǎn)因素,以獨(dú)龍江鄉(xiāng)感染率最高;不同季度感染率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,環(huán)孢子蟲感染不受季節(jié)影響。
【學(xué)位授予單位】：大理大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R531.5;R181.3
【圖文】：

微孢子蟲及環(huán)孢子蟲研究進(jìn)展3圖1.1 畢氏腸微孢子蟲生活史Fig. 1.1 Life cycle of Enterocytozoon bieneusi1.1.2 形態(tài)結(jié)構(gòu)微孢子蟲孢子階段具有感染力，成熟的孢子呈橢圓形，大小約1-3μm×1.5-4μm[11]，其中畢式微孢子蟲體積最小為1μm×1.5μm孢子由內(nèi)生孢子層和糖蛋白層兩部分構(gòu)成，糖蛋白層包括糖蛋白外殼和角質(zhì)內(nèi)層對(duì)外界抵抗性強(qiáng)，保護(hù)內(nèi)生孢子層的孢子質(zhì)及遺傳物質(zhì)[12]。孢子質(zhì)位于內(nèi)部被幾丁質(zhì)組成的孢子內(nèi)壁環(huán)繞，主要包括：一個(gè)根據(jù)種類不同呈單核或雙核含遺傳物質(zhì)的孢子核、一個(gè)頂端錨定盤、一個(gè)盤繞狀的極絲（可形成極管）、一個(gè)具有 感染性的板層狀可能包含非典型高爾基體的膜質(zhì)的極胞體、核糖體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等[13-15]。極管是微孢子蟲感染宿主細(xì)胞時(shí)由極絲形成輸送孢子內(nèi)容物進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)的中空管狀結(jié)構(gòu)，在感染中起決定作用，也是微孢子蟲最顯著的結(jié)構(gòu)[16]。孢子結(jié)構(gòu)如圖1.2所示[16]。

微孢子蟲及環(huán)孢子蟲研究進(jìn)展4圖1.2 微孢子蟲孢子結(jié)構(gòu)圖Fig1.2 Diagram of a Microsporidian spore1.1.3 分類學(xué)與系統(tǒng)發(fā)育微孢子蟲現(xiàn)已被歸類為真菌，屬于真核生物[15, 16]；但也有報(bào)道微孢子蟲在電子顯微鏡下缺乏某些典型真核生物結(jié)構(gòu)（線粒體、高爾基體等），反而具有原核生物才具備的小核糖體；結(jié)合核結(jié)構(gòu)、分子細(xì)胞特征、核糖體沉降系數(shù)等指標(biāo)將其劃分為源真核生物[11, 17]。1857年首次發(fā)現(xiàn)微孢子蟲后，1882年創(chuàng)立微孢子目，1976年創(chuàng)立微孢子門，兩者于1980年劃分入原生動(dòng)物亞屆[3, 11, 18]；160多年人們對(duì)微孢子蟲的分類一直存在不同意見，曾被歸類為：原生動(dòng)物[11]、真菌[19]、藻類和酵母孢子[4]等。美國(guó)國(guó)立生物技術(shù)信息中心（NCBI）將微孢子蟲劃分為真菌界，孢子門

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 周洋;王強(qiáng);呂彪;齊萌;菅復(fù)春;張龍現(xiàn);;環(huán)孢子蟲流行病學(xué)、分類及其遺傳特征的研究進(jìn)展[J];中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào);2009年03期

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相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 郭亞瓊;隱孢子蟲和環(huán)孢子蟲的全基因組測(cè)序及其在分型工具建立中的應(yīng)用[D];華東理工大學(xué);2015年

本文編號(hào)：2736665