【摘要】：【背景目的】牛分枝桿菌卡介苗(Mycobacterium bovis Bacille Calmette-Guérin,BCG)作為目前唯一的預(yù)防結(jié)核病(TB)疫苗,能夠誘導(dǎo)有效的免疫保護(hù)兒童抗結(jié)核性腦膜炎和粟粒性肺結(jié)核等重癥結(jié)核病,但是BCG提供的保護(hù)時(shí)間非常短,通常只有10-15年。相應(yīng)地,BCG免疫缺乏對(duì)青少年和成人這一高發(fā)人群的免疫保護(hù)。青少年和成人仍是TB流行和致死率最高的人群。據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)估計(jì),2018年世界范圍內(nèi)約有1000萬(wàn)TB新發(fā)病例,160萬(wàn)人死于TB,其中90%發(fā)生于青少年和成人。而且,世界上約25%的人群屬于潛伏結(jié)核病感染(Latent tuberculosis infection,LTBI)。因此,如能延長(zhǎng)卡介苗免疫的保護(hù)期,對(duì)防控青少年和成年人TB的發(fā)生具有重要意義。巨噬細(xì)胞自噬和凋亡,可分別激活抗原遞呈的溶酶體途徑和交叉遞呈途徑,也是機(jī)體抗結(jié)核分枝桿菌感染的重要措施。然而結(jié)核分枝桿菌具有多種機(jī)制抑制感染細(xì)胞自噬和凋亡。在正常生理?xiàng)l件下,雖然BCG具有較弱的誘導(dǎo)感染的巨噬細(xì)胞凋亡的能力,但是BCG自身不會(huì)誘導(dǎo)感染的巨噬細(xì)胞自噬。由于BCG是由具有毒力的牛分枝桿菌通過(guò)傳代減毒而得到的活疫苗,因此,關(guān)鍵的科學(xué)問(wèn)題是,BCG是否從親代繼承了逃避自噬和凋亡機(jī)制而抑制BCG誘導(dǎo)的免疫保護(hù)效應(yīng)。為了分析這些逃避機(jī)制對(duì)BCG疫苗的早期和長(zhǎng)期保護(hù)性的影響,在本研究中我們擬從BCG菌株中鑒定抑制自噬基因,基因敲除后評(píng)價(jià)突變株抗結(jié)核分枝桿菌感染的保護(hù)性。【方法】1.生物信息學(xué)分析:為了找到BCG中抑制巨噬細(xì)胞凋亡或自噬的基因,我們運(yùn)用BLASTn將結(jié)核分枝桿菌H37Rv中抑制凋亡和自噬基因nuo G、pkn E和eis與BCG Pasteur 1173P2基因組進(jìn)行同源比對(duì)。將同源比對(duì)得到的基因進(jìn)行分子克隆和測(cè)序后,與世界范圍內(nèi)的12株BCG和牛分枝桿菌進(jìn)行比對(duì)和生物信息學(xué)分析。2.基因敲除菌株的構(gòu)建:為了通過(guò)增強(qiáng)誘導(dǎo)感染的巨噬細(xì)胞自噬或凋亡來(lái)增強(qiáng)BCG的有效性,我們?cè)贐CG中敲除BCG_3174、BCG_1782和BCG_2432c構(gòu)建重組BCG并命名為ΔBCG_3174、ΔBCG_1782和ΔBCG_2432c。3.基因敲除菌株誘導(dǎo)自噬和凋亡能力的鑒定:用這些突變BCG菌株以MOI=5感染THP-1巨噬細(xì)胞,在感染后不同的時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)巨噬細(xì)胞凋亡和自噬水平;以及在巨噬細(xì)胞內(nèi)的存活率的變化。分別以野生型BCG(BCG WT)和培養(yǎng)基為對(duì)照。4.比較不同突變株免疫小鼠抗結(jié)核分枝桿菌感染的保護(hù)性:為了分析BCG_3174、BCG_1782和BCG_2432c對(duì)BCG疫苗保護(hù)性的影響,我們使用C57BL/6小鼠模型來(lái)比較ΔBCG_3174、ΔBCG_1782和ΔBCG_2432c抗結(jié)核分枝桿菌原發(fā)感染的保護(hù)性。保護(hù)性評(píng)價(jià)采用肺臟荷菌量和組織病理分析。分別以BCG WT和PBS為對(duì)照。5.鑒定BCG_2432c是BCG的抑制自噬基因:使用激光共聚焦檢測(cè)ΔBCG_2432c和BCG WT感染轉(zhuǎn)染有GFP-RFP-LC3慢病毒的THP-1巨噬細(xì)胞后細(xì)胞內(nèi)自噬流的變化;同時(shí)使用western-blot檢測(cè)感染的THP-1巨噬細(xì)胞內(nèi)LC3的變化。以及使用3-MA抑制或雷帕霉素促進(jìn)自噬評(píng)價(jià),并檢測(cè)在巨噬細(xì)胞內(nèi)的存活率的變化。6.鑒定BCG_2432c抑制自噬的機(jī)制:為了檢測(cè)ΔBCG_2432c誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞自噬的機(jī)制,一方面檢測(cè)ΔBCG_2432c和BCG WT感染巨噬細(xì)胞后胞內(nèi)活性氧(ROS)的變化,以及評(píng)價(jià)ROS促進(jìn)感染細(xì)胞的自噬;另一方面,評(píng)價(jià)感染細(xì)胞釋放到培養(yǎng)基中的Th1、Th2和Th17型細(xì)胞因子隨時(shí)間的變化。7.評(píng)價(jià)BCG_2432c對(duì)抗原遞呈效率的抑制作用:為了分析ΔBCG_2432c誘導(dǎo)自噬對(duì)抗原遞呈細(xì)胞(APCs)抗原遞呈能力的影響,我們使用ΔBCG_2432c或BCG WT感染12h后的BALB/c小鼠(H-2d)骨髓來(lái)源的巨噬細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞與Ag85B致敏的CD4+T或CD8+T細(xì)胞共孵育24h,通過(guò)檢測(cè)釋放到培養(yǎng)基中的IL-2來(lái)反應(yīng)抗原遞呈能力的改變。以及使用3-MA抑制自噬評(píng)價(jià)其自噬特異性介導(dǎo)。8.免疫原性的早期評(píng)價(jià):野生型BCG或ΔBCG_2432皮下免疫C57BL/6小鼠,免疫后0-28d的不同時(shí)間點(diǎn),檢測(cè)脾臟和肺臟的抗原Ag85B特異性T細(xì)胞,評(píng)價(jià)ΔBCG_2432c相對(duì)于BCG WT誘導(dǎo)抗原特異性T細(xì)胞及多功能T細(xì)胞反應(yīng)的能力以及歸巢肺臟的速度。9.評(píng)價(jià)免疫后誘導(dǎo)的免疫記憶:野生型BCG或ΔBCG_2432皮下免疫C57BL/6小鼠,28d、60d、90d和120d后,檢測(cè)ΔBCG_2432c相對(duì)于BCG WT誘導(dǎo)脾臟和肺臟產(chǎn)生免疫記憶的能力以及歸巢速度的變化。10.抗感染的早期和長(zhǎng)期保護(hù)性評(píng)價(jià):野生型BCG或ΔBCG_2432皮下免疫C57BL/6小鼠,14d、28d、60d、90d和120d后,使用小鼠模型分析ΔBCG_2432c相對(duì)于BCG WT抗結(jié)核分枝桿感染的保護(hù)性的改變。11.安全性評(píng)價(jià):野生型BCG或ΔBCG_2432經(jīng)尾靜脈感染SCID小鼠,比較幸存率、脾臟和肺臟荷菌量等指標(biāo),評(píng)價(jià)ΔBCG_2432的安全性�！窘Y(jié)果】1.BCG_2432c是BCG亞株中一個(gè)高度保守的基因:世界范圍內(nèi)的12株BCG基因組中普遍存在結(jié)核分枝桿菌H37Rv nuo G、pkn E和eis同源基因BCG_3174、BCG_1782和BCG_2432c,并且高度保守,也在牛分枝桿菌存在。2.突變株成功建立:敲除這些基因的BCG菌株分別命名為ΔBCG_3174、ΔBCG_1782和ΔBCG_2432c,且構(gòu)建成功。3.ΔBCG_2432c增強(qiáng)感染巨噬細(xì)胞的自噬:ΔBCG_1782和ΔBCG_2432c感染的巨噬細(xì)胞凋亡水平相對(duì)于BCG WT顯著增加;BCGWT不能誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞自噬,而ΔBCG_3174、ΔBCG_1782和ΔBCG_2432c感染的巨噬細(xì)胞發(fā)生自噬,且ΔBCG_2432c誘導(dǎo)自噬水平最高;ΔBCG_3174和ΔBCG_1782在巨噬細(xì)胞內(nèi)的存活率與BCG WT相比無(wú)顯著差異,ΔBCG_2432c在巨噬細(xì)胞內(nèi)的存活率顯著降低。4.僅ΔBCG_2432c抗結(jié)核分枝桿菌原發(fā)感染的短期保護(hù)性顯著強(qiáng)于BCG WT:ΔBCG_3174和ΔBCG_1782免疫C57BL/6小鼠抗結(jié)核分枝桿菌原發(fā)感染能力與BCG WT相當(dāng),而ΔBCG_2432c相對(duì)于BCG WT顯著降低感染小鼠肺臟荷菌量以及減輕肺部組織病理改變。5.BCG_2432c是BCG的抑制自噬基因:相對(duì)于BCG WT和空白對(duì)照組,ΔBCG_2432c感染的巨噬細(xì)胞內(nèi)LC3斑點(diǎn)顯著增加,且與溶酶體共定位;另外western blot結(jié)果顯示ΔBCG_2432c感染的巨噬細(xì)胞內(nèi)LC3-I向LC3-II的轉(zhuǎn)變顯著增加。ΔBCG_2432c在巨噬細(xì)胞內(nèi)的存活率顯著降低;使用雷帕霉素刺激巨噬細(xì)胞自噬能夠顯著降低BCG WT和ΔBCG_2432c在細(xì)胞內(nèi)的存活率;而使用3-MA抑制自噬能夠增加ΔBCG_2432c在巨噬細(xì)胞內(nèi)的存活但不能增加BCG WT在胞內(nèi)的存活率。6.ΔBCG_2432c促進(jìn)自噬與誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)活性氧增加有關(guān):ΔBCG_2432c感染的巨噬細(xì)胞胞內(nèi)ROS(H2O2和O2-)水平在感染細(xì)胞早期(4h和12h)顯著增加;ROS促進(jìn)了ΔBCG_2432c感染的巨噬細(xì)胞的自噬,且在巨噬細(xì)胞內(nèi)的存活率顯著降低。另外,ΔBCG_2432c感染的巨噬細(xì)胞釋放到培養(yǎng)基中的促炎細(xì)胞因子TNF-α和IL-6顯著增加,其他類(lèi)型的細(xì)胞因子無(wú)變化。7.ΔBCG_2432c增強(qiáng)了經(jīng)自噬溶酶體途徑的抗原遞呈:ΔBCG_2432c感染小鼠來(lái)源的樹(shù)突狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞與Ag85B致敏的CD4+T細(xì)胞共孵育24h后,相對(duì)于BCG WT,釋放更多的IL-2;使用3-MA抑制樹(shù)突狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞自噬后再于Ag85B致敏的CD4+T細(xì)胞共孵育,IL-2水平顯著降低;而3-MA抑制,不改變BCGWT釋放IL-2的水平。ΔBCG_2432c或BCG WT感染小鼠來(lái)源的樹(shù)突狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞與Ag85B致敏的CD8+T細(xì)胞共孵育后上清中的IL-2水平與對(duì)照組相比無(wú)顯著變化。8.ΔBCG_2432c免疫小鼠,相對(duì)于BCG WT,誘導(dǎo)小鼠脾臟產(chǎn)生的Ag85B特異性釋放TNF-α、IFN-γ和IL-2的CD4+和CD8+T細(xì)胞顯著增加,且誘導(dǎo)效應(yīng)T細(xì)胞更早歸巢到肺臟。9.相對(duì)于BCG WT,ΔBCG_2432c誘導(dǎo)小鼠脾臟和肺臟較早的產(chǎn)生Ag85B特異性分泌IFN-γ的效應(yīng)免疫記憶細(xì)胞(CD62LloCD44hi,TEM)和Ag85B特異性分泌IL-2的中樞免疫記憶細(xì)胞(CD62LhiCD44hi,TCM);在免疫后120d小鼠脾臟和肺臟的中樞免疫細(xì)胞和效應(yīng)細(xì)胞的水平相當(dāng)。10.ΔBCG_2432c抗結(jié)核分枝桿菌原發(fā)感染的能力與免疫后感染時(shí)間有關(guān)。免疫后28-60d,抗感染能力相對(duì)于BCG WT顯著增加。11.ΔBCG_2432c感染SCID小鼠后,小鼠肺臟、脾臟和肝臟荷菌量與BCG WT無(wú)差別,SCID小鼠存活率與BCG組無(wú)差別�！窘Y(jié)論】BCG_2432c是BCG的抑制自噬基因,且在世界各地臨床應(yīng)用的BCG亞株中廣泛存在;敲除BCG_2432c增強(qiáng)BCG感染的巨噬細(xì)胞自噬其促進(jìn)含菌自噬小體與溶酶體融合,促進(jìn)抗原遞呈而活化CD4+T細(xì)胞,促進(jìn)更多效應(yīng)T細(xì)胞歸巢到肺臟;基因敲除BCG_2432c的BCG菌株免疫小鼠的早期清除結(jié)核分枝桿菌感染的能力顯著增強(qiáng)。【背景和目的】成人是結(jié)核病(tuberculosis,TB)流行和致死的主要人群。當(dāng)前亟待需要研發(fā)有效抗成人結(jié)核病的疫苗。牛分枝桿菌卡介苗(Mycobacterium bovis Bacillus Calmette-Guérin,BCG)初免異源增強(qiáng)策略已經(jīng)被廣泛的用于抗成人結(jié)核病的研究,但是大部分的實(shí)驗(yàn)方案并沒(méi)有比BCG單獨(dú)免疫相比提高免疫保護(hù)性。然而,導(dǎo)致BCG初免異源增強(qiáng)方案失敗的原因尚不清楚。在本研究中我們構(gòu)建融合蛋白CTT3H為基礎(chǔ)的重組腺病毒疫苗(r Ad CTT3H),CTT3H蛋白結(jié)合DMT佐劑疫苗(CTT3H-DMT)和DNA結(jié)合DMT佐劑疫苗(p CTT3H-DMT);然后使用C57BL/6小鼠模型比較CTT3H為基礎(chǔ)的疫苗與BCG抗結(jié)核分枝桿菌感染保護(hù)性的差異;并比較BCG初免CTT3H為基礎(chǔ)的疫苗增強(qiáng)抗早期感染和持續(xù)性感染產(chǎn)生的免疫原性和免疫保護(hù)性�！痉椒ā�1.CTT3H為基礎(chǔ)的疫苗構(gòu)建:構(gòu)建并驗(yàn)證融合蛋白CTT3H為基礎(chǔ)的重組腺病毒疫苗(r Ad CTT3H)和DNA結(jié)合DMT佐劑疫苗(p CTT3H-DMT)。2.CTT3H為基礎(chǔ)的疫苗抗結(jié)核分枝桿菌原發(fā)感染保護(hù)性評(píng)價(jià):使用C57BL/6小鼠模型比較CTT3H為基礎(chǔ)的疫苗與BCG抗結(jié)核分枝桿菌早期原發(fā)感染保護(hù)性的差異:小鼠免疫BCG或CTT3H為基礎(chǔ)的疫苗9周后使用結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)株H37Rv滴鼻感染,4周后處死小鼠進(jìn)行脾臟和肺臟菌落計(jì)數(shù)以及肺部組織病理分析以評(píng)價(jià)保護(hù)性。3.BCG初免-CTT3H為基礎(chǔ)的疫苗增強(qiáng)抗結(jié)核分枝桿菌早期原發(fā)感染保護(hù)性評(píng)價(jià):使用C57BL/6小鼠模型比較BCG初免CTT3H為基礎(chǔ)的疫苗增強(qiáng)策略抗早期原發(fā)感染保護(hù)性:小鼠免疫BCG 8周后使用CTT3H為基礎(chǔ)的疫苗或BCG增強(qiáng),BCG初免17周后使用結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)株H37Rv滴鼻感染,感染4周后處死小鼠進(jìn)行脾臟和肺臟菌落計(jì)數(shù)以及肺部組織病理分析以評(píng)價(jià)保護(hù)性。4.BCG初免-CTT3H為基礎(chǔ)的疫苗增強(qiáng)抗結(jié)核分枝桿菌晚期持續(xù)性感染保護(hù)性評(píng)價(jià):使用C57BL/6小鼠模型比較BCG初免CTT3H為基礎(chǔ)的疫苗增強(qiáng)策略抗持續(xù)感染保護(hù)性:小鼠免疫BCG 4周后使用結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)株H37Rv滴鼻感染,感染4周后使用CTT3H為基礎(chǔ)的疫苗或BCG增強(qiáng),BCG初免19周后使用結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)株H37Rv滴鼻感染,感染4周后處死小鼠進(jìn)行脾臟和肺臟菌落計(jì)數(shù)以及肺部組織病理分析以評(píng)價(jià)保護(hù)性。5.CTT3H為基礎(chǔ)的疫苗免疫原性分析:使用C57BL/6小鼠模型比較CTT3H為基礎(chǔ)的疫苗與BCG抗結(jié)核分枝桿菌早期原發(fā)感染的免疫原性分析。小鼠免疫BCG或CTT3H為基礎(chǔ)的疫苗9周后,檢測(cè)外周血中抗體Ig G、Ig G1和Ig G2a滴度以及脾細(xì)胞釋放IFN-γ和疫苗產(chǎn)生的CTL效應(yīng)。6.BCG初免-CTT3H為基礎(chǔ)的疫苗增強(qiáng)后抗早期原發(fā)感染的免疫原性分析:使用C57BL/6小鼠模型比較BCG初免CTT3H為基礎(chǔ)的疫苗增強(qiáng)策略抗早期原發(fā)感染的免疫原性。小鼠免疫BCG 8周后使用CTT3H為基礎(chǔ)的疫苗或BCG增強(qiáng),BCG初免17周后,檢測(cè)外周血中抗體Ig G、Ig G1和Ig G2a滴度以及脾細(xì)胞釋放IFN-γ和疫苗產(chǎn)生的CTL效應(yīng);使用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)脾臟和肺臟中抗原CTT3H特異性的分泌IFN-γ或IL-2的CD4+或CD8+T細(xì)胞和CTT3H特異性的分泌IFN-γ的效應(yīng)記憶T細(xì)胞(CD62LloCD44hi,TEM)和中樞記憶T細(xì)胞(CD62LhiCD44hi,TCM)。7.BCG初免CTT3H為基礎(chǔ)的疫苗增強(qiáng)策略抗晚期持續(xù)感染的免疫原性:小鼠免疫BCG 4周后使用結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)株H37Rv滴鼻感染,感染4周后使用CTT3H為基礎(chǔ)的疫苗或BCG增強(qiáng),BCG初免19周后處死小鼠,使用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)脾臟和肺臟中抗原CTT3H特異性的分泌IFN-γ或IL-2的CD4+或CD8+T細(xì)胞和CTT3H特異性的分泌IFN-γ的效應(yīng)記憶T細(xì)胞(CD62LloCD44hi,TEM)和中樞記憶T細(xì)胞(CD62LhiCD44hi,TCM)�！窘Y(jié)果】1.CTT3H為基礎(chǔ)的重組腺病毒疫苗(r Ad CTT3H)和DNA結(jié)合DMT佐劑疫苗(p CTT3H-DMT)構(gòu)建成功。2.CTT3H為基礎(chǔ)的疫苗誘導(dǎo)的抗結(jié)核分枝桿菌早期原發(fā)感染的保護(hù)性相當(dāng),但不及BCG誘導(dǎo)產(chǎn)生的免疫保護(hù)。3.CTT3H為基礎(chǔ)的所有種類(lèi)疫苗均不能有效的增強(qiáng)BCG抗結(jié)核分枝桿菌早期原發(fā)感染。4.CTT3H為基礎(chǔ)的所有種類(lèi)疫苗均顯著增強(qiáng)BCG抗結(jié)核分枝桿菌持續(xù)性感染,且與疫苗類(lèi)型無(wú)關(guān)。5.CTT3H為基礎(chǔ)的疫苗誘導(dǎo)產(chǎn)生Th1型免疫反應(yīng),其中r Ad CTT3H免疫組小鼠外周血中Ig G2a/Ig G1比值和脾細(xì)胞產(chǎn)生INF-γ最高,p CTT3H-DMT免疫小鼠產(chǎn)生的CTL效應(yīng)最強(qiáng)。6.CTT3H為基礎(chǔ)的疫苗暴露前增強(qiáng)BCG產(chǎn)生強(qiáng)烈的Th1型免疫反應(yīng),其中BCG初免r Ad CTT3H增強(qiáng)組鼠Ig G2a/Ig G1比值和脾細(xì)胞產(chǎn)生INF-γ最高,所有同源增強(qiáng)組和異源增強(qiáng)組產(chǎn)生的CTL效應(yīng)均高于BCG初免PBS增強(qiáng)對(duì)照組;CTT3H為基礎(chǔ)的疫苗暴露前增強(qiáng)BCG誘導(dǎo)產(chǎn)生更多的CTT3H特異性的分泌IFN-γ的效應(yīng)T細(xì)胞和TEM,但是分泌IL-2的效應(yīng)T細(xì)胞和TCM沒(méi)有增加。7.CTT3H為基礎(chǔ)的疫苗暴露后增強(qiáng)BCG均產(chǎn)生更多的CTT3H特異性的分泌IFN-γ的效應(yīng)T細(xì)胞和TEM細(xì)胞以及分泌IL-2的效應(yīng)T細(xì)胞和TCM細(xì)胞,與疫苗類(lèi)型無(wú)關(guān)�！窘Y(jié)論】BCG初免增強(qiáng)策略更適合于抗結(jié)核分枝桿菌晚期持續(xù)性感染。暴露后增強(qiáng)BCG誘導(dǎo)產(chǎn)生更多的IFN-γ+TEM和IL-2+TCM細(xì)胞與提高抗結(jié)核分枝桿菌晚期持續(xù)性感染的保護(hù)性密切相關(guān),這些生物學(xué)標(biāo)志可為進(jìn)入臨床研究的疫苗篩選提供參考,并給未來(lái)抗成人結(jié)核病疫苗的研發(fā)提供幫助。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R52

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1 俞冠峗;朱明利;;中草藥抗結(jié)核分枝桿菌體外抑菌試驗(yàn)的研究進(jìn)展[A];第二屆中國(guó)臨床微生物學(xué)大會(huì)暨微生物學(xué)與免疫學(xué)三江論壇論文匯編[C];2011年

2 俞冠贊;朱明利;;中草藥抗結(jié)核分枝桿菌體外抑菌試驗(yàn)的研究進(jìn)展[A];首屆中國(guó)臨床微生物學(xué)大會(huì)（寧波會(huì)議）暨《醫(yī)學(xué)參考報(bào)》微生物學(xué)與免疫學(xué)論壇論文匯編[C];2010年

3 陸勇軍;陳冬妮;馬雙雙;牛長(zhǎng)紅;佘志剛;李翰祥;林少娥;;海洋真菌抗結(jié)核分枝桿菌靶向先導(dǎo)物的篩選[A];全國(guó)第九屆海洋生物技術(shù)與創(chuàng)新藥物學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2014年

4 俞冠峗;朱明利;;中草藥抗結(jié)核分枝桿菌體外抑菌試驗(yàn)的研究進(jìn)展[A];第四屆中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)感染科醫(yī)師大會(huì)暨傳染病診治高峰論壇、浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)肝病、感染病學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2011年

5 桂徐蔚;肖和平;;氯法齊明抗結(jié)核分枝桿菌的體外活性研究[A];2010年中國(guó)防癆協(xié)會(huì)臨床/基礎(chǔ)專(zhuān)業(yè)學(xué)術(shù)大會(huì)匯編[C];2010年

6 韓喜琴;黃海榮;李艷靜;于霞;高靜韜;畢志強(qiáng);初乃惠;李亮;馬s，

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