本文關鍵詞：HCV感染Huh7細胞模型的構建及miRNA對HCV RNA的抑制作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:建立丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)體外自然感染Huh7細胞模型,研究mi RNA能否有效抑制HCV感染細胞中1b型HCV RNA的復制。方法:1.將Huh7細胞與含高濃度HCV RNA的丙型肝炎病人血清(HCV 1b型)共同孵育72h,實時定量PCR(Q-PCR)檢測感染細胞內HCV RNA水平。并收集感染后不同時間的細胞及培養(yǎng)上清液,采用逆轉錄PCR(RT-PCR)檢測感染細胞內及培養(yǎng)上清中HCV RNA正、負鏈的表達;Western Blot檢測感染Huh7細胞內HCV Core和NS4B蛋白的表達。2.利用脂質體介導將HCV 1b基因型Core、NS4B的干擾質粒pc DNA6.2-GW/Em GFP-mi R-Core(mi R-Core)、pc DNA6.2-GW/Em GFPmi R-NS4B(mi R-NS4B)分別和共同瞬時轉染至感染的Huh7細胞,同時以轉染空載體pc DNA6.2-GW/Em GFP-mi R-negative(mi R-negative)、未轉染的感染Huh7細胞作為陰性對照(分別轉染3μg/ml和6μg/ml兩種濃度的干擾質粒),以孵育干擾素作為陽性對照(干擾素濃度為3000IU/ml,約等于3μg/ml),轉染48h后用Q-PCR檢測感染Huh7細胞內HCV RNA的表達。結果:1.采用Q-PCR檢測到感染Huh7細胞內高水平的HCV RNA表達。采用RT-PCR法在HCV感染后第3、6、9、12、16、20、25、30天均能持續(xù)檢測到細胞內和培養(yǎng)上清中HCV RNA正鏈的表達,第3、6、9、12、20天能間斷檢測到HCV負鏈RNA的表達;Western Blot檢測到HCV感染細胞內HCV Core和NS4B蛋白的表達,對照細胞內未檢測到。2.在干擾質粒濃度為3μg/ml的感染Huh7細胞中,mi R-Core、mi R-NS4B、mi R-Core+mi R-NS4B組的5’NTR m RNA相對表達量均低于空白對照組和mi R-negative組(p0.01),均高于陽性對照組p0.01);其余組間比較均無統(tǒng)計學意義(p0.05);在干擾質粒濃度為6μg/ml的感染Huh7細胞細胞中,mi R-Core、mi R-NS4B、mi R-Core+mi R-NS4B組的5’NTR m RNA的相對表達量均低于空白對照組和mi R-negative組(p0.01),mi R-Core組、mi R-NS4B組高于陽性對照組(p0.01),mi R-Core+mi R-NS4B組低于陽性對照組(p0.01),mi R-Core+mi R-NS4B組低于mi R-Core組和mi R-NS4B組(p0.01),其余組間比較均無統(tǒng)計學意義(p0.05)。結論:1.成功建立HCV 1b型體外Huh7細胞感染模型;2.靶向HCV Core和NS4B的mi RNA均能有效抑制HCV感染細胞中HCV RNA的復制,且兩者之間有一定協(xié)同作用,為HCV的抗病毒治療提供了新的治療思路。
【關鍵詞】：丙型肝炎病毒 細胞感染模型 核心蛋白 miRNA 非結構蛋白4B
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R512.63
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 第1章 前言12-14
• 第2章 材料與方法14-28
• 第3章 實驗結果28-34
• 第4章 討論34-38
• 第5章 結論38-40
• 參考文獻40-45
• 文獻綜述45-53
• 參考文獻50-53
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文53-54
• 致謝54

【相似文獻】

中國期刊全文數據庫 前10條

1 魯慧英;Detection of hepatitis C virus RNA sequences in cholangiocarcinomas in Chinese and American patients[J];Chinese Medical Journal;2000年12期

2 ;Detection the HCV RNA by PCR-microplate hybridization method from clinical specimens[J];中國輸血雜志;2001年S1期

3 付漢江,鄭曉飛;類mRNA RNA研究進展[J];國外醫(yī)學(分子生物學分冊);2002年04期

4 Verheyden B ,徐其武;口服脊髓灰質炎疫苗核殼和RNA的穩(wěn)定性[J];國外醫(yī)學.預防.診斷.治療用生物制品分冊;2002年01期

5 CMBE譯文組;探索小RNA的功能[J];現(xiàn)代臨床醫(yī)學生物工程學雜志;2004年03期

6 沈維干;RNA interference and its current application in mammals[J];Chinese Medical Journal;2004年07期

7 ;Potent and specific inhibition of SARS-CoV antigen expression by RNA interference[J];Chinese Medical Journal;2005年09期

8 孫娣;汪洋;張麗娟;閆玉清;;一種簡捷提取植物總RNA的方法[J];黑龍江醫(yī)藥;2005年06期

9 熊慧華;于世英;胡廣原;莊亮;;Effects of Survivin Expression Suppressed by Short Hairpin RNA on MCF-7 Cells[J];華中科技大學學報(醫(yī)學英德文版);2006年03期

10 楊益超;;RNA干擾及其在醫(yī)學中的應用[J];廣西醫(yī)學;2007年10期

中國重要會議論文全文數據庫 前10條

1 金由辛;;面向21世紀的RNA研究[A];面向21世紀的科技進步與社會經濟發(fā)展（下冊）[C];1999年

2 ;第四屆RNA全國研討會大會報告日程安排[A];第四屆全國RNA進展研討會論文集[C];2005年

3 ;Function of Transfer RNA Modifications in Plant Development[A];植物分子生物學與現(xiàn)代農業(yè)——全國植物生物學研討會論文摘要集[C];2010年

4 王峰;張秋平;陳金湘;;棉花總RNA的快速提取方法[A];中國棉花學會2011年年會論文匯編[C];2011年

5 關力;陳本iY;iJ云虹;郭培芝;魏重琴;邱蘇吾;苗健;;關于動物}D~T中RNAn,定方法的研究[A];中國生理科學會學術會議論文摘要匯編（生物化學）[C];1964年

6 夏海濱;;小RNA在免疫學領域中的應用研究進展[A];中國免疫學會第五屆全國代表大會暨學術會議論文摘要[C];2006年

7 ;The stability of hepatitis C virus RNA in various handling and storage conditions[A];中國輸血協(xié)會第四屆輸血大會論文集[C];2006年

8 郭德銀;;RNA干擾在病毒研究和控制中的應用[A];2006中國微生物學會第九次全國會員代表大會暨學術年會論文摘要集[C];2006年

9 甘儀梅;楊業(yè)華;王學奎;曹燕;楊特武;;棉花總RNA快速提取[A];中國棉花學會2007年年會論文匯編[C];2007年

10 ;Identification and characterization of novel interactive partner proteins for PCBP1 that is a RNA-binding protein[A];中國優(yōu)生優(yōu)育協(xié)會第四屆全國學術論文報告會暨基因科學高峰論壇論文專輯[C];2008年

中國重要報紙全文數據庫 前10條

1 記者 馮衛(wèi)東;研究人員發(fā)現(xiàn)可破壞腫瘤抑制基因的小RNA[N];科技日報;2009年

2 記者 儲笑抒 通訊員 盛偉;人體微小RNA有望提前發(fā)出癌癥預警[N];南京日報;2011年

3 瀘州醫(yī)學院副教授、科普作家 周志遠;“大頭兒子”與環(huán)狀RNA[N];第一財經日報;2014年

4 麥迪信;小分子RNA可能有大作用[N];醫(yī)藥經濟報;2003年

5 董映璧;美發(fā)現(xiàn)基因調控可回應“RNA世界”[N];科技日報;2006年

6 張忠霞;特制RNA輕推一下,就能“喚醒”基因[N];新華每日電訊;2007年

7 聶翠蓉;RNA：縱是配角也精彩[N];科技日報;2009年

8 馮衛(wèi)東;RNA干擾機制首次在人體中獲得證實[N];科技日報;2010年

9 馮衛(wèi)東　王小龍;英在地球早期環(huán)境模擬條件下合成類RNA[N];科技日報;2009年

10 記者 常麗君;新技術讓研究進入單細胞內RNA的世界[N];科技日報;2011年

中國博士學位論文全文數據庫 前10條

1 王趙瑋;昆蟲RNA病毒復制及昆蟲抗病毒天然免疫機制研究[D];武漢大學;2014年

2 包純;一類新非編碼RNA的發(fā)現(xiàn)以及產生和功能的初探[D];華中師范大學;2015年

3 李語麗;基于MeRIP-seq的水稻RNA m6A甲基化修飾的研究[D];中國科學院北京基因組研究所;2015年

4 熊瑜琳;miR-122靶位基因STAT3調控長鏈非編碼 RNA Lethe促進HCV復制的機制研究[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

5 范春節(jié);高通量測序鑒定毛竹小RNA及其功能分析[D];中國林業(yè)科學研究院;2012年

6 王加強;小鼠著床前胚胎特異ERV相關長非編碼RNA的定向篩選及功能研究[D];東北農業(yè)大學;2015年

7 王業(yè)偉;非編碼RNA SPIU的結構和功能研究和p19INK4D在APL發(fā)病中的作用[D];上海交通大學;2013年

8 鄒艷芬;子癇前期中非編碼RNA對滋養(yǎng)細胞功能的調控及機制探索[D];南京醫(yī)科大學;2015年

9 朱喬;miR-10b在人肝細胞肝癌發(fā)生中的作用及其機制的初步探索[D];第四軍醫(yī)大學;2015年

10 蔣俊鋒;長鏈非編碼RNA BACE1-AS促進Aβ聚集及其調節(jié)BACE1和SERF1a的ceRNA機制研究[D];第二軍醫(yī)大學;2015年

中國碩士學位論文全文數據庫 前10條

1 陸聰兒;條紋斑竹鯊再生肝臟中差異RNA的研究[D];浙江理工大學;2015年

2 張曉輝;小鼠幾種長鏈非編碼RNA基因功能的初步研究[D];昆明理工大學;2015年

3 全弘揚;長鏈非編碼RNA在細胞內質網應激反應中的相關作用及機制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2015年

4 胡亮;DDX19A識別PRRSV基因組RNA并激活NLRP3炎癥小體[D];中國農業(yè)科學院;2015年

5 張帥兵;應用RNA干擾技術對旋毛蟲Nudix水解酶基因功能的研究[D];鄭州大學;2015年

6 鄭芳芳;肺癌RNA-Seq數據中RNA編輯事件的識別算法和系統(tǒng)分析[D];蘇州大學;2015年

7 陳瑞東;長鏈非編碼RNA MEG3在胰腺癌發(fā)生發(fā)展中作用的實驗研究[D];蘇州大學;2015年

8 劉駿武;線蟲和水稻中環(huán)狀RNA的預測及分析[D];華中農業(yè)大學;2015年

9 李猷;利用RNA干擾技術提高番茄抗TMV侵染能力的研究[D];牡丹江師范學院;2015年

10 吳術盛;SVCV感染EPC細胞microRNA表達譜的初步研究[D];華中農業(yè)大學;2015年

  本文關鍵詞：HCV感染Huh7細胞模型的構建及miRNA對HCV RNA的抑制作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號：270255