本文關(guān)鍵詞：艾滋病相關(guān)性彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤組織中miRNA表達(dá)譜的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景:艾滋病相關(guān)性淋巴瘤(Acquired immune deficiency syndrome-related lymphoma,ARL)本質(zhì)為免疫細(xì)胞發(fā)生惡變,與艾滋病具有相同的免疫功能缺陷發(fā)病基礎(chǔ),是最常見的艾滋病(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS)相關(guān)惡性腫瘤之一。AIDS相關(guān)性彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤(AIDS related diffuse large B-cell lymphoma,AIDS-DLBCL)是一組與HIV感染有關(guān)的異質(zhì)性腫瘤。病變可發(fā)生于淋巴結(jié)和結(jié)外器官,臨床過程也更具有侵襲性且預(yù)后不良。目前,ARL的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。micro RNA(mi RNA)是一類長度為18-23個(gè)堿基的內(nèi)源性非編碼小分子RNA,在轉(zhuǎn)錄后水平通過促進(jìn)靶m RNA降解或抑制翻譯過程而發(fā)揮負(fù)調(diào)控基因表達(dá)的作用。mi RNA在多種腫瘤發(fā)生、發(fā)展的過程中發(fā)揮著癌基因或抑癌基因的作用,其差異表達(dá)可作為腫瘤診斷和預(yù)后的指標(biāo)及治療的新靶點(diǎn)。近年來,有關(guān)AIDS-DLBCL的研究不多,因此人們對AIDS-DLBCL的發(fā)病機(jī)制、診斷、治療和預(yù)后的認(rèn)識都很有限。因此,本研究目的旨在分析AIDS-DLBCL腫瘤組織中mi RNA的表達(dá)情況,并對其差異性較大的mi RNA進(jìn)行靶基因預(yù)測,為研究淋巴瘤發(fā)病機(jī)制及其診斷治療提供依據(jù)。研究目的1、應(yīng)用Exiqon公司的mi RCURYTM LNA mi RNA芯片,篩選與獲得性免疫缺陷病毒(HIV)感染/艾滋病相關(guān)性的彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤(AIDS-DLBCL)及非AIDS相關(guān)性的彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤(non-AIDS-DLBCL)中的差異表達(dá)mi RNA,以建立起可靠的AIDS-DLBCL的mi RNA表達(dá)譜。2、利用mi RNA靶基因預(yù)測軟件,分析AIDS-DLBCL中異常表達(dá)的mi RNA的靶基因,揭示mi RNA與靶m RNA的調(diào)控關(guān)系。3、本課題期望為研究淋巴瘤發(fā)病機(jī)制及其治療診斷提供依據(jù)。材料和方法1、AIDS-DLBCL中mi RNA表達(dá)譜的檢測:選取自2010年12月至2013年2月云南省多家醫(yī)院確診的艾滋病相關(guān)性彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤6例以及云南省大理學(xué)院附屬醫(yī)院診斷的非艾滋病相關(guān)性彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤4例。10例樣本均為石蠟組織,所有標(biāo)本均經(jīng)常規(guī)HE染色病理檢查確診。標(biāo)本按照Trizol法提取其中的總RNA,經(jīng)紫外分光光度計(jì)檢測RNA濃度和純度,瓊脂糖凝膠電泳鑒定RNA的完整性,對mi RNA進(jìn)行熒光標(biāo)記,制成雜交液與mi RNA芯片雜交、洗片,對mi RNA芯片進(jìn)行掃描及數(shù)據(jù)分析,獲得艾滋病相關(guān)性彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤的mi RNA表達(dá)譜。2、AIDS-DLBCL中差異表達(dá)mi RNA的靶基因預(yù)測:應(yīng)用三種生物信息學(xué)軟件(Mi Randa、mi RBase、Target Scan)進(jìn)行差異表達(dá)mi RNA的靶基因預(yù)測,找出mi RNA可能的作用靶點(diǎn),并進(jìn)一步利用Gene Ontology(GO)和Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG)數(shù)據(jù)庫分析其靶基因的生物學(xué)功能。結(jié)果：一、AIDS-DLBCL mi RNA表達(dá)譜的建立:1、從6例AIDS-DLBCL、4例non-AIDS-DLBCL組織中提取的總RNA的濃度、純度經(jīng)檢測均符合要求,總RNA的A260/280值在1.8-2.1之間,A260/230均大于1.8。瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示樣本28S、18S r RNA兩條帶清晰,未見明顯DNA和蛋白質(zhì)污染。2、各芯片樣本雜交信號相關(guān)性散點(diǎn)圖顯示AIDS-DLBCL和non-AIDS-DLBCL兩組組內(nèi)樣品雜交信號相關(guān)性較高,去除誤差影響,體現(xiàn)了組內(nèi)樣本之間生物學(xué)性質(zhì)相似;由于組織中少數(shù)mi RNA的表達(dá)發(fā)生改變,使得兩種雜交信號偏移,實(shí)驗(yàn)組和對照組樣本間相關(guān)系數(shù)約為0.98,符合標(biāo)準(zhǔn)。3、AIDS-DLBCL與non-AIDS-DLBCL中存在差異表達(dá)的mi RNA。AIDS-DLBCL中表達(dá)水平升高2倍以上的mi RNA有64個(gè),表達(dá)水平下降2倍以上的mi RNA有44個(gè);其中通過t檢驗(yàn)上調(diào)的mi RNA有6個(gè),下調(diào)的mi RNA有17個(gè)。二、艾滋病相關(guān)性彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤差異表達(dá)mi RNA靶基因預(yù)測通過Mi Randa、mi RBase Targets、Target Scan 3種靶點(diǎn)預(yù)測軟件對上述23個(gè)mi RNA進(jìn)行靶基因預(yù)測。為了減少假陽性率,我們只挑選至少出現(xiàn)在2種軟件中的交集基因作為mi RNA可能的靶基因。其中4個(gè)基因被預(yù)測與AIDS-DLBCL的發(fā)生發(fā)展有關(guān),分別是上調(diào)mi R-185-3p的靶基因ZAP70、TNFRSF13C、IGGL1和上調(diào)mi R-744-5p的靶基因CD79A。這些結(jié)果也提示我們mi R-185-3p和mi R-744-5p很可能參與調(diào)控HIV的感染和AIDS-DLBCL的進(jìn)展過程,有望成為AIDS-DLBCL的分子標(biāo)志物。結(jié)論:本研究篩選得到多個(gè)AIDS-DLBCL中具有特殊研究價(jià)值的mi RNA及其靶基因,推測mi R-185-3p和mi R-744-5p的上調(diào)將抑制靶基因ZAP70、TNFRSF13C、IGLL1、CD79A的表達(dá),導(dǎo)致免疫缺陷,增強(qiáng)機(jī)體對HIV的易感性和AIDS-DLBCL的發(fā)生機(jī)率,為進(jìn)一步研究差異表達(dá)的mi RNA在AIDS-DLBCL中的生物學(xué)功能及其靶基因的效應(yīng)奠定了良好的基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：艾滋病相關(guān)性彌漫性大 B 細(xì)胞淋巴瘤 微小RNA 靶基因
【學(xué)位授予單位】：大理學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R512.91;R733.1
【目錄】：

• 中英文縮略詞對照表4-5
• 中文摘要5-8
• Abstract8-11
• 前言11-13
• 材料與方法13-23
• 一、實(shí)驗(yàn)材料13
• 二、主要試劑及儀器設(shè)備13-14
• 1、主要試劑13-14
• 2、儀器設(shè)備14
• 三、實(shí)驗(yàn)方法14-23
• （一）腫瘤石蠟組織樣本的選擇14-15
• （二）石蠟組織樣本處理15
• （三）總RNA提取15-16
• （四）miRNA標(biāo)記：16-17
• （五）miRNA芯片雜交：17-21
• （六）芯片洗滌：21-22
• （七）miRNA芯片掃描和分析：22-23
• 結(jié)果23-41
• 一、總RNA質(zhì)檢結(jié)果和芯片雜交掃描圖23-27
• 1. 樣本質(zhì)檢結(jié)果23
• 2. 芯片樣本雜交信號相關(guān)性掃描圖及散點(diǎn)圖23-27
• 二、miRNA基因表達(dá)譜芯片的總體情況27-29
• 三、靶基因預(yù)測29
• 四、miRNA靶基因功能的顯著性分析（GO-Analysis）29-34
• 五、靶基因參與的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路分析（Pathway Analysis）34-37
• 六、mi RNA與靶基因的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)（miRNA-Gene-Network）37-39
• 七、miRNA靶基因功能分析的網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建（miRNA-GO-Network）39-40
• 八、免疫缺陷相關(guān)靶基因預(yù)測40-41
• 討論41-46
• 一、AIDS-DLBCL的miRNA表達(dá)譜分析41-42
• 二、差異表達(dá)miRNA及其靶基因的相互關(guān)系42-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-52
• 發(fā)表的文章52-53
• 文獻(xiàn)綜述一53-62
• 參考文獻(xiàn)58-62
• 文獻(xiàn)綜述二62-72
• 參考文獻(xiàn)68-72
• 致謝72

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 曹學(xué)武;陳正堂;;miRNA靶基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證的研究進(jìn)展[J];重慶醫(yī)學(xué);2009年02期

2 肖耀軍;陳壯飛;鄭少斌;單正飛;;腎透明細(xì)胞癌基因表達(dá)譜的研究[J];廣東醫(yī)學(xué);2011年07期

3 ;衛(wèi)生部發(fā)布我國第一部《艾滋病診療指南》[J];世界臨床藥物;2005年08期

4 王紅;劉兆遠(yuǎn);王宏林;;MicroRNA及其與腫瘤關(guān)系的研究[J];現(xiàn)代免疫學(xué);2013年05期

5 夏海濱;李星;;miRNA在腫瘤發(fā)生、診斷及治療中的研究進(jìn)展[J];陜西師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2013年05期

6 呂鑫;付錦;;miRNA調(diào)節(jié)B淋巴細(xì)胞發(fā)育及功能并在免疫病中的作用[J];現(xiàn)代免疫學(xué);2014年06期

7 朱鍵;楊躍煌;田新;;miRNA在腫瘤方面的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生;2013年15期

8 許文劍;蘇秀蘭;劉明;;miRNA與腫瘤關(guān)系的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2013年17期

9 俞心念;陳寶安;;MicroRNA在彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤診斷預(yù)后方面的研究進(jìn)展[J];中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2013年05期

10 耿凌云;王欣;;MicroRNA在慢性淋巴細(xì)胞白血病中的研究進(jìn)展[J];中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2014年01期

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本文編號：268904