本文關鍵詞：艾滋病相關性彌漫性大B細胞淋巴瘤組織中miRNA表達譜的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景:艾滋病相關性淋巴瘤(Acquired immune deficiency syndrome-related lymphoma,ARL)本質為免疫細胞發(fā)生惡變,與艾滋病具有相同的免疫功能缺陷發(fā)病基礎,是最常見的艾滋病(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS)相關惡性腫瘤之一。AIDS相關性彌漫大B細胞淋巴瘤(AIDS related diffuse large B-cell lymphoma,AIDS-DLBCL)是一組與HIV感染有關的異質性腫瘤。病變可發(fā)生于淋巴結和結外器官,臨床過程也更具有侵襲性且預后不良。目前,ARL的發(fā)病機制尚未完全闡明。micro RNA(mi RNA)是一類長度為18-23個堿基的內(nèi)源性非編碼小分子RNA,在轉錄后水平通過促進靶m RNA降解或抑制翻譯過程而發(fā)揮負調(diào)控基因表達的作用。mi RNA在多種腫瘤發(fā)生、發(fā)展的過程中發(fā)揮著癌基因或抑癌基因的作用,其差異表達可作為腫瘤診斷和預后的指標及治療的新靶點。近年來,有關AIDS-DLBCL的研究不多,因此人們對AIDS-DLBCL的發(fā)病機制、診斷、治療和預后的認識都很有限。因此,本研究目的旨在分析AIDS-DLBCL腫瘤組織中mi RNA的表達情況,并對其差異性較大的mi RNA進行靶基因預測,為研究淋巴瘤發(fā)病機制及其診斷治療提供依據(jù)。研究目的1、應用Exiqon公司的mi RCURYTM LNA mi RNA芯片,篩選與獲得性免疫缺陷病毒(HIV)感染/艾滋病相關性的彌漫性大B細胞淋巴瘤(AIDS-DLBCL)及非AIDS相關性的彌漫性大B細胞淋巴瘤(non-AIDS-DLBCL)中的差異表達mi RNA,以建立起可靠的AIDS-DLBCL的mi RNA表達譜。2、利用mi RNA靶基因預測軟件,分析AIDS-DLBCL中異常表達的mi RNA的靶基因,揭示mi RNA與靶m RNA的調(diào)控關系。3、本課題期望為研究淋巴瘤發(fā)病機制及其治療診斷提供依據(jù)。材料和方法1、AIDS-DLBCL中mi RNA表達譜的檢測:選取自2010年12月至2013年2月云南省多家醫(yī)院確診的艾滋病相關性彌漫性大B細胞淋巴瘤6例以及云南省大理學院附屬醫(yī)院診斷的非艾滋病相關性彌漫性大B細胞淋巴瘤4例。10例樣本均為石蠟組織,所有標本均經(jīng)常規(guī)HE染色病理檢查確診。標本按照Trizol法提取其中的總RNA,經(jīng)紫外分光光度計檢測RNA濃度和純度,瓊脂糖凝膠電泳鑒定RNA的完整性,對mi RNA進行熒光標記,制成雜交液與mi RNA芯片雜交、洗片,對mi RNA芯片進行掃描及數(shù)據(jù)分析,獲得艾滋病相關性彌漫大B細胞淋巴瘤的mi RNA表達譜。2、AIDS-DLBCL中差異表達mi RNA的靶基因預測:應用三種生物信息學軟件(Mi Randa、mi RBase、Target Scan)進行差異表達mi RNA的靶基因預測,找出mi RNA可能的作用靶點,并進一步利用Gene Ontology(GO)和Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG)數(shù)據(jù)庫分析其靶基因的生物學功能。結果：一、AIDS-DLBCL mi RNA表達譜的建立:1、從6例AIDS-DLBCL、4例non-AIDS-DLBCL組織中提取的總RNA的濃度、純度經(jīng)檢測均符合要求,總RNA的A260/280值在1.8-2.1之間,A260/230均大于1.8。瓊脂糖凝膠電泳結果顯示樣本28S、18S r RNA兩條帶清晰,未見明顯DNA和蛋白質污染。2、各芯片樣本雜交信號相關性散點圖顯示AIDS-DLBCL和non-AIDS-DLBCL兩組組內(nèi)樣品雜交信號相關性較高,去除誤差影響,體現(xiàn)了組內(nèi)樣本之間生物學性質相似;由于組織中少數(shù)mi RNA的表達發(fā)生改變,使得兩種雜交信號偏移,實驗組和對照組樣本間相關系數(shù)約為0.98,符合標準。3、AIDS-DLBCL與non-AIDS-DLBCL中存在差異表達的mi RNA。AIDS-DLBCL中表達水平升高2倍以上的mi RNA有64個,表達水平下降2倍以上的mi RNA有44個;其中通過t檢驗上調(diào)的mi RNA有6個,下調(diào)的mi RNA有17個。二、艾滋病相關性彌漫性大B細胞淋巴瘤差異表達mi RNA靶基因預測通過Mi Randa、mi RBase Targets、Target Scan 3種靶點預測軟件對上述23個mi RNA進行靶基因預測。為了減少假陽性率,我們只挑選至少出現(xiàn)在2種軟件中的交集基因作為mi RNA可能的靶基因。其中4個基因被預測與AIDS-DLBCL的發(fā)生發(fā)展有關,分別是上調(diào)mi R-185-3p的靶基因ZAP70、TNFRSF13C、IGGL1和上調(diào)mi R-744-5p的靶基因CD79A。這些結果也提示我們mi R-185-3p和mi R-744-5p很可能參與調(diào)控HIV的感染和AIDS-DLBCL的進展過程,有望成為AIDS-DLBCL的分子標志物。結論:本研究篩選得到多個AIDS-DLBCL中具有特殊研究價值的mi RNA及其靶基因,推測mi R-185-3p和mi R-744-5p的上調(diào)將抑制靶基因ZAP70、TNFRSF13C、IGLL1、CD79A的表達,導致免疫缺陷,增強機體對HIV的易感性和AIDS-DLBCL的發(fā)生機率,為進一步研究差異表達的mi RNA在AIDS-DLBCL中的生物學功能及其靶基因的效應奠定了良好的基礎。
【關鍵詞】：艾滋病相關性彌漫性大 B 細胞淋巴瘤 微小RNA 靶基因
【學位授予單位】：大理學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R512.91;R733.1
【目錄】：

• 中英文縮略詞對照表4-5
• 中文摘要5-8
• Abstract8-11
• 前言11-13
• 材料與方法13-23
• 一、實驗材料13
• 二、主要試劑及儀器設備13-14
• 1、主要試劑13-14
• 2、儀器設備14
• 三、實驗方法14-23
• （一）腫瘤石蠟組織樣本的選擇14-15
• （二）石蠟組織樣本處理15
• （三）總RNA提取15-16
• （四）miRNA標記：16-17
• （五）miRNA芯片雜交：17-21
• （六）芯片洗滌：21-22
• （七）miRNA芯片掃描和分析：22-23
• 結果23-41
• 一、總RNA質檢結果和芯片雜交掃描圖23-27
• 1. 樣本質檢結果23
• 2. 芯片樣本雜交信號相關性掃描圖及散點圖23-27
• 二、miRNA基因表達譜芯片的總體情況27-29
• 三、靶基因預測29
• 四、miRNA靶基因功能的顯著性分析（GO-Analysis）29-34
• 五、靶基因參與的信號轉導通路分析（Pathway Analysis）34-37
• 六、mi RNA與靶基因的調(diào)控網(wǎng)絡（miRNA-Gene-Network）37-39
• 七、miRNA靶基因功能分析的網(wǎng)絡構建（miRNA-GO-Network）39-40
• 八、免疫缺陷相關靶基因預測40-41
• 討論41-46
• 一、AIDS-DLBCL的miRNA表達譜分析41-42
• 二、差異表達miRNA及其靶基因的相互關系42-46
• 結論46-47
• 參考文獻47-52
• 發(fā)表的文章52-53
• 文獻綜述一53-62
• 參考文獻58-62
• 文獻綜述二62-72
• 參考文獻68-72
• 致謝72

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 曹學武;陳正堂;;miRNA靶基因實驗驗證的研究進展[J];重慶醫(yī)學;2009年02期

2 肖耀軍;陳壯飛;鄭少斌;單正飛;;腎透明細胞癌基因表達譜的研究[J];廣東醫(yī)學;2011年07期

3 ;衛(wèi)生部發(fā)布我國第一部《艾滋病診療指南》[J];世界臨床藥物;2005年08期

4 王紅;劉兆遠;王宏林;;MicroRNA及其與腫瘤關系的研究[J];現(xiàn)代免疫學;2013年05期

5 夏海濱;李星;;miRNA在腫瘤發(fā)生、診斷及治療中的研究進展[J];陜西師范大學學報(自然科學版);2013年05期

6 呂鑫;付錦;;miRNA調(diào)節(jié)B淋巴細胞發(fā)育及功能并在免疫病中的作用[J];現(xiàn)代免疫學;2014年06期

7 朱鍵;楊躍煌;田新;;miRNA在腫瘤方面的研究進展[J];現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生;2013年15期

8 許文劍;蘇秀蘭;劉明;;miRNA與腫瘤關系的研究進展[J];醫(yī)學綜述;2013年17期

9 俞心念;陳寶安;;MicroRNA在彌漫大B細胞淋巴瘤診斷預后方面的研究進展[J];中國實驗血液學雜志;2013年05期

10 耿凌云;王欣;;MicroRNA在慢性淋巴細胞白血病中的研究進展[J];中國實驗血液學雜志;2014年01期

  本文關鍵詞：艾滋病相關性彌漫性大B細胞淋巴瘤組織中miRNA表達譜的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：268904