本文關(guān)鍵詞：基于流式細(xì)胞術(shù)診斷結(jié)核感染的方法建立與優(yōu)化，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：我國(guó)是全球結(jié)核病流行嚴(yán)重的國(guó)家之一,在結(jié)核病的預(yù)防控制中,我國(guó)面臨的最大難題之一就是如何快速準(zhǔn)確地對(duì)早期結(jié)核感染者做出診斷。目前,培養(yǎng)出結(jié)核分枝桿菌是診斷結(jié)核的金標(biāo)準(zhǔn),但培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng),不利于早期診斷和治療。傳統(tǒng)的免疫學(xué)診斷方法結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)(TST)則存在著敏感性低、特異性差的缺點(diǎn),檢出結(jié)果可信度不高。所以本研究計(jì)劃通過(guò)檢測(cè)結(jié)核病組、未感染結(jié)核組的結(jié)核分枝桿菌抗原特異性T細(xì)胞比例,建立基于流式胞內(nèi)細(xì)胞因子檢測(cè)的結(jié)核感染診斷方法,同時(shí)將流式檢測(cè)結(jié)果與T-SPOT結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析,進(jìn)一步確認(rèn)流式胞內(nèi)細(xì)胞因子檢測(cè)結(jié)核特異性T細(xì)胞在結(jié)核感染診斷方面的應(yīng)用價(jià)值；此外,將針對(duì)PD-1和SLAM的單克隆抗體與結(jié)核特異性抗原ESAT-6/CFP-10共刺激,以期望提高結(jié)核桿菌抗原T細(xì)胞的功能,使得流式檢測(cè)法能夠更加靈敏、準(zhǔn)確；在確立該方法的建立后,通過(guò)流式胞內(nèi)細(xì)胞因子檢測(cè),對(duì)重組的結(jié)核分枝桿菌ESAT-6/CFP-10變態(tài)反應(yīng)原用于結(jié)核病臨床輔助診斷試驗(yàn)前后病人細(xì)胞因子的分泌情況做一個(gè)總體評(píng)價(jià),從而為結(jié)核的臨床研究提供幫助。1.流式細(xì)胞術(shù)診斷結(jié)核感染的價(jià)值研究連續(xù)收集2014年7月～2015年3月上海市公共衛(wèi)生臨床中心成人確診結(jié)核病人71例,未感染結(jié)核對(duì)照20例。結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)、胞內(nèi)細(xì)胞因子染色,對(duì)結(jié)核特異性抗原ESAT-6/CFP-10刺激后的特異性效應(yīng)T細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè),建立流式胞內(nèi)細(xì)胞因子檢測(cè)診斷結(jié)核感染的方法,所有的受試者同時(shí)接受T-SPOT檢測(cè)。研究結(jié)果顯示基于流式檢測(cè)ESAT-6/CFP-10特異性CD4+T細(xì)胞能很好地區(qū)分結(jié)核病人與未感染結(jié)核者,并且在診斷方面敏感性(83%)要高于T-SPOT檢測(cè)(74.6%),由于結(jié)核特異性抗原的使用,排除了環(huán)境因素及BCG的影響,特異性得到很好的保障,研究也顯示特異性達(dá)到100%。隨后的ROC曲線評(píng)價(jià)中,AUC的值為0.868,表明流式檢測(cè)法對(duì)于結(jié)核感染有著很好的診斷價(jià)值。結(jié)合上述結(jié)果,該方法可作為結(jié)核病診斷的有效手段。2.流式細(xì)胞術(shù)診斷結(jié)核感染的優(yōu)化共刺激與共抑制分子的協(xié)同合作在T細(xì)胞免疫應(yīng)答中有著重要的作用,醫(yī)學(xué)上通過(guò)共刺激分子或抑制受體活性能達(dá)到提高療效的目的。本研究希望在肯定流式細(xì)胞術(shù)在檢測(cè)結(jié)核感染實(shí)用價(jià)值的基礎(chǔ)上,加入針對(duì)PD-1、SLAM的抗體協(xié)同結(jié)核特異性抗原共刺激,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組特異性T淋巴細(xì)胞的比例,并與加抗體前進(jìn)行比較,以期探討通過(guò)該方法上調(diào)各細(xì)胞因子的分泌水平來(lái)提高流式診斷靈敏度的可行性。結(jié)果顯示,在受試的26名結(jié)核病人中,有8名無(wú)論是在CD28和CD49d共刺激組,還是aPD-1和aSLAM共刺激組,結(jié)核特異性T細(xì)胞的比例都表現(xiàn)出明顯的增高趨勢(shì),并且沒(méi)有對(duì)陰性對(duì)照組的背景值造成干擾,對(duì)于其他的結(jié)核病人檢測(cè)下來(lái)并沒(méi)有明顯的趨勢(shì)。對(duì)此結(jié)果,初步認(rèn)為抑制PD-1信號(hào)途徑以及SLAM共刺激對(duì)提高結(jié)核病人的T細(xì)胞功能有一定的幫助,但要揭示結(jié)核特異性抗原ESAT-6/CFP-10聯(lián)合aPD-1和aSLAM共刺激能提高流式胞內(nèi)細(xì)胞因子檢測(cè)技術(shù)的靈敏度還需要加大樣本量。3.重組結(jié)核分枝桿菌ESAT-6/CFP-10變態(tài)反應(yīng)原臨床試驗(yàn)前后的評(píng)價(jià)本研究運(yùn)用流式胞內(nèi)細(xì)胞因子檢測(cè)技術(shù)對(duì)臨床上接受ESAT-6/CFP-10變態(tài)反應(yīng)原輔助診斷試驗(yàn)的病人,做一個(gè)皮試前后特異性T細(xì)胞比值變化的描述。結(jié)果顯示,受試者注射變態(tài)反應(yīng)原前后結(jié)核特異性的IFN-γ+/IL-2+ CD4+T細(xì)胞比例均有一個(gè)下降的趨勢(shì),而TNF-α+CD4+T未呈現(xiàn)出變化。IFN-γ+/INF-α+/IL-2+ CD8+T細(xì)胞在接受變態(tài)抗原注射后均顯示出下降的趨勢(shì),但變化統(tǒng)計(jì)學(xué)分析并不顯著。隨后對(duì)結(jié)核特異性IFN-γ、TNF-α、IL-2多功能T細(xì)胞進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)注射變態(tài)反應(yīng)原后病人的IFN-γ+TNF-α+IL-2+CD4+T細(xì)胞比例有顯著下降趨勢(shì),而IFN-γ-TNF-α+IL-2-CD4+T細(xì)胞在ESAT-6/CFP-10及PPD刺激后有上升趨勢(shì),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。此外IFN-γ+TNF-α+IL-2CD84+T跟IFN-γ+TNF-α-IL-2-CD8+T細(xì)胞則有上升的趨勢(shì),其中IFN-γ+TNF-α-IL-2-CD8+T細(xì)胞尤其顯著。這部分?jǐn)?shù)據(jù)對(duì)臨床試驗(yàn)前后受試者的細(xì)胞免疫狀況做了定量描述,為臨床提供輔助參考。
【關(guān)鍵詞】：流式細(xì)胞術(shù) 胞內(nèi)細(xì)胞因子 結(jié)核病 診斷
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R52
【目錄】：

• 中文摘要2-4
• Abstract4-9
• 符號(hào)說(shuō)明9-11
• 綜述 基于流式技術(shù)診斷結(jié)核感染的研究進(jìn)展11-17
• 1 FCM檢測(cè)胞內(nèi)細(xì)胞因子技術(shù)12-13
• 2 FCM檢測(cè)胞內(nèi)細(xì)胞因子技術(shù)對(duì)結(jié)核感染的診斷研究13-14
• 3 FCM檢測(cè)胞內(nèi)細(xì)胞因子技術(shù)的應(yīng)用評(píng)估14
• 4 FCM區(qū)分活動(dòng)性結(jié)核病和潛伏感染的探索14-15
• 參考文獻(xiàn)15-17
• 第一章 流式細(xì)胞術(shù)診斷結(jié)核感染的價(jià)值研究17-33
• 1 材料與方法17-22
• 1.1 材料17-19
• 1.2 方法19-22
• 2 結(jié)果22-28
• 2.1 各組結(jié)核特異性T淋巴細(xì)胞的流式分析22-23
• 2.2 各組結(jié)核特異性IFN-γ~+/INF-α~+/IL-2~+CD4~+T細(xì)胞比例分析及比較23-24
• 2.3 ESAT-6/CFP-10特異性IFN-γ~+CD4~+T細(xì)胞ROC曲線分析24-25
• 2.4 T-SPOT檢測(cè)結(jié)果25-26
• 2.5 流式檢測(cè)法和T-SPOT法的陽(yáng)性率比較26
• 2.6 流式檢測(cè)法和T-SPOT法的一致性比較26-27
• 2.7 結(jié)核特異性抗原和PPD的比較27-28
• 3 討論28-30
• 參考文獻(xiàn)30-33
• 第二章 流式細(xì)胞術(shù)診斷結(jié)核感染的優(yōu)化33-40
• 1 材料與方法34-35
• 1.1 材料34
• 1.2 主要方法34-35
• 2 結(jié)果35-37
• 2.1 aPD-1和aSLAM抗體共刺激能夠提高部分結(jié)核病人特異性IFN-γ~+/IL-2~+/TNF-α~+CD4~+T細(xì)胞水平35-37
• 3 討論37-38
• 參考文獻(xiàn)38-40
• 第三章 重組結(jié)核分枝桿菌ESAT-6/CFP-10變態(tài)反應(yīng)原臨床試驗(yàn)前后的評(píng)價(jià)40-47
• 1 材料與方法41-42
• 1.1 材料41
• 1.2 方法41-42
• 2 結(jié)果42-44
• 2.1 結(jié)核病人注射變態(tài)反應(yīng)原前后結(jié)核特異性IFN-γ~+/TNF-α~+/IL-2~+T細(xì)胞比例42-43
• 2.2 皮試前后結(jié)核特異性IFN-γ、TNF-α、IL-2多功能T細(xì)胞分析43-44
• 3 討論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-47
• 致謝47-48

【相似文獻(xiàn)】

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