本文關(guān)鍵詞：基于流式細(xì)胞術(shù)診斷結(jié)核感染的方法建立與優(yōu)化，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：我國是全球結(jié)核病流行嚴(yán)重的國家之一,在結(jié)核病的預(yù)防控制中,我國面臨的最大難題之一就是如何快速準(zhǔn)確地對早期結(jié)核感染者做出診斷。目前,培養(yǎng)出結(jié)核分枝桿菌是診斷結(jié)核的金標(biāo)準(zhǔn),但培養(yǎng)時間長,不利于早期診斷和治療。傳統(tǒng)的免疫學(xué)診斷方法結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)(TST)則存在著敏感性低、特異性差的缺點(diǎn),檢出結(jié)果可信度不高。所以本研究計(jì)劃通過檢測結(jié)核病組、未感染結(jié)核組的結(jié)核分枝桿菌抗原特異性T細(xì)胞比例,建立基于流式胞內(nèi)細(xì)胞因子檢測的結(jié)核感染診斷方法,同時將流式檢測結(jié)果與T-SPOT結(jié)果進(jìn)行對比分析,進(jìn)一步確認(rèn)流式胞內(nèi)細(xì)胞因子檢測結(jié)核特異性T細(xì)胞在結(jié)核感染診斷方面的應(yīng)用價值；此外,將針對PD-1和SLAM的單克隆抗體與結(jié)核特異性抗原ESAT-6/CFP-10共刺激,以期望提高結(jié)核桿菌抗原T細(xì)胞的功能,使得流式檢測法能夠更加靈敏、準(zhǔn)確；在確立該方法的建立后,通過流式胞內(nèi)細(xì)胞因子檢測,對重組的結(jié)核分枝桿菌ESAT-6/CFP-10變態(tài)反應(yīng)原用于結(jié)核病臨床輔助診斷試驗(yàn)前后病人細(xì)胞因子的分泌情況做一個總體評價,從而為結(jié)核的臨床研究提供幫助。1.流式細(xì)胞術(shù)診斷結(jié)核感染的價值研究連續(xù)收集2014年7月～2015年3月上海市公共衛(wèi)生臨床中心成人確診結(jié)核病人71例,未感染結(jié)核對照20例。結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)、胞內(nèi)細(xì)胞因子染色,對結(jié)核特異性抗原ESAT-6/CFP-10刺激后的特異性效應(yīng)T細(xì)胞進(jìn)行檢測,建立流式胞內(nèi)細(xì)胞因子檢測診斷結(jié)核感染的方法,所有的受試者同時接受T-SPOT檢測。研究結(jié)果顯示基于流式檢測ESAT-6/CFP-10特異性CD4+T細(xì)胞能很好地區(qū)分結(jié)核病人與未感染結(jié)核者,并且在診斷方面敏感性(83%)要高于T-SPOT檢測(74.6%),由于結(jié)核特異性抗原的使用,排除了環(huán)境因素及BCG的影響,特異性得到很好的保障,研究也顯示特異性達(dá)到100%。隨后的ROC曲線評價中,AUC的值為0.868,表明流式檢測法對于結(jié)核感染有著很好的診斷價值。結(jié)合上述結(jié)果,該方法可作為結(jié)核病診斷的有效手段。2.流式細(xì)胞術(shù)診斷結(jié)核感染的優(yōu)化共刺激與共抑制分子的協(xié)同合作在T細(xì)胞免疫應(yīng)答中有著重要的作用,醫(yī)學(xué)上通過共刺激分子或抑制受體活性能達(dá)到提高療效的目的。本研究希望在肯定流式細(xì)胞術(shù)在檢測結(jié)核感染實(shí)用價值的基礎(chǔ)上,加入針對PD-1、SLAM的抗體協(xié)同結(jié)核特異性抗原共刺激,用流式細(xì)胞儀檢測各組特異性T淋巴細(xì)胞的比例,并與加抗體前進(jìn)行比較,以期探討通過該方法上調(diào)各細(xì)胞因子的分泌水平來提高流式診斷靈敏度的可行性。結(jié)果顯示,在受試的26名結(jié)核病人中,有8名無論是在CD28和CD49d共刺激組,還是aPD-1和aSLAM共刺激組,結(jié)核特異性T細(xì)胞的比例都表現(xiàn)出明顯的增高趨勢,并且沒有對陰性對照組的背景值造成干擾,對于其他的結(jié)核病人檢測下來并沒有明顯的趨勢。對此結(jié)果,初步認(rèn)為抑制PD-1信號途徑以及SLAM共刺激對提高結(jié)核病人的T細(xì)胞功能有一定的幫助,但要揭示結(jié)核特異性抗原ESAT-6/CFP-10聯(lián)合aPD-1和aSLAM共刺激能提高流式胞內(nèi)細(xì)胞因子檢測技術(shù)的靈敏度還需要加大樣本量。3.重組結(jié)核分枝桿菌ESAT-6/CFP-10變態(tài)反應(yīng)原臨床試驗(yàn)前后的評價本研究運(yùn)用流式胞內(nèi)細(xì)胞因子檢測技術(shù)對臨床上接受ESAT-6/CFP-10變態(tài)反應(yīng)原輔助診斷試驗(yàn)的病人,做一個皮試前后特異性T細(xì)胞比值變化的描述。結(jié)果顯示,受試者注射變態(tài)反應(yīng)原前后結(jié)核特異性的IFN-γ+/IL-2+ CD4+T細(xì)胞比例均有一個下降的趨勢,而TNF-α+CD4+T未呈現(xiàn)出變化。IFN-γ+/INF-α+/IL-2+ CD8+T細(xì)胞在接受變態(tài)抗原注射后均顯示出下降的趨勢,但變化統(tǒng)計(jì)學(xué)分析并不顯著。隨后對結(jié)核特異性IFN-γ、TNF-α、IL-2多功能T細(xì)胞進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)注射變態(tài)反應(yīng)原后病人的IFN-γ+TNF-α+IL-2+CD4+T細(xì)胞比例有顯著下降趨勢,而IFN-γ-TNF-α+IL-2-CD4+T細(xì)胞在ESAT-6/CFP-10及PPD刺激后有上升趨勢,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。此外IFN-γ+TNF-α+IL-2CD84+T跟IFN-γ+TNF-α-IL-2-CD8+T細(xì)胞則有上升的趨勢,其中IFN-γ+TNF-α-IL-2-CD8+T細(xì)胞尤其顯著。這部分?jǐn)?shù)據(jù)對臨床試驗(yàn)前后受試者的細(xì)胞免疫狀況做了定量描述,為臨床提供輔助參考。
【關(guān)鍵詞】：流式細(xì)胞術(shù) 胞內(nèi)細(xì)胞因子 結(jié)核病 診斷
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R52
【目錄】：

• 中文摘要2-4
• Abstract4-9
• 符號說明9-11
• 綜述 基于流式技術(shù)診斷結(jié)核感染的研究進(jìn)展11-17
• 1 FCM檢測胞內(nèi)細(xì)胞因子技術(shù)12-13
• 2 FCM檢測胞內(nèi)細(xì)胞因子技術(shù)對結(jié)核感染的診斷研究13-14
• 3 FCM檢測胞內(nèi)細(xì)胞因子技術(shù)的應(yīng)用評估14
• 4 FCM區(qū)分活動性結(jié)核病和潛伏感染的探索14-15
• 參考文獻(xiàn)15-17
• 第一章 流式細(xì)胞術(shù)診斷結(jié)核感染的價值研究17-33
• 1 材料與方法17-22
• 1.1 材料17-19
• 1.2 方法19-22
• 2 結(jié)果22-28
• 2.1 各組結(jié)核特異性T淋巴細(xì)胞的流式分析22-23
• 2.2 各組結(jié)核特異性IFN-γ~+/INF-α~+/IL-2~+CD4~+T細(xì)胞比例分析及比較23-24
• 2.3 ESAT-6/CFP-10特異性IFN-γ~+CD4~+T細(xì)胞ROC曲線分析24-25
• 2.4 T-SPOT檢測結(jié)果25-26
• 2.5 流式檢測法和T-SPOT法的陽性率比較26
• 2.6 流式檢測法和T-SPOT法的一致性比較26-27
• 2.7 結(jié)核特異性抗原和PPD的比較27-28
• 3 討論28-30
• 參考文獻(xiàn)30-33
• 第二章 流式細(xì)胞術(shù)診斷結(jié)核感染的優(yōu)化33-40
• 1 材料與方法34-35
• 1.1 材料34
• 1.2 主要方法34-35
• 2 結(jié)果35-37
• 2.1 aPD-1和aSLAM抗體共刺激能夠提高部分結(jié)核病人特異性IFN-γ~+/IL-2~+/TNF-α~+CD4~+T細(xì)胞水平35-37
• 3 討論37-38
• 參考文獻(xiàn)38-40
• 第三章 重組結(jié)核分枝桿菌ESAT-6/CFP-10變態(tài)反應(yīng)原臨床試驗(yàn)前后的評價40-47
• 1 材料與方法41-42
• 1.1 材料41
• 1.2 方法41-42
• 2 結(jié)果42-44
• 2.1 結(jié)核病人注射變態(tài)反應(yīng)原前后結(jié)核特異性IFN-γ~+/TNF-α~+/IL-2~+T細(xì)胞比例42-43
• 2.2 皮試前后結(jié)核特異性IFN-γ、TNF-α、IL-2多功能T細(xì)胞分析43-44
• 3 討論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-47
• 致謝47-48

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉寶勤;利福平在非結(jié)核感染治療中的應(yīng)用體會[J];中國醫(yī)院藥學(xué)雜志;2002年09期

2 范永琛;小兒隱性結(jié)核感染[J];臨床兒科雜志;2003年08期

3 劉泉波,朱朝敏;先天性結(jié)核1例[J];重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2004年02期

4 胡旭;楊永林;;右手軟組織結(jié)核1例分析[J];中國誤診學(xué)雜志;2007年13期

5 宋燕茹;;結(jié)核流行廣泛 控制從我做起[J];中國醫(yī)藥指南;2007年03期

6 T.Mori;N.Harada;K.Higuchi;Y.Sekiya;K.Uchimura;T.Shimao;王博;王雪靜;;結(jié)核感染若干年后特異性γ-干擾素應(yīng)答減弱[J];國際結(jié)核病與肺部疾病雜志(中文版);2008年01期

7 Shiv Kumar Yadav;彭萬勝;羅健;劉恩梅;符州;;先天性結(jié)核1例[J];兒科藥學(xué)雜志;2009年04期

8 周穎;肖和平;;醫(yī)護(hù)人員院內(nèi)結(jié)核感染和發(fā)病[J];中國防癆雜志;2009年10期

9 舒勇;孫丹寧;李靖;王勤;蒙明森;顏加強(qiáng);康元上;孫道冬;劉元豐;;血液透析患者結(jié)核感染診治六例[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2012年03期

10 孫天國;;誤診為結(jié)核感染5例臨床分析[J];實(shí)用兒科雜志;1990年05期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 何廣學(xué);;結(jié)核感染預(yù)防控制[A];結(jié)核病和呼吸疾病診治進(jìn)展及治療中肝損害專題研討會資料匯編[C];2013年

2 孫燕;;河南地區(qū)獲得性免疫缺陷綜合癥合并結(jié)核感染的臨床研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第五次全國艾滋病、病毒性丙型肝炎暨全國熱帶病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

3 劉麗英;;9796名鐵路中小學(xué)生肺結(jié)核感染狀況初步調(diào)查[A];全國鐵路第五屆疾病控制學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2004年

4 張翠英;朱琳;周曉青;薛建利;李偉霞;張敬娟;;1978—1999年新兵結(jié)核感染率調(diào)查(摘要)[A];中華醫(yī)學(xué)會第六屆全國結(jié)核病學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2000年

5 徐飚;胡屹;趙琦;;結(jié)核潛隱感染研究進(jìn)展和應(yīng)用前景[A];2011年中國防癆協(xié)會全國學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

6 熊瑜;;噬菌體生物擴(kuò)增法檢測結(jié)核桿菌在糖尿病合并結(jié)核感染快速診斷中的應(yīng)用[A];中華醫(yī)學(xué)會結(jié)核病學(xué)分會2010年學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2010年

7 孫照平;劉輝;劉榮;黃秀華;;潛在結(jié)核感染者的藥物預(yù)防效果評價[A];2007年中國防癆協(xié)會全國學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

8 王聰華;朱平;馬麗;李桂葉;王冬雪;章璐;林冰;王麗英;王國春;;對糖皮質(zhì)激素所致醫(yī)源性結(jié)核感染的預(yù)防性治療[A];第17次全國風(fēng)濕病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2012年

9 何禮賢;;醫(yī)院內(nèi)結(jié)核感染(病)及其控制[A];中華醫(yī)學(xué)會第六屆全國結(jié)核病學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2000年

10 汪雯;張宏偉;姜太一;吳昊;;1020例艾滋病合并結(jié)核感染情況臨床分析[A];中華醫(yī)學(xué)會第五次全國艾滋病、病毒性丙型肝炎暨全國熱帶病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 桑雪玫;防治結(jié)核 堅(jiān)持不懈[N];中國老年報(bào);2006年

2 王文虎;結(jié)核管理在美國[N];健康報(bào);2005年

3 記者 韓繼旺;我區(qū)鄉(xiāng)村醫(yī)生首次被納入中美結(jié)核感染跟蹤調(diào)查項(xiàng)目[N];內(nèi)蒙古日報(bào)(漢);2012年

4 王心怡;結(jié)核“檢”介[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2010年

5 省兒童醫(yī)院副主任醫(yī)師 劉靜 省結(jié)核病控制項(xiàng)目辦公室主任醫(yī)師 楊華林 山東平陰縣衛(wèi)生局副主任醫(yī)師 朱本浩 華林 長沙市傳染病醫(yī)院主任醫(yī)師 肖剛 河北省職工醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 劉涓 省結(jié)核病防治所提供;控制結(jié)核 人人有責(zé)[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2009年

6 記者 陳青;結(jié)核感染防治新添潛在靶標(biāo)[N];文匯報(bào);2011年

7 中山市人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科主治醫(yī)師 黃錫坤　本報(bào)記者 魏平 錄音整理;不典型結(jié)核的應(yīng)對[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2011年

8 記者 石小宏;我省結(jié)核發(fā)病率連續(xù)7年下降[N];四川日報(bào);2014年

9 本報(bào)特約撰稿人 郭文;極端耐藥性結(jié)核牽動全球神經(jīng)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2007年

10 北京胸科醫(yī)院 傅瑜　鄭素華;結(jié)核病菌襲向城市[N];北京科技報(bào);2009年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 陳嘉臻;結(jié)核分枝桿菌特異的RD2/RD11蛋白應(yīng)用于結(jié)核免疫診斷的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

2 趙晉芳;山西省HIV/AIDS結(jié)核感染監(jiān)測資料預(yù)測方法研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2009年

3 宋其生;IGRA在結(jié)核診斷與治療中的應(yīng)用研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2012年

4 謝希;結(jié)核等感染風(fēng)險(xiǎn)在抗腫瘤壞死因子-α治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中的meta分析及監(jiān)測[D];中南大學(xué);2012年

5 張艷寧;結(jié)核性腎損傷的早期診斷方法及免疫發(fā)病機(jī)制探討[D];中國醫(yī)科大學(xué);2005年

6 路蟬伊;結(jié)核不同感染狀態(tài)下宿主對結(jié)核特異性抗原獲得性免疫應(yīng)答的差異及相關(guān)分子標(biāo)識篩選[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 吳凡;基于流式細(xì)胞術(shù)診斷結(jié)核感染的方法建立與優(yōu)化[D];揚(yáng)州大學(xué);2015年

2 張迎梅;不典型胸部結(jié)核10例報(bào)告并文獻(xiàn)復(fù)習(xí)[D];山東大學(xué);2013年

3 歐江;γ-干擾素釋放試驗(yàn)在肝病合并結(jié)核感染患者中的診斷價值[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

4 李紅梅;某部新兵新學(xué)員肺結(jié)核感染狀況流行病學(xué)調(diào)查研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2006年

5 商亞;PRDM1-ATG5與中國漢族人群結(jié)核發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)性的關(guān)聯(lián)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2014年

6 李欣欣;某胸科醫(yī)院醫(yī)務(wù)人員潛伏結(jié)核感染篩查及相關(guān)危險(xiǎn)因素研究[D];山東大學(xué);2012年

7 馬慧;上海地區(qū)結(jié)核病患者接觸者感染率和結(jié)核易感性研究[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

8 丁皓;新型抗結(jié)核先導(dǎo)化合物及其藥靶的研究與發(fā)現(xiàn)[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

9 徐仰玲;新疆喀什地區(qū)肺結(jié)核耐藥狀況及影響因素分析[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2011年

10 孟繁楊;結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)對肺結(jié)核的臨床診斷價值分析[D];吉林大學(xué);2012年

  本文關(guān)鍵詞：基于流式細(xì)胞術(shù)診斷結(jié)核感染的方法建立與優(yōu)化，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：267691