【摘要】：目的:初步探討大鼠結核性創(chuàng)面液化壞死高峰期中M1/M2型巨噬細胞浸潤情況及IFN-γ、IL-10細胞因子和巨噬細胞極化之間的關系。方法:1、35只雌性8周齡SD大鼠,選取結核菌純蛋白衍化物(PPD)試驗無反應或弱反應的30只大鼠,采取MP弗氏完全佐劑致敏;6周后采用隨機數(shù)字表法分為實驗組和陰性對照組,每組各15只;實驗組背部皮內注射牛分枝桿菌減毒株(BCG)(5×10~7CFU/ml、0.2ml/只),陰性對照組背部皮內注射無菌的PBS(0.2ml/只)。2、大體觀察創(chuàng)面演變情況;于注射后2、6、11d,行皮膚組織石蠟包埋切片(每個時相點每組取5只大鼠),蘇木精-伊紅染色觀察各組創(chuàng)面愈合的情況及愈合過程中炎癥細胞的浸潤變化;病原微生物學檢測鑒定菌株。3、液化壞死高峰期(注射后6d),行免疫組織化學染色,CD68標記巨噬細胞,其亞型M1型巨噬細胞iNOS標記、M2型巨噬細胞CD206標記,通過免疫組織化學方法分析M1型和M2型巨噬細胞在實驗組及陰性對照組中的分布情況。4、液化壞死高峰期(注射后6d),分別從陰性對照組和實驗組皮膚組織提取總RNA,采用RT-PCR分析促炎癥細胞因子IFN-γmRNA和抗炎癥細胞因子IL-10mRNA在局部組織中的表達情況。5、數(shù)據(jù)比較采用獨立樣本t檢驗。結果:1、經致敏大鼠,皮內注射BCG后創(chuàng)面觀察到明顯的紅腫、液化、壞死和破潰等改變;蘇木精-伊紅染色顯示液化壞死漸進增強后進而有效愈合的病理過程;抗酸染色結果:陽性。2、免疫組織化學顯示:實驗組創(chuàng)面組織液化壞死高峰期中CD68巨噬細胞、iNOS M1型巨噬細胞、CD206 M2型巨噬細胞數(shù)量分別為(84.8±3.4)、(60.8±2.8)、(13.2±2.2)個/HP,均顯著高于陰性對照組(1.4±0.5)、(0.4±0.5)、(0.6±0.5)個/HP,差異均有統(tǒng)計學意義(t=93.2、95.5、28.2,Ρ值均小于0.05);創(chuàng)面組織中iNOS M1型巨噬細胞[(60.8±2.78)個/HP]顯著高于CD206 M2型巨噬細胞[(13.2±2.18)個/HP],差異有統(tǒng)計學意義(t=27.6,Ρ0.05)。3、RT-PCR顯示:液化壞死高峰期局部組織微環(huán)境中,實驗組促炎癥細胞因子IFN-γmRNA的表達較陰性對照組明顯上調(t=23.9,Ρ0.05);抗炎癥細胞因子IL-10mRNA表達較陰性對照組明顯下調(t=16.2,Ρ0.05)。結論:1、經過致敏的大鼠注射高濃度BCG可有效誘導液化和壞死,可成功構建大鼠結核性創(chuàng)面模型;2、大鼠結核性創(chuàng)面液化壞死高峰期,創(chuàng)面組織局部微環(huán)境中,促炎癥細胞因子IFN-γ占主導優(yōu)勢時,以M1型巨噬細胞表達為主,有利于發(fā)揮巨噬細胞殺滅結核分枝桿菌的作用。
【圖文】：

山西醫(yī)科大學碩士學位論文2 結 果2.1 大鼠皮膚創(chuàng)面大體標本觀察致敏階段和實驗組二次攻毒階段大鼠背部大體標本觀察均顯示實驗組和陰性對照組二次攻毒階段形成的 3 個典型階段：紅腫期、液化壞死高峰期、愈合期；致敏期MP 弗氏完全佐劑成分復雜，僅含有結核分枝桿菌細胞壁抗原；二次攻毒階段為含有BCG 活菌 PBS 溶液。通過比較創(chuàng)面形成的不同時期，二次攻毒階段創(chuàng)面的炎癥反應較致敏階段輕，，見圖 2-1、2-2。實驗組創(chuàng)面紅腫期、液化壞死高峰期、愈合期所需時間都少于致敏階段，差異均有統(tǒng)計學意義（t=6.0、4.2、8.5，Ρ值均小于 0.05），見表2-1。致敏后陰性對照組注射無菌 PBS 無創(chuàng)面形成。

織從表皮液化壞死破潰流出，創(chuàng)面大小達到高峰；C：注射后 11 d，創(chuàng)面基本愈合，紅腫不明顯BCG：牛分枝桿菌減毒株）表 2-1 大鼠致敏階段、實驗組二次攻毒階段創(chuàng)面不同時期演變時間比較（d，x ±s）時相點 致敏階段a實驗組二次攻毒階段bt 值 Ρ值紅腫期 3.4±0.5 1.8±0.8 6.0 ＜0.05液化壞死高峰期 6.8±0.4 5.2±0.8 4.2 ＜0.05愈合期 16.6±1.0 12±1.6 8.5 ＜0.05注：a：致敏階段大鼠 30 只；b：實驗組二次攻毒階段大鼠 15 只2.2 大鼠創(chuàng)面組織病理學分析光學顯微鏡觀察注射高濃度 BCG 后結核性創(chuàng)面演變情況，相對于陰性對照組，實驗組顯示了創(chuàng)面紅腫期、液化壞死高峰期和愈合期病理改變過程，見圖 2-3、2-4
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R52

【參考文獻】

相關期刊論文 前3條

1 程琳;王瑞晨;賈赤宇;;結核性創(chuàng)面三維重建方法的臨床探索[J];中華燒傷雜志;2015年06期

2 賈赤宇;;結核性創(chuàng)面——一個被忽視且值得重視的臨床問題[J];中華損傷與修復雜志(電子版);2014年04期

3 王明珠;史大中;楊愛軍;焦志剛;祝秉東;張穎;;分枝桿菌所致家兔皮膚液化病理模型研究[J];微生物與感染;2008年04期

本文編號：2649970