【摘要】：目的:研究白念珠菌線粒體缺陷株感染小鼠腸道的毒力和免疫差異及對(duì)腸道正常菌群微生態(tài)的影響。方法:小鼠隨機(jī)分成5組(每組10只):A組、B組、C組、D組及E組。灌胃前統(tǒng)一喂養(yǎng)抗生素(四環(huán)素、鏈霉素、慶大霉素)溶液3天,A組給予白念珠菌標(biāo)準(zhǔn)菌株5314菌懸液灌胃,B組予等量白念珠菌缺陷菌株goa31菌懸液灌胃,C組予缺陷菌株nuo1菌懸液灌胃、D組予缺陷菌株nuo2菌懸液灌胃、E組予缺陷菌株ndh51菌懸液灌胃,構(gòu)建小鼠腸道白念珠菌感染模型。灌胃期間持續(xù)予抗生素水喂養(yǎng),灌胃后第1天、3天、6天、9天、12天、15天、18天、21天后分別取糞便進(jìn)行涂板計(jì)數(shù)。在灌胃后第1天,第3天,第7天,第15天頸椎脫臼處死小鼠,留取結(jié)腸組織,通過(guò)組織病理切片及實(shí)時(shí)熒光定量PCR比較各組腸道的組織病理學(xué)改變和炎癥。腸道微生態(tài)實(shí)驗(yàn)分組及灌胃同上,喂養(yǎng)無(wú)菌水,灌胃后第1天及每隔兩天收集小鼠糞便,提取RNA做16srRNA基因高通量測(cè)序,檢測(cè)白念珠菌標(biāo)準(zhǔn)株及線粒體缺陷株對(duì)腸道菌群微生態(tài)的影響。結(jié)果:(1)糞便菌落計(jì)數(shù):A組(5314)D組(nuo2)C組(nuo1)B組(goa31)E組(ndh51),野生株峰值與四組缺陷株菌落計(jì)數(shù)峰值出現(xiàn)在第6天,與野生菌株組峰值相差10^2以上(P0.05),菌落計(jì)數(shù)隨著時(shí)間增加而逐漸減少,其中B組與E組第9天后糞便培養(yǎng)未見白念珠菌生長(zhǎng)。(2)實(shí)時(shí)熒光定量PCR:和空白組(NC組)對(duì)比,A組小鼠腸粘膜炎癥因子如IL-17、IFN-y、IL-22和TNF在白念珠菌5314感染一周后都出現(xiàn)顯著性增加(P0.05),而在B、C、D、E四組缺陷菌中沒(méi)有顯著性變化。(3)組織病理:HE染色顯示,A組小鼠腸粘膜淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)顯著性增多、腸絨毛破壞,而其余四組缺陷菌株小鼠腸粘膜基本沒(méi)有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。PAS染色顯示,A組小鼠腸道粘膜層可見較多假菌絲、孢子,部分菌絲嵌入腸道上皮細(xì)胞內(nèi);而其余四組缺陷菌小鼠腸道粘膜未見假菌絲及孢子。(4)腸道微生態(tài)結(jié)果:小鼠結(jié)腸微生物豐度最大的菌群是擬桿菌門、厚壁菌門,與灌胃前對(duì)比,灌胃后第三天Shannon指數(shù)和Simpson指數(shù)增加明顯,有4個(gè)類菌群相對(duì)豐度在D3組小鼠結(jié)腸微生物菌群中顯著增加,分別是Alistipesspp.,Bacteroides_acidifaciens spp,Bacteroidaceae spp,Bacteroides spp.結(jié)論:1.本實(shí)驗(yàn)我們初步證實(shí),與野生株相比,四種缺陷株感染腸道能力明顯下降,且表現(xiàn)為nuo2nuo1ndh51goa31,提示在感染腸道過(guò)程中,白念珠菌四種缺陷株由于線粒體功能缺陷引起的菌絲形成能力、毒力及代謝的變化,從而導(dǎo)致感染小鼠腸道的能力明顯下降,且菌絲形成相對(duì)菌株結(jié)構(gòu)或代謝變化對(duì)菌株毒力及腸道免疫的影響更大。2.灌胃白念珠菌后,腸道菌群豐度升高,但引起腸道微生態(tài)的改變是暫時(shí)的,腸道菌群微生態(tài)平衡在灌胃結(jié)束兩周后恢復(fù)正常,且起重要作用的菌群可能是擬桿菌。
【圖文】：

■■逡逑圖２－１涂板菌落生長(zhǎng)圖逡逑圖２－１邋Ｆ：灌胃前；Ａ：Ａ組（灌胃白念５３１４）小鼠糞便培養(yǎng)平板；Ｃ：邋Ｂ組（灌胃白念ｇｏａ３１）小鼠糞便培養(yǎng)逡逑平板：Ｄ：Ｃ組（灌胃白念ｍｉ0ｌ＞小鼠糞便培養(yǎng)平板：Ｅ：邋Ｄ組（灌胃白念ｎｕ0２）小鼠糞便培養(yǎng)平板：Ｆ：邋Ｅ組（灌逡逑胃白念ｎｄｈ５１）小鼠糞便培養(yǎng)平板。逡逑２．６．２四種缺陷株與野生株糞便菌落計(jì)數(shù)差異逡逑裴便菌落計(jì)數(shù)示：Ａ邋組（５３１４）邋＞０組邋Ｃｎｕｏ２）邋＞（３組（ｎｕｏｌ）邋＞８組邋Ｃｇｏａ３１）邋＞Ｅ逡逑組（ｎｄｈ５１），，菌落計(jì)數(shù)用均值＋方差表示，野生株與四組缺陷株峰值出現(xiàn)在第６天，逡逑缺陷株與野生菌株組峰值相差１０Ａ２以上（Ｐ＜０．０５），菌落計(jì)數(shù)隨著時(shí)間增加而逐漸減逡逑少，其中Ｂ組與Ｅ組第９天后糞便培養(yǎng)未見白念珠菌生長(zhǎng)，詳見表格２－１。逡逑１４逡逑

圖２－２不同組別小鼠糞便菌量計(jì)數(shù)與時(shí)間變化折線圖逡逑２．６．３實(shí)時(shí)熒光定量ＰＣＲ檢測(cè)小鼠腸道粘膜炎癥因子變化情況逡逑五組小鼠腸粘膜炎癥因子在轉(zhuǎn)錄水平的變化如圖２－３所示。和空白組（ＮＣ組）對(duì)逡逑比，Ａ組小鼠腸粘膜炎癥因子如ＩＬ－１７（Ａ）、ＩＦＮ－Ｙ（Ｂ）、ＩＬ－２２邋（Ｃ）和ＴＮＦ邋（Ｄ）在逡逑白念珠菌５３１４感染一周后都出現(xiàn)顯著性增加（Ｐ＜０．０５），而在Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ四組缺陷逡逑菌中沒(méi)有顯著性變化，表明白念珠菌５３１４感染一周后引起了小鼠腸粘膜炎癥反應(yīng)，逡逑但灌胃四種缺陷菌株一周對(duì)小鼠腸粘膜免疫反應(yīng)無(wú)明顯影響。逡逑１５逡逑
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R519.3

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4 郝雨o

本文編號(hào)：2647672