【摘要】：目的分析慢性乙型肝炎(Chronic hepatitis B,CHB)患者血清鐵代謝相關(guān)指標(biāo)與炎癥程度的相關(guān)性及乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)對(duì)肝細(xì)胞鐵代謝造成的影響。方法分別檢測(cè)41例CHB患者和20例健康體檢者血清鐵代謝相關(guān)指標(biāo)、肝功生化指標(biāo),并分析CHB患者血清鐵代謝相關(guān)指標(biāo)與肝功能生化指標(biāo)的相關(guān)性。鐵代謝相關(guān)指標(biāo)包括血清鐵(Serum iron,SI)、血清鐵蛋白(Serum ferritin,SF)、轉(zhuǎn)鐵蛋白(Transferritin,TRF)、可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(Soluble transferrin receptor,s Tf R)、轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和度(Transferritin saturation,TS)、總鐵結(jié)合力(Total iron-binding capacity,TIBC)、不飽和鐵結(jié)合力(Unsaturated iron-binding capacity,UIBC)、鐵調(diào)素(Hepcidin,HEPC)。肝功生化指標(biāo)包括丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Alanine aminotransferase,ALT)、白蛋白(Albumin,ALB)。最后將表達(dá)HBV全基因組質(zhì)粒p SM2-HBV分別轉(zhuǎn)染至Hep G2細(xì)胞、Huh7細(xì)胞。然后運(yùn)用蛋白質(zhì)印跡法(Western blot,WB)、逆轉(zhuǎn)錄定量PCR(Reverse transcription and real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-q PCR)、細(xì)胞免疫熒光技術(shù),通過將HBV瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染肝細(xì)胞兩種方式,探討HBV轉(zhuǎn)染肝細(xì)胞后所造成的肝細(xì)胞鐵代謝紊亂情況。結(jié)果與健康對(duì)照組相比,CHB患者組SI、SF、TS均明顯升高,TRF,s Tf R,TIBC,UIBC,HEPC均明顯降低(P0.01)。經(jīng)過Spearman相關(guān)性分析,在CHB患者組中SI(r=0.438,P=0.004),SF(r=0.585,P0.001)與ALT呈顯著正相關(guān),HEPC與ALB呈顯著正相關(guān)(r=0.422,P=0.006)。Hep G2.215細(xì)胞中鐵蛋白(Ferritin,FER)、TRF和HEPC m RNA和蛋白的表達(dá)水平顯著高于Hep G2細(xì)胞(P0.05),而轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(Transferrin receptor,Tf R)的表達(dá)水平顯著低于Hep G2細(xì)胞(P0.05)。與空載體pUC19轉(zhuǎn)染的HepG2細(xì)胞相比,用pSM2-HBV質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后的HepG2細(xì)胞中FER、TRF和HEPC m RNA和蛋白的表達(dá)水平顯著升高(P0.05),而Tf R的表達(dá)水平顯著降低(P0.05)。與空載體p UC19轉(zhuǎn)染的Huh7細(xì)胞相比,用p SM2-HBV質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后的Huh7細(xì)胞中FER、TRF和HEPC m RNA和蛋白的表達(dá)水平顯著升高(P0.05),而Tf R的表達(dá)水平顯著降低(P0.05)。結(jié)論CHB患者體內(nèi)存在血清鐵代謝紊亂現(xiàn)象,并且CHB患者SI、SF水平與ALT呈顯著正相關(guān)性,提示其與肝臟炎癥嚴(yán)重程度呈顯著正相關(guān)性;HEPC血清水平與ALB水平呈顯著正相關(guān)性,表明HEPC血清水平下降可能與肝細(xì)胞蛋白合成能力下降有關(guān)。在肝細(xì)胞中,HBV可上調(diào)FER,TRF和HEPC的表達(dá),下調(diào)Tf R的表達(dá)。
【圖文】：

28圖 2 41 例 CHB 患者鐵代謝指標(biāo)與肝功能指標(biāo)的關(guān)A. CHB 患者 SI 和 ALT 相關(guān)性分析；B. CHB 患者 SF和 ALB 相關(guān)性分析。Fig. 2 Relationship between the serum levels of ironin the 41 CHB patients.A. Correlation of serum iron concentration with ALTserum ferritin concentration with ALT levels in CHB concentration with albumin levels in CHB patients.

34圖 4 Western blotting 檢測(cè)分析 FER、TRF、TfR 表達(dá)水平。A.使用 Western blotting 分析 pUC19 空載體轉(zhuǎn)染的 HepG2 細(xì)胞（對(duì)照組）和 pSM2-HBV 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的 HepG2 細(xì)胞（瞬時(shí)轉(zhuǎn)染 HepG2 細(xì)胞組）中的 FER, TRF 和 TfR 蛋白表達(dá)水平。B.使用Western blotting 檢測(cè) HepG2（對(duì)照組）和 HepG2.215 細(xì)胞（穩(wěn)定轉(zhuǎn)染組）中的 FER, TRF 和 TfR蛋白表達(dá)水平。C.使用 Western blotting 分析 pUC19 空載體轉(zhuǎn)染的 Huh7 細(xì)胞（對(duì)照組）和pSM2-HBV 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的 Huh7 細(xì)胞（瞬時(shí)轉(zhuǎn)染 Huh7 細(xì)胞組）中的 FER, TRF 和 TfR 蛋白表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R512.62

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