【摘要】：背景 乙型病毒性肝炎具有傳播途徑復(fù)雜,傳染性強(qiáng),發(fā)病率高等特點(diǎn)。不僅可以引起急性肝炎、慢性肝炎,而且與肝纖維化、肝癌的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。慢性乙型肝炎的反復(fù)發(fā)作,經(jīng)久不愈,可轉(zhuǎn)變?yōu)楦卫w維化(LF)。肝細(xì)胞損傷與壞死對(duì)周?chē)菍?shí)質(zhì)細(xì)胞的不斷刺激是肝纖維化持續(xù)發(fā)展的關(guān)鍵點(diǎn),導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)的大量合成和沉積,超過(guò)了肝臟細(xì)胞的降解速度,造成了肝組織結(jié)構(gòu)的破壞和重建,最后發(fā)展為肝硬變。 由于有凋亡相關(guān)基因、肝炎病毒、細(xì)胞分子、自身免疫等多種因素參與,迄今為止乙型病毒性肝炎的治療仍是當(dāng)今世界面臨的難點(diǎn)和熱點(diǎn)。乙型肝炎病毒(HBV)侵入機(jī)體,不僅感染宿主的肝細(xì)胞,同時(shí)參與激活細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞(CTL),通過(guò)直接損害或通過(guò)免疫反應(yīng)引起肝細(xì)胞凋亡或壞死。肝細(xì)胞凋亡是一個(gè)多基因調(diào)控的復(fù)雜過(guò)程,各基因能通過(guò)某些中間環(huán)節(jié)相互影響,共同影響凋亡的實(shí)施。各種細(xì)胞因子(如細(xì)胞色素C.Caspase-3.血清腫瘤壞死因子)通過(guò)復(fù)雜的調(diào)節(jié)機(jī)制在病毒性肝炎、細(xì)胞凋亡、肝纖維化的進(jìn)展中起著重要作用。以往人們并不認(rèn)為凋亡在纖維化生成中起作用,對(duì)引起肝纖維化發(fā)生的肝損傷因素的研究多集中于肝細(xì)胞壞死方面,很少注意到同時(shí)伴發(fā)的肝細(xì)胞凋亡及它在肝纖維化發(fā)病機(jī)制中的作用,然而事實(shí)上肝纖維化過(guò)程中涉及了凋亡反應(yīng)。肝細(xì)胞的凋亡是雙向的,它是機(jī)體對(duì)抗腫瘤、感染及防止自身免疫反應(yīng)的保護(hù)措施,但大量的肝細(xì)胞凋亡常伴有肝細(xì)胞壞死,可引起肝臟結(jié)構(gòu)改變與功能的損傷。防止肝細(xì)胞的凋亡,可以預(yù)防壞死。凋亡抑制劑可用于干預(yù)肝纖維化的發(fā)展。 肝細(xì)胞凋亡可影響肝臟炎癥和纖維化,但是然而在不同程度下肝臟纖維化和炎癥之間變化關(guān)系對(duì)細(xì)胞凋亡影響如何,目前報(bào)道較少。細(xì)胞色素C及Caspase一3是內(nèi)源性、外源性凋亡途徑的重要細(xì)胞凋亡因子,本研究從分子水平對(duì)此疾病進(jìn)行研究,以期通過(guò)研究細(xì)胞色素C. Caspase-3在慢性乙型病毒性肝炎患者不同病理分級(jí)和分期的表達(dá)情況,通過(guò)肝臟炎癥分級(jí)和纖維化分期影響兩種凋亡因子,以期更深一步了解肝臟病理進(jìn)程中肝細(xì)胞凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)變化,分析內(nèi)源性凋亡途徑和外源性凋亡途徑在慢性乙型肝炎中的地位和意義,為慢性乙型肝炎治療提供理論基礎(chǔ)。 目的 觀(guān)察比較細(xì)胞色素C和Caspase-3在乙型病毒性肝炎不同分級(jí)分期中的表達(dá)情況,探討兩種因子在不同肝臟炎癥活動(dòng)程度和纖維增生程度中的變化規(guī)律。 方法 1.病例收集：收集2010年6月至2012年12月在鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院感染科確診為乙型病毒性肝炎并同期進(jìn)行肝組織病理學(xué)檢查的病例,排除合并其他疾病如其他病毒性肝炎、肝硬化失代償期、酒精性肝病、脂肪肝、自身免疫性肝炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化、肝癌；或合并嚴(yán)重的心、腦、肺、腎等臟器實(shí)質(zhì)性病變。另選用10例正常肝組織做對(duì)照。 2.實(shí)驗(yàn)方法：根據(jù)病理科醫(yī)師診斷的不同分級(jí)分期,取肝臟活組織標(biāo)本制作蠟塊,進(jìn)行蘇木素-伊紅HE染色,采用免疫組織化學(xué)SP法,檢測(cè)細(xì)胞色素C和Caspase-3在肝臟的表達(dá)水平,采集圖像后采用軟件分析系統(tǒng)計(jì)算平均灰度值。 3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用SPSS17.0與EXCEL2007統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。采用秩和檢驗(yàn)比較不同病理分級(jí)分期凋亡因子表達(dá)的差異性,采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析法判斷肝細(xì)胞凋亡因子與肝臟病理學(xué)分級(jí)之間的相關(guān)性。 結(jié)果 1.細(xì)胞色素C、Caspase-3在慢性乙型病毒性肝炎肝組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為73%、68.5%,在正常肝組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分20%、20%。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析均有顯著差異(P0.005)。 2.炎癥分級(jí)G0、G1、G2、G3、G4間的細(xì)胞色素C表達(dá)水平經(jīng)秩和檢驗(yàn)提示5組炎癥分級(jí)之間細(xì)胞色素C表達(dá)水平的差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在同一纖維化分期下5組炎癥分級(jí)之間細(xì)胞色素C表達(dá)水平的差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 3.纖維化分期S0、S1、S2、S3、S4間的細(xì)胞色素C表達(dá)水平經(jīng)秩和檢驗(yàn)提示5組纖維化分期之間細(xì)胞色素C表達(dá)水平的差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在同一炎癥分級(jí)下5組纖維化分期之間的細(xì)胞色素C表達(dá)水平的差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 4.炎癥分級(jí)G0、G1、G2、G3、G4間的Caspase-3表達(dá)水平經(jīng)秩和檢驗(yàn)提示5組炎癥分級(jí)之間Caspase-3表達(dá)水平的差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在同一纖維化分期下5組炎癥之間的Caspase-3表達(dá)水平的差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 5.纖維化分期S0、S1、S2、S3、S4間的Caspase-3表達(dá)水平經(jīng)秩和檢驗(yàn)提示5組纖維化分期之間Caspase-3表達(dá)水平的差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在同一炎癥分級(jí)下5組纖維化分期之間Caspase-3表達(dá)水平的差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 6.慢性乙型病毒性肝炎患者肝組織中細(xì)胞色素C、Caspase-3的表達(dá)存在明顯的相關(guān)性(P0.05)。 7. Logistic回歸分析顯示：肝臟炎癥和纖維化都是肝細(xì)胞凋亡危險(xiǎn)因素。 結(jié)論 不同肝臟病理分級(jí)細(xì)胞色素C的表達(dá)水平不同,細(xì)胞色素C與肝臟的炎癥活動(dòng)度和纖維化程度相關(guān)；同時(shí)不同肝臟病理分級(jí)Caspase-3的表達(dá)水平不同,Caspase-3與肝臟的炎癥活動(dòng)度和纖維化程度相關(guān),表明在慢性乙型肝炎中,隨著炎癥或者纖維化程度級(jí)別遞增,都對(duì)外源性凋亡途徑及內(nèi)源性凋亡途徑有明顯促進(jìn)作用,因此內(nèi)源性及外源性凋亡途徑在肝臟病理進(jìn)展中可能起重要作用,為臨床治療提供理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R512.62;R575.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2625759