【摘要】：目的:IL-13通過與IL-13Rα1受體相結(jié)合激活下游IL-13/STAT6信號通路,刺激巨噬細(xì)胞啟動替代活化途徑活化(M2型巨噬細(xì)胞),促進(jìn)促纖維化分子的表達(dá),在組織纖維化(特別是血吸蟲病肝纖維化、肺纖維化、腎纖維化等)中發(fā)揮關(guān)鍵作用。本研究旨在研究柯里拉京通過抑制巨噬細(xì)胞中IL-13/STAT6信號通路及其替代活化,抑制血吸蟲病肝纖維化的作用及作用機(jī)制。方法:在本研究中,我們選擇小鼠巨噬細(xì)胞系A(chǔ)na-1作為細(xì)胞模型;血吸蟲尾蚴感染C57BL/6小鼠,并用吡喹酮?dú)⑺莱上x,制作蟲卵誘導(dǎo)血吸蟲病肝纖維化的動物模型。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中,使用IL-13刺激后給予柯里拉京干預(yù);動物實(shí)驗(yàn)中,吡喹酮有效殺死成蟲后使用柯里拉京干預(yù)。隨后通過real-time qPCR、ELISA、Western Blot等實(shí)驗(yàn)技術(shù)成功測定了IL-13Rα1,PPARγ,KLF4,SOCS1,STAT6,p-STAT6和TGF-β等M2型細(xì)胞因子的mRNA和蛋白表達(dá),并制作組織切片,通過HE和Masson染色以及免疫組化,觀察小鼠肝臟蟲卵肉芽腫結(jié)節(jié)和纖維化程度。結(jié)果:相比造模組,柯里拉京干預(yù)組的PPARγ,KLF4,SOCS1,p-STAT6和TGF-β的表達(dá)量皆顯著降低(p0.01或p0.05),表明柯里拉京對IL-13/STAT6信號通路有顯著的抑制作用。同時,柯里拉京的這種抑制作用顯示出顯著的劑量依賴性(p0.05)。此外,在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中,即使當(dāng)IL-13Rα1表達(dá)量被上調(diào)或下調(diào)時,柯里拉京的這種抗纖維化作用依舊存在。同時,HE染色、Masson染色及肝臟組織切片免疫組化顯示柯里拉京干預(yù)組小鼠的肝纖維化程度和M2巨噬細(xì)胞分布明顯低于模型組(p0.05),可以控制纖維化進(jìn)展。結(jié)論:綜上,柯里拉京可以通過抑制IL-13/STAT6信號通路誘導(dǎo)的M2巨噬細(xì)胞極化來減緩纖維化進(jìn)程,為血吸蟲病肝纖維化提供了一種新的可能治療思路。
【圖文】：

華 中 科 技 大 學(xué) 博 士 學(xué) 位 論 文實(shí)驗(yàn)結(jié)果 柯里拉京對 Ana-1 細(xì)胞的毒性檢測為了研究柯里拉京對Ana-1細(xì)胞的毒性，我們用CCK8實(shí)驗(yàn)檢測了柯里拉京對a-1細(xì)胞活性的影響。通過對不同濃度柯里拉京對Ana-1細(xì)胞活性的影響的分析現(xiàn)，在各實(shí)驗(yàn)濃度下，柯里拉京處理24小時后，柯里拉京處理組的細(xì)胞活性于空白對照組（柯里拉京濃度為0）（p<0.05，Student’s t-test，n=3），且隨著濃度增高，細(xì)胞活性逐漸降低。并當(dāng)柯里拉京濃度為50、100、200、400μg/m間的活性有顯著性差異（p < 0.05, one-way ANOVA, post-hoc: S-N-K method,對細(xì)胞的毒性呈現(xiàn)出較為明顯的劑量依賴性。在本實(shí)驗(yàn)中，我們選取了細(xì)胞0%以上的三個濃度（100、50、25μg/ml）作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)中柯里拉京的作用濃

27圖 4：慢病毒轉(zhuǎn)染上調(diào) Ana-1 細(xì)胞表面 IL-13Rα1。Ana-1 細(xì)胞與慢病毒或空白載體共同培養(yǎng)96 小時后，，檢測 IL-13 Rα1 的轉(zhuǎn)錄及翻譯水平。（A）轉(zhuǎn)染 96 小時后，在熒光顯微鏡下分別在熒光、普通光、熒光+普通光三種條件下觀察 Ana-1 被轉(zhuǎn)染效率，顯示細(xì)胞已被轉(zhuǎn)染成功。（B）實(shí)時 qPCR 檢測轉(zhuǎn)染后 IL-13Rα1 mRNA 表達(dá)量變化。*p<0.01，與空轉(zhuǎn)組或空白對照組相比（Student’s t-test, n=3）。（C）Western Blot 檢測轉(zhuǎn)染后 IL-13Rα1 蛋白表達(dá)量變化。*p<0.01，與空轉(zhuǎn)組或空白對照組相比（Student’s t-test, n=3）。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R532.21;R575.2

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3 趙s

本文編號：2613717