【摘要】：研究背景抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療能夠?qū)滩』颊唧w內(nèi)的病毒載量水平抑制到檢測(cè)線以下,卻不能完全清除患者體內(nèi)的HIV病毒。當(dāng)患者停止服用抗病毒藥物后,短時(shí)間內(nèi)病毒載量將會(huì)反彈,且這一現(xiàn)象已經(jīng)被研究者證實(shí)是由于體內(nèi)HIV儲(chǔ)存庫(kù)的存在。目前關(guān)于在抗病毒治療且病毒抑制的患者體內(nèi),HIV持續(xù)存在的機(jī)制尚不明確,部分研究者認(rèn)為即使患者的病毒載量受到抑制,但HIV的復(fù)制同樣存在于儲(chǔ)存庫(kù)中;另一部分研究者認(rèn)為并不存在病毒復(fù)制,HIV通過(guò)細(xì)胞增殖的方式來(lái)維持其穩(wěn)定性。我國(guó)自2003年開(kāi)始對(duì)艾滋病患者施行免費(fèi)抗病治療以來(lái),艾滋病的發(fā)病率及死亡率均明顯下降。但是隨著治療時(shí)間的延長(zhǎng),患者會(huì)出現(xiàn)一線抗病毒治療失敗、耐藥及其它需要更換二線藥物治療的狀況。而國(guó)內(nèi)關(guān)于長(zhǎng)期進(jìn)行一線抗病毒治療后更換二線藥物繼續(xù)治療長(zhǎng)達(dá)36個(gè)月的研究較少。研究目的1.長(zhǎng)期進(jìn)行抗病毒治療下宿主體內(nèi)HIV的進(jìn)化情況;2.長(zhǎng)期進(jìn)行一線抗病毒治療的艾滋病患者更換二線藥物的治療效果。研究方法1.將6名長(zhǎng)期進(jìn)行抗病毒治療的患者納入研究,提取其抗病毒治療前后共5個(gè)時(shí)間點(diǎn)的RNA和DNA。采用SGA的方法得到單基因序列,分析其系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系、divergence變化和耐藥情況。2.我們將HIV耐藥觀察性隊(duì)列中在2008年6月-2015年6月期間更換二線藥物的304名患者納入研究,同時(shí)將在2012年7月病毒載量1000 copies/ml且繼續(xù)進(jìn)行一線抗病毒治療的46名患者作為對(duì)照組納入研究。分析比較患者在更換二線藥物12、24和36個(gè)月病毒抑制情況、耐藥情況等。研究結(jié)果1.本研究共納入的6名研究對(duì)象中,病毒抑制組(抗病毒治療后病毒載量均50 copies/ml)有4人,抑制失敗組(抗病毒治療后病毒載量均1000 copies/ml)有2名患者;其中包括4名女性患者,2名男性患者,且6人的平均年齡為43.8歲(以進(jìn)入HIV耐藥觀察性隊(duì)列的日期計(jì)算)。由SGA的擴(kuò)增方法得到的各樣本各時(shí)間點(diǎn)的平均序列為24.0條,經(jīng)過(guò)序列的整理平均有15.5條序列納入最后的研究;將本研究中納入研究的675條序列及參考株共同進(jìn)行采用最大似然法(maximum-likehood method,ML)進(jìn)化樹(shù)分析,得出各樣本之間和與實(shí)驗(yàn)室毒株間均無(wú)污染的現(xiàn)象。對(duì)6個(gè)樣本分別構(gòu)建ML進(jìn)化樹(shù)并進(jìn)行組間比較發(fā)現(xiàn):(1)病毒抑制成功組中各個(gè)治療時(shí)間點(diǎn)的序列為隨機(jī)分布,并沒(méi)有隨時(shí)間成簇的現(xiàn)象;(2)在病毒抑制成功組分離得到的序列中發(fā)現(xiàn)有一致性序列,但未發(fā)現(xiàn)與時(shí)間的相關(guān)性。通過(guò)計(jì)算兩組患者各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的divergence并作圖,我們發(fā)現(xiàn):(1)在抗病毒治療成功組的4個(gè)樣本間,抗病毒治療6個(gè)月、12個(gè)月及10年后HIV DNA序列間的divergence與治療前相比基本持平或呈稍微下降的趨勢(shì);(2)在抗病毒治療失敗組的兩個(gè)樣本間,各治療時(shí)間點(diǎn)RNA和DNA序列間的divergence隨治療時(shí)間的延長(zhǎng)而增高,且RNA與DNA間的divergence擬合線并無(wú)差別。根據(jù)擬合線的斜率可得在抗病毒治療失敗組間其進(jìn)化速率為2.0×10-3-2.8×10-3每年。在抗病毒治療成功組中,各個(gè)樣本在抗病毒治療前后均未檢測(cè)出關(guān)于NRTI、NNRTI及PI的耐藥突變位點(diǎn)。在抗病毒治療失敗組中,HIV感染者在抗病毒治療前同樣未檢測(cè)出關(guān)于上述三類抗病毒藥物的耐藥突變位點(diǎn),抗病毒治療后的4個(gè)時(shí)間點(diǎn)均檢測(cè)出不同程度的耐藥情況。2.本部分研究共納入304名長(zhǎng)期進(jìn)行一線抗病毒治療后更換二線藥物繼續(xù)治療的患者及46名持續(xù)進(jìn)行一線抗病毒治療的患者;納入的350名研究對(duì)象中女性共214人(61.1%),男性136人(38.9%);其年齡中位數(shù)為47.2歲。304名更換二線抗病毒治療的患者中,病毒學(xué)失敗的比例在更換二線藥物前,更換二線藥物12、24和36個(gè)月后分別為52.9%、18.5%、14.1%和13.2%(趨勢(shì)性卡方檢驗(yàn)p0.05);其CD4細(xì)胞數(shù)由更換二線藥物前的262(IQR 139-410)cells/μL變化為更換二線藥物12、24及36月后的343(IQR 226-503)cells/μL,394(IQR 248-555)cells/μL 及380(IQR 230-554)cells/μL(p=0.01);在這部分研究對(duì)象中經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)與耐藥的患者相比,不耐藥的患者在更換二線藥物后的病毒學(xué)失敗率更高。180名更換二線藥物前病毒載量≥1000 copies/ml患者的耐藥率在更換二線藥物前及更換二線藥物12、24及36月后分別為79.4%、18.8%、12.6%及7.5%(趨勢(shì)性卡方檢驗(yàn)p0.01)。143名更換二線藥物前發(fā)生耐藥的患者中,針對(duì)NRTI和NNRTI類藥物的耐藥率分別為84.6%和100%,在更換二線藥物36個(gè)月后分別下降為6.7%和8.3%。所有的研究對(duì)象在更換二線藥物前及更換后36個(gè)月內(nèi)均未檢測(cè)到關(guān)于PI類藥物的突變位點(diǎn)。在本研究中我們發(fā)現(xiàn)更換二線藥物后有漏服情況的發(fā)生是更換二線藥物36個(gè)月后病毒抑制失敗的危險(xiǎn)因素。研究結(jié)論1.長(zhǎng)期進(jìn)行抗病毒治療且病毒抑制的患者體內(nèi)并未發(fā)現(xiàn)HIV-DNA的進(jìn)化現(xiàn)象。2.一線抗病毒治療失敗的患者更換二線藥物后其病毒學(xué)抑制率得到顯著的提升。3.服藥依從性是更換二線藥物后治療失敗的主要影響因素。
【圖文】：

逑０００Ｔ逡逑圖１．２研究對(duì)象各時(shí)間序列的ＭＬ進(jìn)化樹(shù)逡逑該進(jìn)化樹(shù)由ＭＥＧＡ邋５．１采用采用最大似然法（ｍａｘｉｍｕｍ－ｌｉｋｅｈｏｏｄ邋ｍｅｔｈｏｄ，邋ＭＬ）的方法構(gòu)建逡逑而成，不同的分支顏色代表不同的樣本及參考株，進(jìn)化樹(shù)中從上往卜＿的樣４、ＩＤ邋４依次為２０、２３０、逡逑１６１、６８５、６９５６、６２１邋和參考株。其中參考株包括：ＨＸＢ２、Ｂ．ＵＳ．１９８５．ＢＡＬ、Ｂ．ＴＨ．１９９６．Ｍ１４９、逡逑Ｂ．ＣＮ．１９９８．ＹＮ９８０２、Ｂ．ＵＳ．１９７９．ＮＹＣ１邋等。逡逑２７逡逑

圖１．７抗病毒治療前后ｄｉｖｅｒｇｅｎｃｅ的變化情況逡逑樣本各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的ｄｉｖｅｒｇｅｎｃｅ由該時(shí)間的核酸與樣本的ＭＲＣＡ計(jì)算所得，，表達(dá)方式為均數(shù)逡逑土標(biāo)準(zhǔn)差，最后通過(guò)直線進(jìn)行擬合
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)疾病預(yù)防控制中心
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R512.91

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2602180