【摘要】：結(jié)核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis,M.tb)是胞內(nèi)感染菌,宿主的天然免疫反應(yīng)一直在抗擊結(jié)核感染中起著至關(guān)重要的作用。三結(jié)構(gòu)域蛋白(tripartite motif,TRIM)家族可作為免疫調(diào)節(jié)蛋白參與機(jī)體的天然免疫應(yīng)答,并且可以通過(guò)多種方式調(diào)控天然免疫的信號(hào)通路,其異常表達(dá)與許多疾病的發(fā)生有關(guān),例如病毒感染、腫瘤和自身免疫性疾病等。最新的研究發(fā)現(xiàn)TRIM家族的一些成員在潛伏結(jié)核感染和活動(dòng)性肺結(jié)核人群中具有差異性表達(dá)。并且它們的表達(dá)在活動(dòng)性肺結(jié)核患者中被下調(diào)。另一方面,有研究表明TRIM蛋白家族部分成員的過(guò)表達(dá)可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移和增殖。目的:篩查可能在結(jié)核性胸腔積液和惡性胸腔積液中表達(dá)存在差異的TRIM蛋白家族成員,驗(yàn)證其作為結(jié)核性胸膜炎診斷及鑒別診斷輔助檢查手段的可能性。同時(shí),探討TRIM4、16、27、32、35、46、47、65、68 9個(gè)基因在結(jié)核感染中的調(diào)控作用。方法:基于先前研究的基礎(chǔ),本研究首次采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)的方法對(duì) TRIM 蛋白家族中 TRIM4、16、27、32、35、46、47、65、68這9個(gè)蛋白在結(jié)核性胸腔積液和惡性胸腔積液中mRNA的表達(dá)水平進(jìn)行了全面系統(tǒng)的分析。隨后進(jìn)一步使用模式菌株恥垢分枝桿菌(Mycobacterium smegmatis,M.sm)感染體外巨噬細(xì)胞系THP-1,構(gòu)建細(xì)胞感染模型,進(jìn)一步驗(yàn)證這9個(gè)TRIM基因的表達(dá)變化。結(jié)果:本研究共納入53例受試者,其中包括結(jié)核性胸腔積液患者32例、惡性胸腔積液患者21例。結(jié)核性胸腔積液TIRM16基因的表達(dá)量為0.0077,明顯低于惡性胸腔積液(0.0000988),p0.0001。其余TRIM蛋白基因表達(dá)水平兩組間差異五統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。受試者操作特性曲線(xiàn)(Receive operating characteristic,ROC)分析TRIM16的診斷效果顯示其具有較好的準(zhǔn)確性,曲線(xiàn)下面積(Area under the curve,AUC)為 0.937。體外感染細(xì)胞實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),TRIM35、TRIM46、TRIM65和TRIM68這4個(gè)基因在表達(dá)水平上表現(xiàn)出了相同的趨勢(shì),即在感染了恥垢分枝桿菌30min后就出現(xiàn)了明顯的下調(diào),在感染后2h和感染后3h開(kāi)始輕微回調(diào)隨即又開(kāi)始逐漸下降一直延續(xù)到感染后12h又開(kāi)始逐漸上升。結(jié)論:TRIM16基因在結(jié)核性胸腔積液患者中的表達(dá)量明顯低于惡性胸腔積液患者,ROC曲線(xiàn)分析TRIM16的診斷效果顯示其具有較好的準(zhǔn)確性,表明,TRIM16基因在結(jié)核性胸膜炎的診斷與鑒別診斷中可能具有一定的潛在價(jià)值。結(jié)核分枝桿菌的模式菌株恥垢分枝桿菌感染體外巨噬細(xì)胞系THP-1后,TRIM35、TRIM46、TRIM65和TRIM68 4個(gè)基因表達(dá)量的變化存在一定的意義,提示其與結(jié)核感染過(guò)程可能有關(guān)。
【圖文】：

逡逑圖２．２實(shí)時(shí)熒光定量ＰＣＲ擴(kuò)增曲線(xiàn)、溶解曲線(xiàn)和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖逡逑２．邋３．邋３．邋２在結(jié)核性胸腔積液和惡性胸腔積液中ＴＲＩＭ基因差逡逑異表達(dá)的情況逡逑在此之前，我們實(shí)驗(yàn)室研究了健康人群、潛伏感染人群、活動(dòng)性肺結(jié)核人群逡逑三者間外周血樣本中７２個(gè)ＴＲＩＭ基因的ＲＮＡ表達(dá)水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)相較于健康逡逑人群和潛伏感染人群，總共有２０個(gè)基因在活動(dòng)性肺結(jié)核患者中的表達(dá)明顯降低。逡逑這些基因在分類(lèi)上大多數(shù)屬于ＴＲＩＭ－Ｃ－ＩＶ亞類(lèi)，其余分別屬于ｃ－ｖｎ亞類(lèi)，Ｃ－Ｉ逡逑亞類(lèi)，Ｃ－Ｖ、Ｃ－Ｘ亞類(lèi)。我們選取其中差異性最大９個(gè)基因，以Ｐ＜０．０５為標(biāo)準(zhǔn)，逡逑發(fā)現(xiàn)在這其中ＴＲＭ１６基因在結(jié)核性胸腔積液和惡性胸腔積液中的表達(dá)最有意逡逑義，其在結(jié)核性胸腔積液中下降，惡性胸腔積液中表達(dá)上調(diào)，而從分類(lèi)上來(lái)看，逡逑ＴＲＭ１６屬于未分類(lèi)的ＴＲＩＭ基因。結(jié)果見(jiàn)表２．２．和圖２．２．逡逑表２．２結(jié)核性胸腔積液患者和惡性胸腔積液患者間ＴＲＩＭ基因的表達(dá)水平逡逑ＴＲＩＭ基因邐結(jié)核組（ｎ＝３２）邐腫瘤組（ｎ＝２１）

圖２．邋３邋ＴＲＩＭ１６基因用于鑒別良惡性胸腔積液的ＲＯＣ曲線(xiàn)逡逑
【學(xué)位授予單位】：北京市結(jié)核病胸部腫瘤研究所
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R521.7

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1 王雅;TRIM蛋白家族在結(jié)核性胸膜炎診斷和結(jié)核病感染中的作用研究[D];北京市結(jié)核病胸部腫瘤研究所;2019年

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本文編號(hào)：2601546