【摘要】：目的:篩選DEx D/H-box家族中可能影響HBV增強子或核心啟動子轉(zhuǎn)錄活性的基因,初步研究DHX15對HBV復(fù)制的調(diào)控作用。方法:1.克隆DEx D/H-box家族基因到表達(dá)質(zhì)粒PCH9,并構(gòu)建由HBV增強子和核心啟動子驅(qū)動的海腎熒光素酶報告質(zhì)粒pcore-Rluc;2.分別將各種DDX表達(dá)質(zhì)粒與pcore-Rluc共轉(zhuǎn)染Hep G2細(xì)胞,篩選影響Rluc熒光素酶活性的DDX家族成員。3.在HepG2細(xì)胞中共轉(zhuǎn)染HBV1.3倍體質(zhì)粒和DHX15表達(dá)質(zhì)粒,通過Western blot檢測DHX15在細(xì)胞中的表達(dá),用Southern blot、Northern blot檢測過表達(dá)DHX15對中HBV復(fù)制水平和轉(zhuǎn)錄水平的影響;4.構(gòu)建HBV增強子與核心啟動子截短突變體,確定DHX15在HBV增強子或核心啟動子上的作用區(qū)域。結(jié)果:1.成功構(gòu)建30種DEx D/H-box家族基因克隆;2.篩選出對HBV增強子/核心啟動子有明顯影響的基因DHX15(P=0.042);3.與對照組相比,過表達(dá)DHX15能促進(jìn)HBV DNA的復(fù)制水平;并且能上調(diào)HBV RNA轉(zhuǎn)錄水平;4.成功構(gòu)建HBV核心啟動子截短突變體,發(fā)現(xiàn)DHX15促進(jìn)HBV的復(fù)制是通過增強子實現(xiàn)的(t=8.292,P=0.0012;t=5.215,P=0.0064)。結(jié)論:過表達(dá)DHX15可通過影響HBV增強子的活性從而促進(jìn)HBV復(fù)制。
【圖文】：

HBV 增強子/核心啟動子活性的 DEx D/H-box RNA 解旋酶HBV 核心啟動子活性相對較弱，而海腎熒光素酶（Renilla Lucif靈敏度高的優(yōu)點，所以我們選用海腎熒光素酶為報告基因。利用 增強子/核心啟動子報告質(zhì)粒，我們進(jìn)行了熒光素酶篩選實驗，以子/核心啟動子活性有明顯影響的DEx D/H-box家族基因。從篩選結(jié)可以看出：DDX18、DDX19B、DDX39A、DDX39B、DDX55 和 有較顯著的正向調(diào)控作用，使海腎熒光素酶活性升高 2 倍以上，作用最為顯著，與對照相比，使 Rluc 活性升高 3 倍以上，用 BonP 值后得到 P=0.042，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，因此我們首先對 DH究。

圖 3 DHX15 過表達(dá)在 HepG2 細(xì)胞中可促進(jìn) HBV 復(fù)制re 3 DHX15 promoted HBV DNAreplication in HepG HepG2 細(xì)胞中過表達(dá)增強 HBV RNA 轉(zhuǎn)錄了 DHX15 對 HBV DNA 復(fù)制具有正向調(diào)控作過增強 HBV RNA 轉(zhuǎn)錄水平所引起的，我們又質(zhì)粒和空載體與 HBV1.3 共同轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染后收orthern blot 檢測。結(jié)果（圖 4）顯示，在 HeBV mRNA 水平升高，提示 DHX15 可以上調(diào) H
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R512.62

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張忠東;成軍;鐘彥偉;楊倩;董菁;楊艷杰;張樹林;;羧肽酶N調(diào)節(jié)乙型肝炎病毒核心啟動子表達(dá)活性的研究[J];世界華人消化雜志;2003年08期

2 曹艷雪;張文惠;安平;卞麗;張麗瑤;尹波;;乙型肝炎病毒前C區(qū)和/或核心啟動子區(qū)突變的臨床意義[J];實用肝臟病雜志;2008年02期

3 張俊;王愛東;申詠梅;石怡珍;崔學(xué)軍;劉增禮;歐陽松應(yīng);;人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶核心啟動子的克隆[J];蘇州大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2009年02期

4 李明，陸長德;真核蛋白編碼基因核心啟動子結(jié)構(gòu)研究進(jìn)展[J];生命的化學(xué)(中國生物化學(xué)會通訊);1995年04期

5 王園園;周艷;鄒淑惠;劉金輝;;乙型肝炎病毒基因組基本核心啟動子變異分析[J];南昌大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2013年03期

6 劉悅暉;范學(xué)工;丁靜娟;;132例乙型肝炎病毒感染者基本核心啟動子變異分析[J];中國感染控制雜志;2009年04期

7 高學(xué)松,成軍,甄真,楊艷杰,黃燕萍,郭江,劉妍,戴久增;β_2-微球蛋白對乙型肝炎病毒核心啟動子轉(zhuǎn)錄活性的調(diào)節(jié)作用[J];世界華人消化雜志;2004年10期

8 徐萍,吳建美,錢績虎;乙型肝炎病毒基本核心啟動子T~(1762)A~(1764)聯(lián)合突變的臨床意義[J];南通醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2004年02期

9 魏強;魏霞飛;甘春楊;張文露;黃愛龍;胡接力;;NR6A1在HepG2細(xì)胞中抑制HBV轉(zhuǎn)錄與復(fù)制的初步研究[J];重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;年期

10 賈因棠;黃彤;劉寶芳;宋紅波;武俊香;;乙型肝炎病毒基本核心啟動子和前C基因序列分析[J];山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2009年04期

相關(guān)會議論文 前9條

1 翟紅林;;基于化學(xué)特征的大腸桿菌核心啟動子分析與預(yù)測[A];第十一屆全國計算（機）化學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2011年

2 錢福初;鄒偉華;秦基取;李棟立;范曉嫻;戴利成;;乙型肝炎表面抗原、抗體共陽性者的病毒基因組S區(qū)、基本核心啟動子區(qū)和前C區(qū)變異分析[A];2015年杭嘉湖感染性疾病學(xué)術(shù)年會暨國家級繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育培訓(xùn)班論文匯編[C];2015年

3 左秀美;秦偉;王芬;周愛紅;魏翠柏;賈建平;;胰島素降解酶基因核心啟動子區(qū)結(jié)構(gòu)研究[A];第四屆全國癡呆與認(rèn)知障礙學(xué)術(shù)研討會及高級講授班論文匯編[C];2015年

4 丁靜娟;王梅;劉悅暉;;乙型肝炎病毒前S、前C、基本核心啟動子變異與肝病進(jìn)展的關(guān)系[A];中華醫(yī)學(xué)會全國第九次感染病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

5 丁靜娟;劉悅暉;王梅;;貴州乙型肝炎病毒前C區(qū)及基本核心啟動子變異分布及意義[A];中華醫(yī)學(xué)會全國第九次感染病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

6 高婧;郭龍華;劉軍;郭淑芳;彭明偉;董長垣;;湖北省乙型肝炎病毒基本核心啟動子BCP及其兩翼序列區(qū)變異特征探討與臨床價值[A];2006年度學(xué)術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2006年

7 白羽;;中藥對HBV增強子Ⅱ和核心啟動子的調(diào)節(jié)作用[A];江西省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會檢驗醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會成立大會暨第一次中西醫(yī)結(jié)合檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)交流會資料匯編[C];2015年

8 朱江;和夫紅;胡松年;于軍;;人體看家基因的界定與分析[A];中國遺傳學(xué)會第八次代表大會暨學(xué)術(shù)討論會論文摘要匯編（2004-2008）[C];2008年

9 張青云;薛世林;周柔麗;;轉(zhuǎn)錄因子SP1在人肝細(xì)胞癌相關(guān)基因LAPTM4B啟動子區(qū)中的調(diào)控研究[A];第四屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會暨第五屆海峽兩岸腫瘤學(xué)術(shù)會議論文集[C];2006年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前3條

1 魯笑欽;hWAPL基因核心啟動子的定位及其與c-Myc蛋白的關(guān)系研究[D];鄭州大學(xué);2017年

2 韓鳳桐;牛Sry基因核心啟動子定位及其基因功能研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

3 羅英英;DDX17調(diào)控HBV復(fù)制的分子機制[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2017年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 楊柳青;DHX15在HBV復(fù)制中的意義及其機制初步研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2018年

2 陳達(dá);鵝AMH基因克隆、核心啟動子鑒定及GATA-4和WT1對其轉(zhuǎn)錄的影響[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

3 黃惠蘭;鵝CYP17/19基因克隆、組織表達(dá)及CYP19核心啟動子區(qū)分析[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

4 郭鵬程;牛EL0VL5基因核心啟動子的確定及其啟動子多態(tài)性影響乳質(zhì)性狀的分子機制[D];吉林大學(xué);2017年

5 高學(xué)松;應(yīng)用噬菌體展示技術(shù)篩選乙型肝炎病毒核心啟動子結(jié)合蛋白[D];河北醫(yī)科大學(xué);2005年

6 睢國寧;牛CMYA1核心啟動子載體構(gòu)建及小鼠早期胚胎制備[D];天津農(nóng)學(xué)院;2016年

7 鄧浩輝;豬IGF1基因啟動子活性分析及其表達(dá)調(diào)控的相關(guān)研究[D];華南農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

8 朱丹丹;牛成肌細(xì)胞高效表達(dá)啟動子的篩選鑒定[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

9 吳冬梅;STGC3基因核心啟動子區(qū)轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件的鑒定[D];南華大學(xué);2014年

10 王耀;乙型肝炎病毒基本核心啟動子變異對啟動子活性及病毒復(fù)制力影響的研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

，

本文編號：2596895