【摘要】：目的對(duì)浙江省2004~2013年分離的54株腦膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis,Nm)進(jìn)行基因分型研究,了解菌株間的遺傳進(jìn)化關(guān)系。方法參照細(xì)菌分子分型和基因組差異公共數(shù)據(jù)庫(Pubmlst)提供的引物與方法,獲得多位點(diǎn)序列分型(Multilocus Sequence Typing,MLST)序列型(Sequence Type,ST)。采用進(jìn)化分析軟件(Splitstree)4、聚類分析軟件(e BURST)V3等處理所得序列數(shù)據(jù),并構(gòu)建遺傳進(jìn)化圖譜。結(jié)果 54株Nm得到21個(gè)STs,其中11個(gè)STs為新發(fā)現(xiàn),主要序列型ST-7和ST-4821分別占29.63%和27.78%。不同血清群其STs/ST-克隆群(Complex)有明顯不同,A群菌株78.95%(15/19)為ST-7/ST-5Complex(15/19);B群菌株STs分散,57.14%(8/14)呈單體存在;C群菌株82.35%(14/17)為ST-4821/ST-4821Complex。不同來源分離株其ST-Complex不同,來自病人及密切接觸者分離株ST-5Complex分別占48.15%(13/27)及33.33%(4/12)、ST-4821Complex分別占40.74%(11/27)及25.00%(3/12),而來自健康帶菌者分離株ST-4821Complex克隆群占40.00%(6/15)。7個(gè)管家基因的核苷酸多態(tài)性(Pi)范圍為0.01298(adk)~0.11100(aro E)。Splitstree 4構(gòu)建徑向系統(tǒng)進(jìn)化樹顯示,浙江省Nm菌株分屬5個(gè)分枝,主要序列型ST-7及ST-4821分別分布于3分枝及2分枝中,4分枝中均為浙江省STs。e BURST V3聚類分析發(fā)現(xiàn),浙江省STs/ST-5Complex基因型相對(duì)穩(wěn)定,但浙江省STs/ST-4821Complex基因型已具遺傳多樣性變化。結(jié)論浙江省Nm以A群78.95%(15/19)ST-7/ST-5Complex和C群82.35%(14/17)ST-4821/ST-4821Complex兩大克隆群占絕對(duì)優(yōu)勢(shì),B群57.14%(8/14)呈單體分散。浙江省A、B、C群均存在ST-4821Complex相同基因型菌株,可能不同血清群之間已產(chǎn)生莢膜轉(zhuǎn)換,其種群間已顯示基因重組進(jìn)化特征,這是中國(guó)首次從A群Nm中檢出ST-4821/ST-4821Complex及ST-5798/ST-4821Complex菌株。
【圖文】：

圖1浙江省21個(gè)STs與全球7大克隆群所屬部分STsSplitstree遺傳進(jìn)化圖譜Figure1TheGeneticEvolutionProfileConstructedbytheSplitsTreeforthe21STsinZhejiangProvincewiththe7ClonalComplexsintheWorld使用eBUＲSTV3軟件，將ST-5Complex所屬克隆群中的STs(ST-7及ST-5084)與全球ST-5Complex其他所屬部分STs進(jìn)行聚類分析，發(fā)現(xiàn)ST-5084為ST-7單位點(diǎn)變異株，ST-7序列周圍已分布有多個(gè)單位點(diǎn)變異株、雙位點(diǎn)變異株，ST-7序列群已形成具一定規(guī)模的基因座群(圖2)。據(jù)Pubmlst數(shù)據(jù)庫統(tǒng)計(jì)(截至2014-06-10)，ST-4821Complex中目前共有85個(gè)STs型別，而這些STs均是在ST-4821的基礎(chǔ)上，經(jīng)過1～3個(gè)基因座的突變和(或)重組衍生而來。使用eBUＲSTV3軟件將ST-4821Complex所屬中的STs(ST-4821、ST-5798、ST-9480及ST-9802)與全球ST-4821Complex其他STs進(jìn)行聚類分析，發(fā)現(xiàn)ST-5798與ST-4821僅有一個(gè)基因座改變，ST-4821已重組衍生出多個(gè)基因座群，而由ST-5798衍生的單位點(diǎn)變異株ST-3200亦已形成一定規(guī)模的基因座群，但浙江省ST-9480及新發(fā)現(xiàn)ST-9802則未在ST-4821Complex聚類群中出現(xiàn)(圖3)。討論采用MLST方法，對(duì)浙江省2004～2013年收集的A、B、C、X、Y和W群Nm進(jìn)行基因分型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，54株Nm37.04%(20/54)和33.33%(18/54)分屬ST-4821Complex及ST-5Complex兩大克隆群，7.41%(4/54)是ST-198Complex克隆群，該結(jié)果與邵祝軍報(bào)道［4］的全國(guó)Nm以A群ST-7/ST-5Com-plex和C群ST-4821/ST-4821Complex兩大克隆群并行流行趨勢(shì)相符。不同年份因收集菌株數(shù)量差異較大，故不宜進(jìn)行逐年比較，但從總體趨勢(shì)來看，2009年以前每年流行株主要以ST-5Complex及ST-4821Complex兩大克隆群為主，但此后幾年因發(fā)病株數(shù)量有限，收集株以ST-4821Complex、ST-11Complex以?

圖2eBUＲSTv3軟件聚類分析浙江省STs/ST-5Complex與全球部分STs/ST-5ComplexFigure2TheClusteringAnalysisoftheSTs/ST-5ComplexfromZhejiangStrainsandPartoftheGlobalStrains圖3eBUＲSTv3軟件聚類分析浙江省STs/ST-4821Complex與全球STs/ST-4821ComplexFigure3TheClusteringAnalysisontheSTs/ST-4821ComplexfromZhejiangStrainsandPartoftheGlobalStrains勢(shì)克隆群為ST-5Complex，其優(yōu)勢(shì)STs為ST-7(78.95%，15/19)。eBUＲSTV3聚類發(fā)現(xiàn)ST-7序列周圍已分布有多個(gè)單位點(diǎn)變異株、雙位點(diǎn)變異株，，已成一定規(guī)模的基因座群，但本研究中僅發(fā)現(xiàn)1株ST-7單位點(diǎn)變異株ST-5084，可見浙江省A群ST-7序列型相對(duì)穩(wěn)定。B群無優(yōu)勢(shì)克隆群，其STs分散，且57.14%(8/14)呈單體存在，其中6株為新發(fā)現(xiàn)STs，未發(fā)現(xiàn)檢測(cè)有歐美4個(gè)高致病性流行ST-8、ST-11、ST-32及ST-44克隆群。C群優(yōu)勢(shì)克隆群為ST-4821Complex，其優(yōu)勢(shì)STs為ST-4821(82.35%，14/17)。據(jù)邵祝軍報(bào)道［4］，ST-4821Complex是國(guó)際上發(fā)現(xiàn)的第7個(gè)能引起爆發(fā)或流行的具有高致病性的C群Nm克隆群，是新發(fā)現(xiàn)和命名的序列群，浙江省于2004年初出現(xiàn)散發(fā)病例。經(jīng)搜索Pubmlst數(shù)據(jù)庫，ST-4821Complex中目前共有85個(gè)STs，eBUＲSTV3聚類發(fā)現(xiàn)ST-5798與ST-4821僅有一個(gè)·312·CHINESEJOUＲNALOFVACCINESANDIMMUNIZATIONVol．21No．32015

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本文編號(hào)：2584601