【摘要】：目的：慢性乙型肝炎病毒感染的發(fā)病機制與機體免疫反應(yīng)關(guān)系密切，近年來關(guān)于CD_4~+CD_(25)~+Treg細胞在HBV感染者中的功能和作用，日益成為研究的焦點。明確Treg細胞對效應(yīng)T細胞及相關(guān)細胞因子的免疫耐受狀態(tài)的調(diào)控機理，對于有效終止病毒持續(xù)感染具有重要意義。FoxP~3是目前公認的CD_4~+CD_(25)~+Treg細胞的最具特異性的轉(zhuǎn)錄因子，通過檢測FoxP~3mRNA的表達情況，可準確反映CD_4~+CD_(25)~+Treg細胞的活性水平。本實驗旨在初步探討慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化患者FoxP~3mRNA表達及血清中IL-12、IL-18水平變化及其意義，，并分析外周血FoxP~3mRNA表達與血清IL-12、IL-18水平的相關(guān)關(guān)系，以及外周血FoxP~3mRNA表達、血清IL-12、IL-18水平與病毒載量的相關(guān)關(guān)系。方法：1.提取健康對照組、慢性乙型肝炎組、乙型肝炎肝硬化組新鮮血液中的總RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA；實時熒光定量PCR（Real-Time PCR）擴增檢測健康對照組、慢性乙型肝炎組、乙型肝炎肝硬化組FoxP~3mRNA的表達水平，并分析外周血FoxP~3mRNA表達與病毒載量的相關(guān)關(guān)系。2.采用ELISA方法測定健康對照組、慢性乙型肝炎組、乙型肝炎肝硬化組血清的IL-12、IL-18水平，并分析血清IL-12、IL-18水平與病毒載量的相關(guān)關(guān)系。3.分析健康對照組、慢性乙型肝炎組、乙型肝炎肝硬化組三組研究對象FoxP~3mRNA表達及IL-12、 IL-18水平的變化及其相關(guān)關(guān)系。4.分別測定并分析健康對照組、慢性乙型肝炎組、乙型肝炎肝炎肝硬化組的血清學(xué)指標，包括ALT、AST、ALB、PTA、HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb、HBV-DNA定量。結(jié)果：1.慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化組的FoxP~3mRNA表達及IL-12、 IL-18水平，和正常健康組比較明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）；2.進一步兩兩比較：健康對照組與乙型肝炎肝硬化組、健康對照組與慢性乙型肝炎組組間FoxP~3的Mann-Whitney U值為0.000，兩組間有統(tǒng)計學(xué)差異（p=0.000，P0.05）；慢性乙型肝炎與乙型肝炎肝硬化組組間：Mann-Whitney U值為225.500，兩組間無統(tǒng)計學(xué)差異（p=0.189，p0.05）；健康對照組與乙型肝炎肝硬化組IL-12的Mann-Whitney U值為24.000，差異有統(tǒng)計學(xué)差異（p=0.000，p＜0.05）；健康對照組與慢性乙型肝炎組Mann-Whitney U值為12.000，（p=0.000，p＜0.05）組間有統(tǒng)計學(xué)差異；慢性乙型肝炎與乙型肝炎肝硬化組間：Mann-Whitney U值為264.000，兩組無統(tǒng)計學(xué)差異（p=0.597，p0.05）；健康對照組與乙型肝炎肝硬化組IL-18的Mann-Whitney U值為7.000，組間有統(tǒng)計學(xué)差異（p=0.000，p＜0.05）；健康對照組與慢性乙型肝炎組：Mann-Whitney U值為36.000，組間有統(tǒng)計學(xué)意義（p=0.025，p＜0.05）；慢性乙型肝炎與乙型肝炎肝硬化組：Mann-Whitney U值為223.000，兩組無統(tǒng)計學(xué)差異（p=0.173，p0.05）。3.采用Spearman相關(guān)系數(shù)方法對慢性乙型肝炎感染者FoxP~3mRNA與IL-12、IL-18水平作相關(guān)性分析，F(xiàn)oxP~3mRNA與IL-12(r=-0.297，P=0.059)，兩者水平無相關(guān)關(guān)系；FoxP~3mRNA與IL-18(r=-0.242，P=0.078)，兩者水平無相關(guān)關(guān)系；4.采用Spearman相關(guān)系數(shù)方法對慢性乙型肝炎感染者IL-12與IL-18作相關(guān)性分析(r=0.828，p=0.000)，兩者之間呈正相關(guān)關(guān)系。5.采用Spearman相關(guān)系數(shù)方法對慢性乙型肝炎感染者病毒載量與FoxP~3mRNA水平作相關(guān)性分析：HBV-DNA與FoxP~3mRNA (r=0.830，P=0.031)，兩者之間呈正相關(guān)關(guān)系；采用Spearman相關(guān)系數(shù)方法對慢性乙型肝炎感染者病毒載量與血清IL-12、IL-18水平作相關(guān)性分析：HBV-DNA與IL-12(r=-0.459， P=0.000)、 HBV-DNA與IL-18(r=-0.328， P=0.015)，HBV-DNA與IL-12和IL-18兩者水平為負相關(guān)關(guān)系，即隨著IL-12、IL-18的升高HBV-DNA呈現(xiàn)下降的趨勢。結(jié)論：1.本實驗發(fā)現(xiàn),慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化患者外周血FoxP~3mRNA表達高于健康對照組(P0.05),并且與HBV-DNA載量呈正相關(guān)關(guān)系，表明FoxP~3mRNA的異常升高(即CD_4~+CD_(25)~+Treg細胞活性增強)抑制了效應(yīng)性T細胞免疫反應(yīng)，導(dǎo)致機體的免疫應(yīng)答能力下降產(chǎn)生免疫耐受,使HBV不能被有效清除引起持續(xù)的感染，促使疾病向慢性化方向發(fā)展，其機制可能為慢性病毒性肝炎患者體內(nèi)的炎性反應(yīng)，產(chǎn)生一些細胞因子刺激Treg細胞的增生而引起FoxP~3mRNA的表達異常。2.慢性乙肝患者血清細胞因子IL-12、IL-18的異常升高可能是Th1/Th2細胞失平衡的結(jié)果,在乙型肝炎慢性化的進程中發(fā)揮作用，參與了病毒性肝炎肝炎肝硬化患者的肝臟炎性損傷的過程。3.在慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化患者中病毒載量與血清中細胞因子IL-12、IL-18為負相關(guān)關(guān)系，表現(xiàn)為隨著血清中細胞因子IL-12、IL-18的升高出現(xiàn)病毒載量的下降。由于細胞免疫的增強，有利于病毒的清除，與此同時由于Th1細胞占優(yōu)勢,增強了CD+8T細胞的活性,也會進一步加重肝細胞的損傷；由此可見IL-12、IL-18參與了機體對HBV的免疫清除過程。4.本研究發(fā)現(xiàn)，外周血FoxP~3mRNA與血清IL-12、IL-18之間并沒有相關(guān)關(guān)系。因此關(guān)于FoxP~3與細胞因子IL-12、IL-18的關(guān)系還有待進一步更深入的研究。
【學(xué)位授予單位】：瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R512.62;R575.2

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本文編號：2577759