【摘要】：目的:研究乙型肝炎相關(guān)性肝癌細(xì)胞Hep3B在ISG15蛋白表達(dá)被干擾后,其增殖、遷移、侵襲、凋亡、周期的變化。方法:1、將表達(dá)shRNA的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入Hep3B細(xì)胞。2、干擾ISG15蛋白表達(dá)前后細(xì)胞增殖能力的改變情況利用CCK-8檢測(cè)試劑及酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測(cè)。3、干擾ISG15蛋白表達(dá)前后細(xì)胞侵襲和遷移能力的變化利用Transwell小室及人造基底膜檢驗(yàn)。4、干擾ISG15蛋白表達(dá)前后細(xì)胞凋亡特點(diǎn)和細(xì)胞周期的改變的檢測(cè)通過流式細(xì)胞儀完成。結(jié)果:1、ISG15蛋白的表達(dá)被干擾后,Hep-3B細(xì)胞的增殖能力明顯地受到抑制(P0.01)。2、干擾ISG15蛋白的表達(dá)導(dǎo)致Hep-3B細(xì)胞的遷移能力、侵襲能力均顯著減弱(P0.01)。3、干擾ISG15蛋白的表達(dá)能促進(jìn)肝癌細(xì)胞凋亡(P0.01),而且以早期凋亡為主。4、ISG15蛋白的表達(dá)被干擾后,處于S期的Hep-3B細(xì)胞比例明顯上升,G1期細(xì)胞比例降低(P0.01);結(jié)合增殖實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,表明細(xì)胞發(fā)生了S期阻滯。結(jié)論:ISG15蛋白與肝癌的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切,它能促進(jìn)Hep3B細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲,能抑制Hep3B細(xì)胞的凋亡。減少ISG15蛋白的表達(dá)可將細(xì)胞周期阻滯于S期。
【圖文】：

第 3 章 結(jié)果3.1 Western Blot 檢測(cè) shRNA 干擾前后乙型肝炎病毒相關(guān)肝細(xì)胞癌細(xì)胞株 Hep-3B 中 ISG15 蛋白的表達(dá)水平轉(zhuǎn)染入 Pgpu/GFP/Neo-ISG15-homo-542、Pgpu/GFP/Neo-ISG15-homo-46、Pgpu/GFP/Neo-shNC 質(zhì)粒后，經(jīng)過 48h 的孵育，表達(dá)相應(yīng)的 shRNA，干擾 ISG15蛋白的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：轉(zhuǎn)入 Pgpu/GFP/Neo-ISG15-homo-542 質(zhì)粒組 ISG15蛋白表達(dá)水平明顯降低，而轉(zhuǎn)入 Pgpu/GFP/Neo-ISG15-homo-46 質(zhì)粒組蛋白表達(dá)水平無(wú)明顯變化（圖 3.1），表明只有 Pgpu/GFP/Neo-ISG15-homo-542 質(zhì)粒表達(dá)的 shRNA 具有明顯的干擾效果。此后的細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)轉(zhuǎn)染所選用的均為Pgpu/GFP/Neo-ISG15-homo-542 質(zhì)粒，其表達(dá)的 shRNA 具有顯著地干擾 ISG15蛋白表達(dá)的能力；轉(zhuǎn)染 Pgpu/GFP/Neo-ISG15-homo-542 質(zhì)粒的細(xì)胞分組命名為shISG15-Hep3B Cell 組或 542 組。

第 3 章 結(jié)果組與非處理組 Hep3B 的增殖能力的無(wú)差別（即差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P>0.05處理 24h 后，，處理組 Hep3B 的增殖能力與處理組相比，開始逐漸降低，組差異且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。本實(shí)驗(yàn)說(shuō)明，Pgpu-ISG15-542 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染開始產(chǎn)生作用，且干擾 ISG15 蛋白表達(dá)能夠抑制 Hep-3B 細(xì)胞的增殖（表 3.2）。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R735.7;R512.62

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 羅冬云;ISG15在食管鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及其與USP18和PKM2的相關(guān)性[D];鄭州大學(xué);2018年

本文編號(hào)：2564131