發(fā)布時間：2019-11-16 22:52

【摘要】：丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(HCV)感染引起的病毒性肝炎。在丙型肝炎患者中大約有一半以上的患者合并有高血脂、高血糖等代謝綜合征相關(guān)癥狀。HCV誘導(dǎo)患者出現(xiàn)胰島素抵抗、高血脂、肝臟脂肪變性等代謝癥狀,而肥胖、胰島素抵抗及肝臟脂肪變性等癥狀有助于HCV的復(fù)制,從而削弱抗病毒藥物的治療效果�？贡透窝姿幬镆种艸CV復(fù)制有助于調(diào)節(jié)代謝,而合并使用胰島素增敏劑能提高抗丙型肝炎藥物的治療效果。針對丙型肝炎合并代謝綜合征的患者,需要同時進行抗病毒和調(diào)節(jié)代謝治療。因此本論文對抗病毒藥物和調(diào)節(jié)代謝藥物分別進行了機制研究。 人類宿主細胞因子APOBEC3G (hA3G)是一種胞嘧啶核苷脫氨酶,其能夠抑制包括人類免疫缺陷病毒1型(HIV-1)在內(nèi)的一系列病毒。在研究hA3G的過程中,發(fā)現(xiàn)有助于hA3G穩(wěn)定的化合物顯著抑制HCV的復(fù)制。由于HCV與HIV不同,為單股正鏈RNA病毒,屬黃病毒科,這提示hA3G也可能是HCV復(fù)制的限制性因子。因此,本論文第一部分首先探索了hA3G在HCV復(fù)制中起到的作用。將外源性hA3G轉(zhuǎn)染入感染了HCV的Huh7.5細胞,HCV的復(fù)制受到抑制；用RNAi下調(diào)內(nèi)源性hA3G的表達導(dǎo)致HCV復(fù)制的增強。外源性HIV-1Vif蛋白能降低細胞內(nèi)hA3G的水平,從而增強HCV增殖。這些結(jié)果提示,hA3G是HCV復(fù)制的限制性因子。由于HIV-1編碼的Vif蛋白能特異性地下調(diào)hA3G的含量,因此,Vif蛋白的存在,有助于HCV的復(fù)制,這可能是HIV-1陽性患者常常出現(xiàn)HIV-1/HCV合并感染的原因之一。用兩個已知的可以提高hA3G穩(wěn)定性的化合物RN-5或IMB-26處理HCV感染的Huh7.5細胞,細胞內(nèi)hA3G的表達水平增加,相應(yīng)的HCV復(fù)制受到抑制。這些化合物并不抑制HCV病毒酶,但卻增加了進入HCV病毒顆粒中的hA3G的水平。但是,應(yīng)用感染克隆測序并沒有在新復(fù)制的HCV基因組里檢測到G→A的高突變率,這表明hA3G對于HCV的抑制作用是基于一個與抗HIV-1作用不同的新的抗病毒機制。進一步分析發(fā)現(xiàn),hA3G和其穩(wěn)定劑在HCV復(fù)制子系統(tǒng)中均對HCV的復(fù)制無影響,提示hA3G對HCV復(fù)制的限制作用可能發(fā)生在HCV復(fù)制周期的早期或晚期。穩(wěn)定hA3G的小分子化合物RN-5即使在大劑量灌胃或腹腔注射處理小鼠后,沒有觀察到明顯的毒副作用。上述所有結(jié)果說明hA3G是HCV復(fù)制的細胞內(nèi)限制性因子并且可能成為藥物靶點。 鹽酸小檗堿(Berberine, BBR)是一種從中草藥中提取出的單體化合物(生物堿)。其多年來被用于控制2型糖尿病患者的血糖水平。在人體和動物模型中,BBR都能夠起到改善肥胖,控制血糖、血脂和肝臟脂肪變性的作用,但是其機制仍然不明確。因此本論文第二部分重在研究BBR改善代謝的機制。本研究,證實BBR在食源性肥胖模型(DIO)小鼠中增加能量消耗。給予小鼠含BBR的食物,小鼠的氧耗量和二氧化碳的產(chǎn)生增加,而其運動量和食物攝入量沒有變化。經(jīng)過BBR治療,小鼠的體重增長下降,肝臟脂肪變性改善,血脂下降,由高脂飼料(HFD)引起的胰島素抵抗也得到改善。在肝臟里,BBR增加SIRT1(Sirtuin1)的蛋白表達和SIRT1蛋白絲氨酸46位(Ser46)的磷酸化、升高氧化型和還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+/NADH)的比率,同時下調(diào)c-Jun氨基末端激酶1(JNK1)的活性。在小鼠的肝臟細胞(1clc7)中,BBR的處理可以時間依賴性地增加SIRT1的蛋白表達和NAD+的水平,降低JNK的活性。在BBR的處理下SIRT1的酶活性提高。在BBR喂養(yǎng)的小鼠中,硬酯酰輔酶A去飽和酶(SCD1)表達受到抑制。在肥胖的野生型小鼠模型里,BBR可以改善肥胖、肝臟脂肪變性與胰島素抵抗等癥狀,而在SIRT1缺陷SIRT1小鼠中,BBR改善肥胖的作用被削弱。這些結(jié)果說明,BBR通過增加能量代謝來抑制肥胖。BBR對代謝的改善作用與SIRT1的激活和SCD1的降低有關(guān)。這些新機制有助于我們理解BBR的藥效,以及開發(fā)新的調(diào)節(jié)代謝藥物。BBR可以阻斷HCV影響代謝的部分機制且副作用小的特點,使其可能成為治療此合并癥的藥物。 上述兩方面研究都從調(diào)節(jié)宿主的狀態(tài)方面入手,來抑制HCV的復(fù)制,但是由于沒有良好的HCV感染的動物模型,所以暫時沒有藥物改善丙型肝炎的體內(nèi)試驗證據(jù),我們希望在建立可行的動物模型后,進一步研究證實。 綜上所述,本論文新發(fā)現(xiàn)了hA3G是HCV復(fù)制的細胞內(nèi)限制性因子并且可能成為新的藥物靶點,拓展了hA3G的研究領(lǐng)域,豐富了抗病毒理論,為尋找新型抗HCV藥物提供理論依據(jù),同時為聯(lián)合用藥提供了新的策略；本論文還發(fā)現(xiàn)了BBR改善代謝的部分新機制,有助于調(diào)節(jié)代謝藥物的研究,同時其也可能成為丙型肝炎合并代謝綜合征治療的候選藥物�？傊�,本論文通過對抗病毒和調(diào)節(jié)代謝藥物兩方面的研究,為丙型肝炎合并代謝綜合征的治療藥物開發(fā)提供了新策略和理論基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R512.63;R589

【共引文獻】

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本文編號：2562041