【摘要】：第一部分大連地區(qū)205例孢子絲菌病的流行病學(xué)調(diào)查 目的：對大連地區(qū)的205例孢子絲菌病進(jìn)行總結(jié)，分析其流行病學(xué)特征。 方法：回顧性分析1998年至2011年就診于大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，并確診為孢子絲菌病患者的臨床資料。 結(jié)果：大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院近14年來孢子絲菌病的患者人數(shù)每年大約15例，未見大幅增長，發(fā)病趨勢平穩(wěn)。女性發(fā)病率略高，男女發(fā)病比率為1:1.14。發(fā)病年齡最小為3歲，最大為83歲，40~69歲的中老年人為主體（74.7%），兒童也占一定比例（10.7%）。冬春季節(jié)是孢子絲菌病的高發(fā)季節(jié)。多數(shù)有外傷史（62.4%）。臨床分型以固定型最常見占51.2%，其次是淋巴管型占37.6%，有1例皮膚播散型不伴有免疫缺陷和基礎(chǔ)疾病。發(fā)病部位以上肢為主（47.8%），其次是面部（37.1%）。固定型多發(fā)生在面部和上肢，淋巴管型多發(fā)生在上肢，播散型表現(xiàn)為全身感染。面部皮損中固定型的比例(69.7％)高于四肢皮損中固定型的比例(44.1％)，由此可見面部相對于四肢更易發(fā)生固定型皮損�；颊咧饕獊碜源筮B周邊地區(qū)的農(nóng)村，以莊河、普蘭店、瓦房店為高發(fā)地區(qū)。 結(jié)論：相對于吉林地區(qū)近幾年的小范圍流行，大連地區(qū)孢子絲菌病發(fā)病趨勢平穩(wěn)，屬于散發(fā)病例。流行病學(xué)特征與國內(nèi)其他報(bào)道相似。報(bào)道1例無免疫異常的皮膚播散型孢子絲菌病。 第二部分我國東北地區(qū)孢子絲菌的分類鑒定與種系發(fā)生特征的研究 目的：對我國東北地區(qū)孢子絲菌病的臨床分離株進(jìn)行分子鑒定和種系發(fā)生分析，了解孢子絲菌復(fù)合體在我國占優(yōu)勢的種類；不同的臨床類型的分離株屬于同種還是異種；吉林地區(qū)的流行病例和黑龍江、大連的散發(fā)病例的臨床分離株屬于同種還是異種。 方法：通過大體菌落特點(diǎn)、顯微鏡下分生孢子特點(diǎn)和溫度雙相性進(jìn)行形態(tài)學(xué)初步鑒定；以鈣調(diào)蛋白基因序列為位點(diǎn)，通過測序的方法對74株臨床分離株進(jìn)行分子鑒定；在此基礎(chǔ)，再用Neighbor-Joining分析法將上述74株和16株文獻(xiàn)報(bào)道的各個(gè)種共同建立孢子絲菌種系發(fā)生樹。 結(jié)果：所有分離株經(jīng)大體菌落特點(diǎn)、顯微鏡下呈花瓣樣的分生孢子、溫度雙相性轉(zhuǎn)變，形態(tài)學(xué)鑒定為傳統(tǒng)意義上的申克氏孢子絲菌。然后對部分鈣調(diào)蛋白（CAL）基因片段進(jìn)行測序并在Genbank數(shù)據(jù)庫上比對，與文獻(xiàn)中已經(jīng)報(bào)道的球形孢子絲菌的模式株AM116908具有99%的相似性，與球形孢子絲菌的模式株AM490354具有100%的相似性，而與申克氏孢子絲菌的模式株AM117437的相似性僅為88%。用Neighbor-Joining分析法基于位點(diǎn)CAL序列對74株臨床分離株和16株文獻(xiàn)報(bào)道的各個(gè)種建立孢子絲菌種系發(fā)生樹，結(jié)果顯示6個(gè)明確的組，即6個(gè)孢子絲菌的種。本研究中來自于中國東北地區(qū)的所有臨床分離株均與已報(bào)道的球形孢子絲菌（AM116908.1和AM399018）聚為一類。而且，球形孢子絲菌又被進(jìn)一步分成2個(gè)亞組：68株臨床分離株與AM116908.1聚為一個(gè)亞組，而且與文獻(xiàn)報(bào)道的我國環(huán)境分離株在同一個(gè)亞組。剩下的6株分離株與AM399018聚為另一個(gè)亞組。 結(jié)論：(1)本研究第一次對中國的孢子絲菌臨床株進(jìn)行種系發(fā)生分析，球形孢子絲菌是目前中國東北地區(qū)主要的致病菌種。(2)孢子絲菌病臨床形式與孢子絲菌的種系發(fā)生的種無明確相關(guān)性。(3)吉林省小范圍流行由球形孢子絲菌引起。(4)在種系發(fā)生上，球形孢子絲菌可進(jìn)一步分成2個(gè)亞組。 第三部分我國球形孢子絲菌的表型特征、體外對中西藥物的敏感性研究 目的：對我國的球形孢子絲菌進(jìn)行表型特征分析，，以便日后在真菌化驗(yàn)室可常規(guī)開展相關(guān)的檢查，迅速鑒定到種。同時(shí)了解球形孢子絲菌體外對抗真菌藥物的敏感性，并探索具有抗孢子絲菌活性的中藥單體，為臨床提供新的輔助治療措施。 方法：（1）將菌株接種在不同的平皿培養(yǎng)基中[燕麥培養(yǎng)基（OA）、玉米粉瓊脂培養(yǎng)基(CMA)、馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基(PDA)、沙氏瓊脂培養(yǎng)基(SDA)]，接種后將培養(yǎng)皿放在30℃溫箱暗處培養(yǎng)21天，比較菌落在不同培養(yǎng)基上形態(tài)變化及生長速度。（2）玻片小培養(yǎng)（CMA）30℃培養(yǎng)10天，光鏡下觀察分生孢子特點(diǎn)。（3）溫度試驗(yàn)：將菌株接種于PDA培養(yǎng)皿，分別置于30℃、35℃、37℃溫箱中暗處培養(yǎng)21天，觀察菌落直徑。（4）對葡萄糖，蔗糖和棉子糖進(jìn)行碳源同化試驗(yàn)，試驗(yàn)在96孔板進(jìn)行。（5）檢測74株孢子絲菌對特比萘芬、伊曲康唑、兩性霉素B、卡泊芬凈的體外敏感性，藥敏試驗(yàn)采用微量液基稀釋法，參照美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)研究所（CLSI）頒布的M38-A2方案，選用孢子絲菌的菌絲相進(jìn)行操作。（6）應(yīng)用上述方法探索3種中藥單體（丁香酚、檸檬醛、肉桂醛）對孢子絲菌的抗真菌活性。 結(jié)果：（1）所有的菌株在4種培養(yǎng)基中的宏觀形態(tài)都是相似的，菌落表面均有皺褶，邊緣有短絨毛。菌落表面產(chǎn)出的黑色素：燕麥培養(yǎng)基＞玉米培養(yǎng)基＞土豆培養(yǎng)基＞沙氏培養(yǎng)基。（2）CMA培養(yǎng)基30℃培養(yǎng)10天后，顯微鏡下不僅見到呈花瓣?duì)罘植嫉陌胪该鞯穆褕A形的分生孢子，還可見到厚壁的深棕色分生孢子，呈球形或近球形，典型呈套袖狀分布。（3）所有菌株的最佳生長溫度是30℃。在PDA上30℃暗處孵育21天后，菌落直徑達(dá)25~45mm，平均直徑是34mm。在PDA上35℃暗處孵育21天后，菌落直徑達(dá)12~15mm，平均直徑是13mm。在PDA上37℃暗處孵育21天后，大多數(shù)菌株顯示限制性生長，直徑平均9mm，有3株例外，不能在37℃生長。（4）碳源同化試驗(yàn)：所有的菌株都能同化葡萄糖和蔗糖，不能同化棉子糖。（5）對孢子絲菌的菌絲相，特比萘芬表現(xiàn)出最好的體外抗真菌活性，MIC值為0.06~0.5μg/ml，GM值為0.1866μg/ml；其次是兩性霉素B, MIC值為2~8μg/ml，GM值為4.8252μg/ml；伊曲康唑和卡泊芬凈的MIC值均較高。每種抗真菌藥對不同臨床類型的球形孢子絲菌的MIC值之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。（6）中藥單體（丁香酚、檸檬醛、肉桂醛）對30株球形孢子絲菌的MIC值的幾何均值分別是709.1481μg/ml，509.0566μg/ml，437.8494μg/ml，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示，檸檬醛和肉桂醛的抗孢子絲菌活性明顯強(qiáng)于丁香酚。 結(jié)論：（1）球形孢子絲菌能產(chǎn)生球形或近球形的著色分生孢子，在PDA上30℃孵育21天菌落直徑小于50mm。（2）球形孢子絲菌能同化蔗糖，不能同化棉子糖。（3）球形孢子絲菌在37℃有的不能生長，有的呈限制性生長。（4）四種抗真菌藥中，特比萘芬顯示最好的體外抗真菌活性，具有最低的MIC幾何均值。球形孢子絲菌對藥物的敏感性與致病的臨床形式無關(guān)。（5）檸檬醛和肉桂醛的抗孢子絲菌活性明顯強(qiáng)于丁香酚。
【圖文】：

表 1 皮損部位與臨床分型的關(guān)系部位 皮膚固定型 皮膚淋巴管型 皮膚播散型a未確定型 合計(jì)肢 45 53 0 0 98肢 4 9 0 0 13部 53 7 0 16 76干 0 3 0 0 3部 1 4 0 2 7部 2 1 0 4 7計(jì) 105 77 1 22 205a皮膚播散型 1 例，皮疹發(fā)生在上肢、下肢、軀干、頸部、枕部。

23圖2 鋼圈小培養(yǎng)圖3 顯微鏡下分生孢子。 A圖可見2種分生孢子；B圖見花瓣樣分生孢子；C圖見套袖狀分生孢子。放大倍數(shù)×400圖4 顯微鏡下可見雪茄形的酵母樣細(xì)胞。A 乳酸酚染色，B 乳酸酚棉蘭染色。放大倍數(shù)×400
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R519.8

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

1 張文娟;肉桂醛抗黃曲霉作用及超微結(jié)構(gòu)觀察的研究[J];北京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1995年05期

2 李建伏;郭茂祖;;系統(tǒng)發(fā)生樹構(gòu)建技術(shù)綜述[J];電子學(xué)報(bào);2006年11期

3 張文平,傅穎媛,謝小梅;檸檬醛、肉桂醛抗曲霉菌作用機(jī)制研究[J];江西醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2003年06期

4 夏建新;王延龍;王平凡;張鳳華;張民夫;金學(xué)洙;;皮膚播散性孢子絲菌病1例[J];臨床皮膚科雜志;2006年11期

5 盧瑞芳,王偉萍,古麗巴哈;大蒜素片體外抑菌實(shí)驗(yàn)[J];新疆中醫(yī)藥;2003年02期

6 許冰;秦作梁;;抗真菌中草藥研究概況[J];云南醫(yī)藥;1984年01期

本文編號(hào)：2547651