發(fā)布時(shí)間：2019-08-29 17:23

【摘要】：研究背景： 乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)感染呈世界性流行,據(jù)報(bào)道,全球有20億人曾感染過(guò)HBV,其中3.5億為慢性感染者。而我國(guó)的慢性HBV感染者有9300萬(wàn),其中慢性乙型肝炎患者有2000萬(wàn)。 HBV感染可以引起,從無(wú)癥狀攜帶到急性肝炎(acute hepatitis B, AHB)、慢性肝炎(chronic hepatitis B, CHB)、肝硬化、肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)以及肝衰竭等一系列疾病譜。其中,慢加急性肝衰竭(acute-on-chronic liver failure, ACLF):在慢性肝病基礎(chǔ)上出現(xiàn)病情的急性加重,臨床表現(xiàn)多樣并且死亡率高,根據(jù)亞太肝病學(xué)會(huì)最新的定義,ACLF是指“在之前已診斷或尚未診斷的慢性肝病基礎(chǔ)上,出現(xiàn)黃疸和凝血功能障礙的急性肝臟損害,并且在發(fā)病4周內(nèi)并發(fā)腹水和/或肝性腦病”。在我國(guó),90%以上的ACLF病例存在HBV感染,稱之為乙型肝炎相關(guān)慢加急性肝衰竭(Hepatitis B related acute-on-chronic liver failure, HB-ACLF)。相對(duì)于龐大的HBV感染人群,HB-ACLF的發(fā)生率雖然相對(duì)較低,但患者病情重,治療費(fèi)用高,預(yù)后不良,死亡率高達(dá)50-90%,肝移植是唯一有效的臨床治療手段,但目前供體來(lái)源異常缺乏,一般患者常常難以實(shí)現(xiàn)。 HB-ACLF的發(fā)生機(jī)理目前仍不明確。一般認(rèn)為,病毒和宿主兩方面的因素都參與了HB-ACLF的發(fā)生。來(lái)自日本的幾項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn),HBV Bj (B1)基因亞型與暴發(fā)性肝炎(Fulminant hepatitis, FH)的發(fā)生相關(guān)。另外,多項(xiàng)研究顯示,前C基因區(qū)(PC)和C基因啟動(dòng)子區(qū)(BCP)的變異與FH的發(fā)生相關(guān)。體外研究結(jié)果顯示,這些病毒變異可能通過(guò)增強(qiáng)HBV的復(fù)制能力和／或下調(diào)HBeAg的表達(dá)而引起肝炎急性加重或重癥化；然而,來(lái)自亞洲以及歐洲的幾項(xiàng)小樣本量調(diào)查研究未發(fā)現(xiàn)HBV BCP/PC變異與FH的發(fā)生相關(guān)。在中國(guó),ACLF發(fā)生率較FH高,其臨床癥狀也不同于FH,后者在AHB的基礎(chǔ)上發(fā)生。近年來(lái),國(guó)內(nèi)不同地區(qū)的幾個(gè)研究小組對(duì)HBV基因型及基因變異與ACLF間的關(guān)系進(jìn)行了探索,結(jié)果不盡相同。來(lái)自北京302醫(yī)院的Ren等發(fā)現(xiàn),與其他CHB患者相比,基因型B、T1753V (C/A/G)、A1762T、G1764A, G1896A和G1899A位點(diǎn)變異在ACLF患者中更為多見(jiàn)。我們之前的研究發(fā)現(xiàn),與其他CHB患者相比,基因型B在ACLF患者中更為多見(jiàn)；在基因型B中,A1762T/G1764A, A1846T及G1896A位點(diǎn)變異率高于其他CHB患者。在病毒基因變異發(fā)生率方面,類似結(jié)果在其他的研究中也有報(bào)道,但未發(fā)現(xiàn)基因型B與ACLF目關(guān)。另外,Yan等從縱向和橫向兩個(gè)方面對(duì)二者的關(guān)系進(jìn)行探索,發(fā)現(xiàn)在縱向研究中,A1846T和G1896A位點(diǎn)變異與ACLF相關(guān)；在橫向研究中,A1846T和C1913A/G位點(diǎn)變異與ACLF相關(guān),但均未發(fā)現(xiàn)基因型B與ACLF相關(guān)。因此,HBV基因型B是否與HB-ACLF的發(fā)生相關(guān),哪些常見(jiàn)的位點(diǎn)變異與lHB-ACLF的發(fā)生相關(guān),目前存在爭(zhēng)議。考慮到這些研究均為單個(gè)中心研究,HBV的基因型分布存在地域差異,在中國(guó)的北方地區(qū),以基因型C為主；而在中國(guó)的南方地區(qū)基因型B更為多見(jiàn),而不同的基因型中位點(diǎn)變異率的發(fā)生情況也存在差異,因此,需要一個(gè)多中心的研究來(lái)闡明HBV基因型及基因變異與ACLF間的關(guān)系。另外,這些因素是如何來(lái)發(fā)揮作用誘導(dǎo)疾病的產(chǎn)生的,目前也不十分清楚。體外研究顯示前C/C基因啟動(dòng)子區(qū)的變異可增強(qiáng)HBV復(fù)制活性,或/和影響HBeAg水平的表達(dá),因此推測(cè)這些變異或許通過(guò)這兩種途徑在肝衰竭的發(fā)生中發(fā)揮重要作用。但是也有研究發(fā)現(xiàn),C/C基因啟動(dòng)子區(qū)的變異對(duì)HBV復(fù)制活性無(wú)明顯影響。因此,關(guān)于前C/C基因啟動(dòng)子區(qū)的變異對(duì)病毒生物學(xué)特征的影響也存在爭(zhēng)議,需要進(jìn)一步的驗(yàn)證。 本研究通過(guò)對(duì)HB-ACLF、重度和輕度慢性乙型肝炎患者(CHB-S和CHB-M)的血清中病毒學(xué)特征進(jìn)行比較分析,闡明HBV基因型及哪些基因變異與慢加急性肝衰竭的發(fā)生有關(guān),并以此為基礎(chǔ),構(gòu)建相應(yīng)的不同基因型、含有不同變異模式的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Huh7細(xì)胞進(jìn)行體外研究,對(duì)這些因素可能的致病機(jī)理進(jìn)行初步探討。 第一章乙型肝炎相關(guān)慢加急性肝衰竭患者的血清中病毒學(xué)特征分析 目的： 比較分析來(lái)自多中心HB-ACLF、重度和輕度慢性乙型肝炎患者(CHB-S和CHB-M)的血清中病毒學(xué)特征,闡明HBV基因型及哪些基因變異與HB-ACLF的發(fā)生有關(guān)。 方法： 自2011年1月至2012年6月,本研究共收集來(lái)自中國(guó)的南部、東部、西部和中部4個(gè)中心的522例患者的血清標(biāo)本,廣東省215例、浙江省147例、四川省100例、湖北省60例；其中包括CHB-M患者231例、CHB-S患者84例、HB-ACLF207例。所有納入的患者,其血清HBsAg日性的持續(xù)時(shí)間均大于6個(gè)月。 HB-ACLF患者的納入標(biāo)準(zhǔn)為：(1)血清總膽紅素(TBIL)171.1μmol/L;(2)凝血酶原活動(dòng)度(PTA)40%；和(3)在慢性肝病的基礎(chǔ)上急性起病,并且在4周內(nèi)出現(xiàn)腹水和/或肝性腦病。 CHB-S患者的納入標(biāo)準(zhǔn)為：(1)血清TBIL85.5μmol/L;或(2)PTA40%,但≤60%；或(3)血清白蛋白(ALB)32g/L；不足以診斷為HB-ACLF。 CHB-M患者的納入標(biāo)準(zhǔn)為：(1)血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)80U/L;和(2)血清TBIL85.5μmol/L. 所有患者均排除以下情況：(1)合并有丙、丁、戊型肝炎病毒或人類免疫缺陷病毒的感染；或(2)合并惡性腫瘤；或(3)自身免疫性疾病。 血清標(biāo)志物檢測(cè)采用化學(xué)發(fā)光免疫分析儀進(jìn)行,HBV DNA水平通過(guò)羅氏實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè),檢測(cè)范圍為1×103-1×109copies/ml。肝功能檢測(cè)包括谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、總膽紅素(TBIL)等。提取血清中的HBV DNA并進(jìn)行PCR擴(kuò)增,采用巢式PCR法分別擴(kuò)增S基因和BCP/PC/C區(qū)序列,擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳鑒定,再用ABI3730測(cè)序儀進(jìn)行序列測(cè)定。用MEGA5軟件對(duì)獲得的測(cè)序結(jié)果進(jìn)行排列,并與GenBank/EMBL/DDBJ數(shù)據(jù)庫(kù)中的A-G7種HBV基因型參考序列進(jìn)行比對(duì),S基因區(qū)序列用于基因分型,BCP/PC/C區(qū)序列用于分析不同變異位點(diǎn)發(fā)生頻率以及與基因型的相關(guān)性。數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS16.0軟件,患者資料中,計(jì)量資料采用One-way ANOVA或Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)進(jìn)行分析；計(jì)數(shù)資料構(gòu)成比采用卡方檢驗(yàn)(Pearson chi-square檢驗(yàn)或Fisher's Exact檢驗(yàn)),多因素分析采用二分類logistic逐步回歸分析法。雙側(cè)P值0.05為統(tǒng)計(jì)學(xué)差異有顯著性。 結(jié)果： 1)三組患者的臨床特點(diǎn)。性別在CHB-M、CHB-S和HB-ACLF三組患者中的差異無(wú)顯著性(P=0.200)。年齡(F=28.869,P0.001)在三組患者中的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,且以慢加急性肝衰竭患者最為年長(zhǎng)。ALT (χ2=35.272, P0.0011)、 AST (χ2=114.053, P0.001)及TBIL (χ2=374.139, P0.001)水平在CHB-M、 CHB-S和HB-ACLF三組患者中依次逐漸升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而ALB(χ2=240.366,P0.001)水平以及HBV DNA (F=22.808, P0.001)和HBeAg陽(yáng)性率(χ2=10.752,P=0.005)在CHB-M、CHB-S和HB-ACLF患者中依次逐漸降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2)三組患者的基因型分布。基因型B在CHB-M, CHB-S和HB-ACLF三組患者中所占的比例分別為49.8%(115/231),52.4%(44/84)和79.2%(164/207),依次逐漸升高；基因型C所占的比例分別為50.2%(116/231),47.6%(40/84),20.8%(43/207),依次逐漸降低；基因型分布在三組患者間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=43.948,P0.001)。 3)各省的患者基因型分布。在四川和湖北省,以B基因型為主；浙江省患者基因型C更為多見(jiàn)；在廣東省,B和C基因型感染者的比例相當(dāng)。在四川和湖北省中,HB-ACLF患者感染B基因型的比例高于CHB患者(84.1%vs73%和90.3%vs82.8%),但是差異無(wú)顯著性(P=0.178和P=0.465)；在廣東和浙江省中,HB-ACLF患者感染B基因型的比例顯著高于CHB患者(84.6%vs60.6%和48.6%vs22.3%),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(分別為χ2=13.492,P0.001；χ2=9.004,P0.001)。 4) HBV BCP/PC/C區(qū)變異發(fā)生率在患者組間的比較。A1762T/G1764A、 A1846T\G1896A、C1913A/G和A2159G六個(gè)位點(diǎn)變異發(fā)生率在三組患者間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,且A1762T/G1764A (x2=10.268, P=0.006)、A1846T(χ2=29.422,P0.001)和G1896A(χ2=31.317,P0.001)變異在CHB-M, CHB-S和HB-ACLF三組患者中的發(fā)生率依次逐漸升高。其余五個(gè)位點(diǎn)T1753V、C1766T、T1768A、G1862T和G1899A變異的發(fā)生率均較低,且在三組患者間無(wú)顯著性差異(P0.05)。 5) HBV BCP/PC/C區(qū)變異發(fā)生率在B和C兩種基因型間不同,A1846T(χ2=22.812, P0.001)、G1896A(χ2=47.359,P0.001)和C1913A/G(χ2=21.506,P0.001)變異在B基因型的發(fā)生率顯著高于C基因型；而T1753V(χ2=18.596,P0.001)、A1762T/G1764A(χ2=30.980, P0.001)和C1766T(χ2=9.992,P=0.002)變異在C基因型中的發(fā)生率顯著高于B基因型。T1768A、G1862T、G1899A和A2159G位點(diǎn)變異率在兩種基因型間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 6) HBV BCP/PC/C區(qū)變異發(fā)生率根據(jù)基因型分組后,在患者組間的比較。在基因型B中,A1762T/G1764A (χ2=20.078, P0.001)、A1846T (χ2=14.502,P=0.010)和G1896A (χ2=9.286,P=0.010)變異率在三組患者間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,且A1762T/G1764A和G1896A變異在HB-ACLF患者中最多見(jiàn)。在基因型C中,除上述四個(gè)位點(diǎn)變異外,C1913A/G (χ2=10.610, P＝0.005)和A2159G(χ2=6.426,P=0.040)變異率在三組患者間的差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,且所有位點(diǎn)變異在HB-ACLF患者中最多見(jiàn)。 7) HBV BCP/PC/C區(qū)變異率較高的六個(gè)變異在不同年齡組的發(fā)生率。整體上看,A1762T/G1764A, A1846T和G1896A位點(diǎn)的變異率在CHB患者中隨著年齡的增長(zhǎng)而逐漸增加,但這種上升趨勢(shì)在HB-ACLF患者中不明顯,另外這四個(gè)位點(diǎn)在絕大多數(shù)年齡組中,其在HB-ACLF患者的變異率高于CHB患者,尤其是在年齡小于30歲的患者中。HB-ACLF患者中C1913A/G和A2159G變異,在絕大多數(shù)年齡組的發(fā)生率均高于CHB患者,并且這兩個(gè)變異的發(fā)生率并未隨著年齡的增長(zhǎng)而升高。且僅在基因型B中,A1762T/G1764A (x2=13.569,P=0.004)、A1846T (x2=14.139, P=0.003)和G1896A (x2=8.434,P=0.038)位點(diǎn)變異率在CHB患者組以及C1913A/G (x2=7.963,P＝0.047)在HB-ACLF患者組的各年齡組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而在基因型C中,未發(fā)現(xiàn)任何位點(diǎn)變異率在患者組中各年齡組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 8)多因素分析結(jié)果顯示,與CHB-M患者相比,年齡(OR值為2.507,95%CI為1.607-3.910,P0.001)、基因型(OR值為4.247,95%CI為2.572-7.014,P0.001)以及A1762T/G1764A(OR值為2.370,95%CI為1.487-3.780,P0.001)、A1846T(OR值為1.842,95%CI為1.185-2.863,P=0.007)和G1896A(OR值為1.617,95%CI為1.031-2.534,P=0.036)變異是HB-ACLF發(fā)生的危險(xiǎn)因素。年齡大于或等于40歲、基因型B以及發(fā)生A1762T/G1764A、A1846T和G1896A變異的患者更易發(fā)生HB-ACLF。 結(jié)論： 1)HBV基因型B在HB-ACLF患者中顯著高于其他兩組患者,提示基因型B與HB-ACLF的發(fā)生相關(guān)。 2) HBV BCP/PC/C區(qū)不同位點(diǎn)的變異存在基因型間的差異,因此比較這些位點(diǎn)變異在不同疾病組的發(fā)生率時(shí)需排除基因型帶來(lái)的影響。 3) HB-ACLF患者中A1762T/G1764A、A1846T和G1896A變異的發(fā)生率在基因型B和基因型C中均高于CHB-M患者,提示這四個(gè)位點(diǎn)變異可能與HB-ACLF的發(fā)生相關(guān)。 4)多因素分析結(jié)果顯示HBV基因型B、A1762T/G1764A雙變異、A1846T和G1896A變異是HB-ACLF發(fā)生的獨(dú)立相關(guān)因素,進(jìn)一步支持上述結(jié)論。這些因素或可作為預(yù)測(cè)CHB預(yù)后的指標(biāo)。 第二章不同基因型、含不同突變位點(diǎn)的1.3拷貝乙型肝炎病毒重組質(zhì)粒的構(gòu)建 目的： 為進(jìn)一步分析上述有意義位點(diǎn)變異株的生物學(xué)特點(diǎn),分別構(gòu)建了不同基因型、含有不同突變位點(diǎn)的1.3拷貝HBV重組質(zhì)粒,為下一步體外實(shí)驗(yàn)提供必要的條件。 方法： 1)以提取的血清中的HBV DNA為模板,設(shè)計(jì)引物,三段法分別擴(kuò)增HBV基因序列片段A (nt1063～1982). B (nt2812～1084)和C (nt1063～2839),分別插入pGEM-T Easy載體,構(gòu)建亞克隆(質(zhì)粒A、B和C)；利用QuikChange(?) XL Site-Directed Mutagenesis Kit對(duì)特定位點(diǎn)進(jìn)行定點(diǎn)突變,獲得突變的質(zhì)粒,后分別經(jīng)限制性內(nèi)切酶雙酶切后獲得帶粘性末端的A、B和C片段(質(zhì)粒A先后經(jīng)EcoT22I、EcoRI雙酶切；質(zhì)粒B先后經(jīng)EcoT22I、EcoO65I雙酶切；質(zhì)粒C先后經(jīng)HindⅢ、EcoO65I雙酶切),與經(jīng)過(guò)EcoRI和HindⅢ雙酶切的pUC19載體相連接、轉(zhuǎn)化、篩克隆獲得陽(yáng)性重組質(zhì)粒。 2)利用限制性內(nèi)切酶EcoRI和HindⅢ進(jìn)行雙酶切,對(duì)重組質(zhì)粒進(jìn)行初步鑒定；另外,采用直接測(cè)序法對(duì)插入片段DNA進(jìn)行測(cè)序做進(jìn)一步鑒定。 結(jié)果： 在3株病毒的基礎(chǔ)上共構(gòu)建8個(gè)pUC-HBV1.3拷貝重組質(zhì)粒,2株B基因型(其中一株病毒有四個(gè)質(zhì)粒,分別含有nt1762/1764和nt1896位點(diǎn)的野生型和／或突變型不同組合；另一株病毒有2個(gè)質(zhì)粒,分別含有nt1846A或nt1846T)和1株C基因型(有兩個(gè)質(zhì)粒,分別含nt2159A或nt2159G),經(jīng)酶切和核苷酸序列測(cè)定結(jié)果均與預(yù)期相符,并且與相應(yīng)的野生型質(zhì)粒相比,無(wú)其他突變位點(diǎn)。 結(jié)論： 經(jīng)體外突變重組,成功構(gòu)建了不同基因型、含有不同變異位點(diǎn)的1.3拷貝HBV全基因組質(zhì)粒。 第三章不同基因型、含不同突變位點(diǎn)的1.3拷貝乙型肝炎病毒重組質(zhì)粒體外轉(zhuǎn)染細(xì)胞模型的相關(guān)生物學(xué)特征觀察 目的： 分別比較突變株和相對(duì)應(yīng)的野生株在體外細(xì)胞學(xué)水平上的生物學(xué)特性,試圖初步觀察它們是如何來(lái)影響CHB患者臨床變化,從而為HB-ACLF的發(fā)病機(jī)理提供視角。 方法： 1)利用QIAGEN Hispeed midi kit中量質(zhì)粒抽提試劑盒提取已構(gòu)建好的質(zhì)粒,以及pSEAP質(zhì)粒。 2)Huh7細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng)后,按1.5×106細(xì)胞/每孔接種至6孔細(xì)胞培養(yǎng)皿中,待細(xì)胞融合度為80～90%時(shí),利用Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染試劑(5u1),分別將質(zhì)粒(2ug)和pSEAP報(bào)告基因質(zhì)粒(0.1ug)共轉(zhuǎn)染,并設(shè)置空白對(duì)照。 3)利用SEAP試劑盒檢測(cè)細(xì)胞上清中分泌性堿性磷酸酶(SEAP)的表達(dá),以此平衡各組轉(zhuǎn)染效率,并以相應(yīng)的野生型質(zhì)粒為對(duì)照換算相關(guān)結(jié)果。收集轉(zhuǎn)染后72小時(shí)的細(xì)胞培養(yǎng)上清檢測(cè)HBeAg水平。收集轉(zhuǎn)染后72小時(shí)的細(xì)胞,抽提HBV復(fù)制中間體,Southern印跡雜交檢測(cè)HBVDNA復(fù)制中間體。結(jié)果： 1)細(xì)胞內(nèi)HBV的復(fù)制活性：與相應(yīng)的野生株相比,轉(zhuǎn)染不同變異模式的重組質(zhì)粒對(duì)細(xì)胞內(nèi)HBV的復(fù)制無(wú)明顯影響。 2)細(xì)胞培養(yǎng)上清中HBeAg水平：以相應(yīng)的野生株為對(duì)照,發(fā)生G1896A單獨(dú)變異或聯(lián)合A1762T/G1764A雙變異后HBeAg表達(dá)缺失,而單獨(dú)發(fā)生A1762T/G1764A雙變異的,HBeAg水平下降至野生株的65%左右：引進(jìn)A1846T變異后,HBeAg水平無(wú)明顯改變；引進(jìn)A2159G變異后,HBeAg水平較野生株上調(diào)17%左右。 結(jié)論： 1)轉(zhuǎn)染不同變異模式的重組質(zhì)粒對(duì)細(xì)胞內(nèi)HBV復(fù)制活性的影響不明顯。 2) G1896A變異可導(dǎo)致HBeAg表達(dá)缺失；A1762T/G1764A變異僅部分下調(diào)HBeAg水平；A1846T變異對(duì)HBeAg水平影響不明顯；A2159G變異對(duì)HBeAg水平有輕微上調(diào)作用。
【圖文】：

第二章不同基因型、含不同突變位點(diǎn)的1. 3拷貝乙型肝炎病毒質(zhì)粒的構(gòu)建IAprecipitator,插入活塞快速持續(xù)加壓以干燥DNA，并重復(fù)該步驟；(10)換用新的 5ml 吸管，移除活塞后，接上 QIAprecipitator, QIApre口接無(wú)菌1.5mlEP管，在吸管中加入1 ml Buffer TE,插入活塞持續(xù)NAo取質(zhì)粒DNAlOul分裝至干凈1.5mlEP管，，用來(lái)進(jìn)行質(zhì)粒DNA濃測(cè)定；剩下質(zhì)粒-20°C保存?zhèn)溆谩?研究結(jié)果2.1 HBV基因片段的擴(kuò)X椑靡鋃訮1-P2擴(kuò)增HBV全基因序列（約3.2Kb)，凝膠電泳結(jié)果顯示擴(kuò)增的結(jié)果相符（見(jiàn)圖2-1)1 Kb Ladder

圖2-2 HBV基因序列A、B和C片段PCR擴(kuò)增圖Fig. 2-2 Amplification of A，B and C fragments of HBV by PCR注：MU【為DNA標(biāo)準(zhǔn)分子量，片段A大小約900bp、片段B大小約為1.4Kb，片段C約 1.8Kb。Note: Mill is the DNA marker，A fragment size is about 900bp; B fragment size is about 1.4fragment size is about 1.8Kb.2.2.2含有HBV目的基因片段的重組質(zhì)粒將目的基因片段，分別插入至pGEM-T Easy載體，構(gòu)建亞克�。煌ㄟ^(guò)菌進(jìn)行陽(yáng)性克隆的蹄選（見(jiàn)圖2-3)，并且將陽(yáng)性克隆送測(cè)序進(jìn)行序列鑒定。2000bp、 ■‘士““：士-士N '，8oobp ‘
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R512.62;R575.3

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 ;Gene heterogeneity of hepatitis B virus isolates from patients with severe hepatitis B[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2005年04期

本文編號(hào)：2530653